本发明专利技术提供了一种重组融合蛋白TIGIT‑Fc及其抗移植排斥反应的应用。该线性串联多肽能够诱导特异性T细胞应答发挥免疫保护作用。该重组融合蛋白TIGIT‑Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。编码所述重组融合蛋白TIGIT‑Fc的核苷酸序列如SEQ.ID.NO：2所示。本发明专利技术公开的重组融合蛋白TIGIT‑Fc，其可以通过干预CD226/TIGIT‑CD155信号通路有效的调控巨噬细胞极化，有助于诱导同种异体移植物耐受。
A recombinant fusion protein TIGIT-Fc and its application in anti graft rejection
The invention provides a recombinant fusion protein TIGIT Fc and its application in resisting graft rejection. The linear tandem polypeptides can induce specific T cell responses and play an immune protective role. The amino acid sequence of the recombinant fusion protein TIGIT Fc is shown in SEQ ID NO:1. The nucleotide sequence of the recombinant fusion protein TIGIT Fc is encoded as shown in SEQ.ID.NO:2. The recombinant fusion protein TIGIT_Fc disclosed in the present invention can effectively regulate macrophage polarization by interfering with the CD226/TIGIT_CD155 signaling pathway and help to induce allograft tolerance.
【技术实现步骤摘要】
一种重组融合蛋白TIGIT-Fc及其抗移植排斥反应的应用
本专利技术属于生物医药
，特别涉及一种重组融合蛋白TIGIT-Fc及其抗移植排斥反应的应用。
技术介绍
器官移植是挽救终末期器官衰竭患者生命、改善生存质量重要的、甚至唯一的治疗手段。自20世纪80年代以来，器官移植领域飞速发展，肾、心、肝、胰腺与胰岛、甲状旁腺、肺、骨髓、角膜等组织是目前常用的实体移植器官，发达国家的肾移植手术已成为良性终末期肾病的首选常规疗法，手术操作已不再是限制器官移植术开展的主要问题。得益于医疗技术的进步和广谱免疫抑制药物的广泛使用，术后第一年内的移植物失功现象已经比较少见，90％以上的移植物都可以获得良好的功能性存活。尽管不同组织器官移植的预后不同，但异体排斥反应却是所有受术患者需要终生面对的问题。围手术期需要大剂量免疫抑制剂冲击治疗以抑制急性排斥反应，同时也带来了严重的全身毒副反应。为了让移植物长期存活，一般情况下还需要终生应用免疫抑制药物，这导致了患者容易罹患移植术后新发肿瘤、机会感染、代谢综合征、高尿酸血症、心脑血管疾病等并发症，不但威胁健康，还造成额外的经济负担。而且，现在临床常用的免疫排斥药物主要针对急性移植排斥，并不能有效的预防慢性排斥，受者仍要面对移植物逐渐纤维化、慢性失功的困境。因此，探索参与移植排斥反应调控的机制、开发新的免疫干预策略以提高移植器官存活率、减轻移植患者生理、心理、经济负担，始终是器官移植领域的研究重点之一。2015年在美国费城举办的美国器官移植年会上，从事组织器官移植领域工作的临床和基础研究人员报道了相关研究进展，主动诱导临床免疫耐受已经从动物实验开始转向临床实际应用；扩增Treg细胞的技术发展迅速，可以通过药品生产质量管理规范(GMP标准)技术来进行制造；同时，越来越多的研究聚焦于移植免疫分子标志物和新的分子靶点的开发。机体的免疫应答、免疫调控是极为复杂的网络系统。在移植物耐受机理研究和临床治疗措施研发领域，基于免疫分子和免疫细胞的生物治疗方案是其中重要环节，其中特别是Treg细胞和M2型极化的巨噬细胞，以其强大的免疫抑制功能受到广泛的关注。TIGIT分子是细胞膜上一种重要的抑制型受体，已知的功能主要参与调控淋巴细胞的分化与杀伤、细胞间黏附等细胞免疫学过程。随着研究的深入与实验技术手段的发展，该分子在多种免疫细胞上新的功能和调控效应不断被发现，在临床应用、特别是肿瘤和炎症相关疾病的机制研究方面获得了越来越多的重视。TIGIT的主要配体是CD155分子，同时CD155还与CD226、CD96两个分子存在相互作用。在同一细胞表面，3个分子竞争性结合同一配体CD155，CD155、CD96和TIGIT胞质区含有ITIM基序，可传递抑制性信号，CD226传递活化性信号，构成了复杂的调控网络。利用siRNA或者特异性mAb阻断CD155分子的信号，可以调控巨噬细胞等抗原提呈细胞内GATA3和CREB等多种转录因子的表达，从而影响免疫细胞的发育分化、增殖杀伤和细胞因子分泌等生物学功能。近年来，TIGIT分子的日益受到广泛关注，其在临床实践中的机制和应用研究也日渐深入。TIGIT分子通过与其配体相互作用影响免疫突触形成、细胞间黏附，调控造血发育和免疫细胞的分化与杀伤等生物学过程，参与了多种类型临床疾病的发生发展。TIGIT分子高表达于T细胞表面，在抗肿瘤效应方面的研究一直是关注的热点。在共刺激分子调控CTL细胞与肿瘤治疗关系方面，CTLA-4和PD-1最早获得关注，抗体和重组蛋白等相关的生物治疗制剂已经进入临床应用。