一种苯并香豆素喹唑啉酮衍生物及用作DAPK基因甲基化抑制剂的生物医药用途制造技术

本发明专利技术公开了一种苯并香豆素喹唑啉酮衍生物及用作DAPK基因甲基化抑制剂的生物医药用途。本发明专利技术提供的化合物可以有效抑制多种肿瘤细胞中DAPK基因甲基化，上调DAPK蛋白表达水平。本领域技术人员知道，DAPK基因启动子通过甲基化后失活，失去其促细胞凋亡的作用，在多种肿瘤的发生发展过程中起着十分重要的作用，抑制DAPK基因甲基化可以促进肿瘤凋亡(参考文献：DAPK基因甲基化与肿瘤相关性的研究进展，癌症进展2015年第13卷6期)。所以，本发明专利技术提供的化合物可以用于制备抗肿瘤药物。

A benzoic coumarin quinazolone derivative and its use as a methylation inhibitor of DAPK gene for biomedical purposes

The invention discloses a benzocoumarin quinazolinone derivative and a biomedical use as a DAPK gene methylation inhibitor. The compound provided by the invention can effectively inhibit the methylation of DAPK gene in various tumor cells and up-regulate the expression level of DAPK protein. Technicians in this field know that DAPK promoter is inactivated by methylation and loses its role in promoting cell apoptosis. It plays an important role in the occurrence and development of various tumors. Inhibition of DAPK gene methylation can promote tumor apoptosis (Ref. Advances in research on the relationship between DAPK gene methylation and tumors) Cancer progression 2015 Vol. thirteenth, 6 issue). Therefore, the compounds provided by the invention can be used for preparing antitumor drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种苯并香豆素喹唑啉酮衍生物及用作DAPK基因甲基化抑制剂的生物医药用途
本专利技术属于化学领域，涉及喹唑啉酮衍生物在生物医药领域的应用。
技术介绍
据世界卫生组织报道，肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一。2012年肿瘤造成820万人死亡，其中肺癌、肝癌和胃癌死亡率最高。研究肿瘤致病机制，寻找有效的肿瘤治疗方法，是生物学与医学界的重要研究课题。表观遗传学是指在基因的DNA序列没有发生改变的情况下，基因发生可遗传的遗传信息变化，并最终导致可遗传的表型变化，且这种改变在发育和细胞增殖过程中能稳定传递并具有可逆潜能。在肿瘤中，如DNA甲基化等表观遗传学修饰可以通过调节基因的表达影响肿瘤的发生与发展。DAPK基因高甲基化常导致其表达量下降，且在多种肿瘤中发现了DAPK基因的甲基化现象。DAPK是一种钙调蛋白(CaM)调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，基因定位于人类染色体9q34.1，转录成熟的mRNA全长为5.9kb，编码蛋白分子质量为160kDa。DAPK可参与调控多种细胞生理过程，如细胞凋亡、自噬、迁移及细胞膜起泡等，与恶性肿瘤发生、发展、转移密切相关(参考文献：AnjumR,RouxPP,BallifBA,etal.ThetumorsuppressorDAPkinaseisatargetofRSK-mediatedsurvivalsignaling.CurrBiol,2005,15:1762-1767)。研究发现，DAPK基因启动子通过甲基化后失活，失去其促细胞凋亡的作用，在多种肿瘤的发生发展过程中起着十分重要的作用。抑制DAPK基因甲基化可以促进肿瘤凋亡(参考文献：DAPK基因甲基化与肿瘤相关性的研究进展，癌症进展2015年第13卷6期)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供喹唑啉酮衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的生物医药用途。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种如下结构式所示的喹唑啉酮衍生物：其中，R为如下结构所示的取代基：上述的喹唑啉酮衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的用途。上述的喹唑啉酮衍生物用于制备抗肿瘤药物的生物医药用途。进一步地，所述肿瘤为胃癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、宫颈癌或肺癌等。一种如下结构式所示的喹唑啉酮酯衍生物：其中，R为如下结构所示的取代基：上述的喹唑啉酮酯衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的用途。上述的喹唑啉酮酯衍生物用于制备抗肿瘤药物的生物医药用途。进一步地，所述肿瘤为胃癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、宫颈癌或肺癌等。一种如下结构式所示的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物：其中，R为如下结构所示的取代基：上述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的用途。上述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用于制备抗肿瘤药物的生物医药用途。根据权利要求3所述的生物医药用途，其特征在于：所述肿瘤为胃癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、宫颈癌或肺癌等。