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一种抑制WSSV感染的Cq-Ns1abp基因及其蛋白抗病毒活性应用制造技术

技术编号:19000622 阅读:56 留言:0更新日期:2018-09-22 05:22
一种抑制WSSV感染的Cq‑Ns1abp基因及其蛋白抗病毒活性应用,涉及白斑综合征病毒。将Cq‑Ns1abp基因连接到原核表达载体pMal‑C2x中,构建红螯螯虾抗WSSV感染调控因子pMal‑C2x‑Cq‑Ns1abp重组表达载体;Cq‑Ns1abp基因产物包含N端BTB结构域和C端Kelch结构域蛋白及全长蛋白;将所得重组表达载转化体分别导入宿主细胞,诱导表达得表达产物,再通过亲和层析获得较高纯度的rCq‑Ns1abp重组蛋白。由于Cq‑Ns1abp对WSSV感染具有抑制作用,对虾类抗病毒免疫具有重要作用,因此红螯螯虾抗WSSV感染调控因子在制备抗病毒感染药物和动物抗病饲料添加剂中应用。

Antiviral activity of Cq-Ns1abp gene and its protein inhibiting WSSV infection

An application of Cq_Ns1abp gene and its protein for inhibiting WSSV infection relates to leukoplakia syndrome virus. The Cq_Ns1abp gene was linked to the prokaryotic expression vector pMal_C2x to construct the recombinant expression vector pMal_C2x_Cq_Ns1abp, the product of Cq_Ns1abp gene contained the N-terminal BTB domain, the C-terminal Kelch domain protein and the full-length protein, and the recombinant expression vector was introduced into the host cells respectively. The recombinant protein rCq_Ns1abp was obtained by affinity chromatography. Because Cq_Ns1abp can inhibit WSSV infection and play an important role in shrimp antiviral immunity, Red Crayfish anti-WSSV infection regulatory factors are used in the preparation of anti-viral drugs and animal anti-disease feed additives.