但实际应用中仍有相当比例的患者没有达到理想的治疗效果，提示仍然需要开展更深入的研究，探寻更多共刺激分子调控机制。Johnston等人研究发现，肿瘤细胞表面高表达的CD155分子结合TIGIT后抑制了CD8+T细胞的杀伤功能，利用抗体阻断TIGIT的结合则可以有效逆转这一现象。TIGIT抗体和抑制剂一类的药物在恶性肿瘤的治疗中已经获得较多的研究。但是，与之相反的是，对于移植排斥的治疗，则需要干预TIGIT/CD226-CD155信号平衡，通过增强TIGIT的信号，促进CD155阳性巨噬细胞向M2型极化，在免疫识别阶段抑制抗原提呈细胞的活化。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种重组融合蛋白TIGIT-Fc及其制备方法和抗移植排斥反应的应用。本专利技术公开了一种重组融合蛋白TIGIT-Fc，该重组融合蛋白TIGIT-Fc的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。编码所述重组融合蛋白TIGIT-Fc的核苷酸序列如SEQ.ID.NO：2所示。本专利技术还公开了上述重组融合蛋白TIGIT-Fc作为移植排斥反应抑制剂的应用。本专利技术还公开了上述重组融合蛋白TIGIT-Fc在制备防治移植排斥反应药物中的应用。优选地，所述的药物为通过干预CD226/TIGIT-CD155信号通路调控巨噬细胞极化诱导同种异体移植物耐受的药物。优选地，所述的药物为上调巨噬细胞IL-10和Arg1(包括但不限于)表达的药物。优选地，所述的药物下调iNOS、IL-12p40、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL6及IL-1β因子(包括但不限于)表达的药物。优选地，所述的药物为抑制巨噬细胞胞内SHP-1分子的磷酸化，通过ERK1/2-MSK1通路增加CREB核转位，促进IL10转录的药物。优选地，所述的药物为促进Treg分化、抑制CD4+Th细胞增殖的药物。优选地，所述的药物为能够提高Treg细胞比例，降低M1型巨噬细胞比例、增加M2型巨噬细胞比例的药物。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术公开的重组融合蛋白TIGIT-Fc，其可以通过干预CD226/TIGIT-CD155信号通路有效的调控巨噬细胞极化，有助于诱导同种异体移植物耐受。利用体外培养LPS刺激巨噬细胞模型，通过流式细胞术、RT-PCR、Luminex、WB和免疫荧光染色等实验手段，检测TIGIT-Fc重组蛋白对巨噬细胞极化的影响及IL-10分泌的信号通路。结果显示：TIGIT-Fc能够显著上调巨噬细胞IL-10和Arg1表达，下调iNOS、IL-12p40、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL-6、IL-1β等细胞因子水平，促进其向M2型极化；其机制在于TIGIT-Fc可抑制巨噬细胞胞内SHP-1分子的磷酸化，通过ERK1/2-MSK1通路增加CREB核转位，促进IL10转录。检测TIGIT-Fc预处理巨噬细胞对T细胞增殖及调节性T细胞分化的影响，发现TIGIT-Fc预处理的巨噬细胞抑制CD4+T细胞向Th1、Th17分化，促进向Treg分化，抑制CD4+Th细胞增殖。在C57/BL6-Balb/c小鼠同种异体带血管皮瓣移植模型上，观察TIGIT-Fc对异体移植物排斥反应的调控；检测宿主Treg比例、巨噬细胞极化以及淋巴细胞对供体或第三方抗原的反应性。实验发现，TIGIT-Fc处理可以显著延长移植物存活时间，提高Treg细胞比例，M1型巨噬细胞比例降低、M2型比例增加；受体淋巴细胞对供体抗原反应性显著下降，而对第三方抗原反应性无显著差异；排斥终点血清中IL-12p70、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL-6、IL-1β、IL-17A显著本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组融合蛋白TIGIT‑Fc，其特征在于，该重组融合蛋白TIGIT‑Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
【技术特征摘要】
1.一种重组融合蛋白TIGIT-Fc，其特征在于，该重组融合蛋白TIGIT-Fc的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.如权利要求1所述的重组融合蛋白TIGIT-Fc，其特征在于，编码所述重组融合蛋白TIGIT-Fc的核苷酸序列如SEQ.ID.NO：2所示。3.权利要求1所述的重组融合蛋白TIGIT-Fc作为移植排斥反应抑制剂的应用。4.权利要求1所述的重组融合蛋白TIGIT-Fc在制备防治移植排斥反应药物中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物为通过干预CD226/TIGIT-CD155信号通路调控巨噬细胞极化诱导同种异体移植物耐受的药物。6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：庄然，张圆，张栋梁，谢建刚，胡伟，张赟，方亮，李琦，金伯泉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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