一种如下结构式所示的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物：其中，R为如下结构所示的取代基：上述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的用途。上述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用于制备抗肿瘤药物的生物医药用途。根据权利要求3所述的生物医药用途，其特征在于：所述肿瘤为胃癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、宫颈癌或肺癌等。一种如下结构式所示的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物：其中，R为如下结构所示的取代基：上述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的用途。上述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用于制备抗肿瘤药物的生物医药用途。根据权利要求3所述的生物医药用途，其特征在于：所述肿瘤为胃癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、宫颈癌或肺癌等。有益效果：本专利技术提供的化合物可以有效抑制多种肿瘤细胞中DAPK基因甲基化，上调DAPK蛋白表达水平。本领域技术人员知道，DAPK基因启动子通过甲基化后失活，失去其促细胞凋亡的作用，在多种肿瘤的发生发展过程中起着十分重要的作用，抑制DAPK基因甲基化可以促进肿瘤凋亡(参考文献：DAPK基因甲基化与肿瘤相关性的研究进展，癌症进展2015年第13卷6期)。所以，本专利技术提供的化合物可以用于制备抗肿瘤药物。附图说明图1为药物对胃癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响；图2为药物对肝癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响；图3为药物对乳腺癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响；图4为药物对食管癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响；图5为药物对结肠癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响；图6为药物对宫颈癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响；图7为药物对肺癌细胞中DAPK基因甲基化状态的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、实验材料药物自制或购买，纯度不低于98％，化学结构式如下。人胃癌细胞株SNU-5、人肝癌细胞株HepG2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人食管癌细胞株ECA-109、人结肠癌细胞株Caco-2、人宫颈癌细胞株Hela和人肺癌细胞株A549为本公司冻存。胎牛血清和DMEM培养液购于美国GIBCO；青链霉素购于晶美生物。针对DAPK基因启动子CpG岛设计的PCR引物和测序引物由上海生工合成。AxyPrep基因组DNA小量制备试剂盒购自北京益奥柏；DNA重亚硫酸盐处理试剂盒EpiTectPlusDNABisulfiteKit、焦磷酸测序分析中优化的模板DNA的PCR扩增试剂盒PyroMarkPCRKit和焦磷酸测序试剂盒、PyroMarkGoldQ96SQAReagents购自德国Qiagen。二、实验方法1、细胞培养人胃癌细胞株SNU-5、人肝癌细胞株HepG2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人食管癌细胞株ECA-109、人结肠癌细胞株Caco-2、人宫颈癌细胞株Hela和人肺癌细胞株A549购自于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。在37℃，5％CO2条件下，于含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的DMEM培养液中培养。取对数生长期细胞用于实验。2、分组及处理方法取对数生长期的人胃癌细胞株SNU-5、人肝癌细胞株HepG2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人食管癌细胞株ECA-109、人结肠癌细胞株Caco-2、人宫颈癌细胞株Hela和人肺癌细胞株A549，分别分为低剂量组和高剂量组，低剂量组给予2μM的药物孵育48h，高剂量组给予5μM的药物孵育48h。另设对照组，对照组不添加药物于同等条件下培养。3、基因甲基化特异性PCR检测DAPK基因甲基化状态取对照组和药物处理48小时后的各组细胞，用AxyPrep基因组DNA小量制备试剂盒提取肿瘤细胞基因组DNA，紫外分光光度仪检测DNA浓度及纯度。每份标本取0.4μgDNA，采用德国Qiagen公司的试剂盒EpiTectPlusDNABisulfiteKit进行重亚硫酸盐处理。采用PyroMarkAssaydesign2.0针对DAPK基因启动子CpG岛设计PCR引物和测序引物，其中PCR下游引物5’端连接生物素。依照德国Qiagen公司的焦磷酸测序前PCR试剂盒PyroMarkPCRKit说明书进行PCR扩增。反应体系均为：mix12.5μl，去离子水6μl，上游引物2μl，下游引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种如下结构式所示的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物：

【技术特征摘要】
1.一种如下结构式所示的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物：其中，R为如下结构所示的取代基：2.权利要求1所述的苯并香豆素喹唑啉酮衍生物用作DAPK基因甲基化抑制剂的用途。3.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张长林，杨佳，
申请(专利权)人：淮安培元基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32