【技术实现步骤摘要】
一种抑制WSSV感染的Cq-Ns1abp基因及其蛋白抗病毒活性应用
本专利技术涉及白斑综合征病毒,尤其是涉及一种抑制WSSV感染的Cq-Ns1abp基因及其蛋白抗病毒活性应用。
技术介绍
白斑综合征病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)是目前虾类养殖中最严重的病毒性疫病病原。WSSV具有非常广泛的宿主范围和对甲壳类动物强烈的致病性,能够感染对虾、螯虾、蟹和龙虾等[1,2],已成为水产甲壳动物养殖的主要障碍,对水产甲壳动物养殖业造成严重的经济损失。迄今为止,依然缺乏治疗WSSV病害的有效药物。甲型流感病毒非结构蛋白NS1-A结合蛋白(NS1ABP)在人类中被首次报道,因其能够结合甲型流感病毒的非结构性蛋白NS1-A而被命名[3]。Hela细胞中报道的Ns1abp蛋白含有N-末端BTB(bric-a-brac,tramtrack,broadcomplex)/POZ(poxvirusesandzincfingers)结构域和约50个氨基酸的五个Kelch样串联重复元件。人Kelch重复结构域是最常见的底物结合结构域,人类基因组含有超过95个含BTB-Kelch结构域的蛋白质[4]。研究表明,Ns1abp还参与调控甲型流感病毒mRNA的选择性剪接,在甲型流感病毒基因表达中发挥重要作用[5]。哺乳动物细胞Ns1abp与剪接组装因子SC35共定位于细胞核中,病毒感染会破坏该定位,使之重新定位于整个核质中。果蝇和NIH3T3细胞的Ns1abp通过其Kelch结构域在细胞质中与肌动蛋白共定位并结合[6,7],并在细胞骨架重排中发挥重要作用。此外,A549细胞Ns1abp在流感病毒感染过程中具有抗凋亡作用[8]。对虾能够利用细胞凋亡途径防御WSSV的感染[9],然而,在甲壳类动物中关于Ns1abp的研究基本上还未见报道,Ns1abp是否存在于低等动物中,以及是否参与WSSV的感染均不清楚。参考文献:1.SundarRajN,NathigaNambiKS,AbdulMajeedS,TajuG,VimalS,FarookMA,etal.Highefficacyofwhitespotsyndromevirusreplicationintissuesoffreshwaterrice-fieldcrab,Paratelphusahydrodomous(Herbst).JFishDis.201235:917-25.2.JiravanichpaisalP,BangyeekhunE,SoderhallK,SoderhallI.ExperimentalinfectionofwhitespotsyndromevirusinfreshwatercrayfishPacifastacusleniusculus.DisAquatOrgan.200147:151-7.3.WolffT,O'NeillRE,PaleseP.NS1-Bindingprotein(NS1-BP):anovelhumanproteinthatinteractswiththeinfluenzaAvirusnonstructuralNS1proteinisrelocalizedinthenucleiofinfectedcells.JVirol.199872:7170-80.4.Perez-TorradoR,YamadaD,DefossezPA.Borntobind:theBTBprotein-proteininteractiondomain.Bioessays.200628:1194-202.5.TsaiPL,ChiouNT,KussS,Garcia-SastreA,LynchKW,FontouraBM.CellularRNAbindingproteinsNS1-BPandhnRNPKregulateinfluenzaAvirusRNAsplicing.PLoSPathog.20139:e1003460.6.SasagawaK,MatsudoY,KangM,FujimuraL,IitsukaY,OkadaS,etal.IdentificationofNd1,anovelmurinekelchfamilyprotein,involvedinstabilizationofactinfilaments.JBiolChem.2002277:44140-6.7.AdamsJ,KelsoR,CooleyL.Thekelchrepeatsuperfamilyofproteins:propellersofcellfunction.TrendsCellBiol.200010:17-24.8.OthumpangatS,NotiJD,BlachereFM,BeezholdDH.Expressionofnon-structural-1AbindingproteininlungepithelialcellsismodulatedbymiRNA-548anonexposuretoinfluenzaAvirus.Virology.2013447:84-94.9.WangPH,WanDH,ChenYG,WengSP,YuXQ,HeJG.CharacterizationoffournovelcaspasesfromLitopenaeusvannamei(Lvcaspase2-5)andtheirroleinWSSVinfectionthroughdsRNA-mediatedgenesilencing.PLoSOne.20138:e80418.
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供红螯螯虾抗WSSV感染调控因子(Cq-Ns1abp)的基因序列。本专利技术的第二目的在于提供红螯螯虾抗WSSV感染调控因子(Cq-Ns1abp)的氨基酸序列。本专利技术的第三目的在于提供红螯螯虾抗WSSV感染调控因子(Cq-Ns1abp)的应用。所述红螯螯虾抗WSSV感染调控因子命名为Cq-Ns1abp。所述红螯螯虾抗WSSV感染调控因子的基因序列为:所述红螯螯虾抗WSSV感染调控因子的氨基酸序列为:所述红螯螯虾(Cheraxquadricarinatus)抗WSSV感染调控因子的制备方法包括以下步骤:1)将Cq-Ns1abp基因连接到原核表达载体pMal-C2x中,构建红螯螯虾抗WSSV感染调控因子pMal-C2x-Cq-Ns1abp重组表达载体;所述Cq-Ns1abp基因产物包含N端BTB结构域和C端Kelch结构域蛋白及全长蛋白;2)将步骤1)所得重组表达载转化体分别导入宿主细胞E.coli(BL21:DE3),并进行诱导表达,得表达产物;在步骤2)中,所述诱导表达的条件可为0.1mM硫代半乳糖苷(IPTG)、诱导温度16℃、诱导时间20h。3)分离纯化步骤2)得到的表达产物,通过亲和层析获得较高纯度的rCq-Ns1abp重组蛋白。在步骤3)中,所述rCq-Ns1abp重组蛋白可包括rCq-Ns1abp-BTB、rCq-Ns1abp-Kelch及rCq-Ns1abp-Full-length等。由于所述Cq-Ns1abp对WSSV感染具有抑制作用,对虾类抗病毒免疫具有重要作用,因此红螯螯虾抗WSSV感染调控因本文档来自技高网
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一种抑制WSSV感染的Cq-Ns1abp基因及其蛋白抗病毒活性应用

【技术保护点】
1.红螯螯虾抗WSSV感染调控因子的基因序列为:

【技术特征摘要】
1.红螯螯虾抗WSSV感染调控因子的基因序列为:2.红螯螯虾抗WSSV感染调控因子的氨基酸序列为:3.红螯螯虾抗WSSV感染调控因子的制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)将Cq-Ns1abp基因连接到原核表达载体pMal-C2x中,构建红螯螯虾抗WSSV感染调控因子pMal-C2x-Cq-Ns1abp重组表达载体;所述Cq-Ns1abp基因产物包含N端BTB结构域和C端Kelch结构域蛋白及全长蛋白;2)将步骤1)所得重组表达载转化体分别导入宿主细胞E.coli(BL21:DE3),并进行诱导表达,得表达产物;3)分离纯化步骤2)得到的表达产物,通过...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘海鹏谢晓露王克坚
申请(专利权)人:厦门大学
类型:发明
国别省市:福建,35

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