一种达沙替尼中1-（2-羟乙基）哌嗪的检测方法技术

一种达沙替尼中1‑（2‑羟乙基）哌嗪杂质的检测方法，采用手性衍生化试剂N‑A‑（5‑氟‑2,4‑二硝基苯基）‑L‑丙氨酰胺（FDAA）对达沙替尼中的1‑（2‑羟乙基）哌嗪进行柱前衍生化，从而实现采用普通C18色谱柱进行达沙替尼中1‑（2‑羟乙基）哌嗪杂质的分离测定，使其在系统适用性、专属性、精密度、定量限、检测限、线性和范围、准确度和耐用性等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于达沙替尼原料药的质量控制。

A method for determination of 1- (2- hydroxyethyl) piperazine in dasatinib

A method for the determination of 1 (2_hydroxyethyl) piperazine impurity in dasartinib by pre-column derivatization with chiral derivatization reagent N_A(5_fluoro_2,4_dinitrophenyl)L alanine amide (FDAA) on a common C18 column was developed. The separation and determination of 1(2_hydroxyethyl) piperazine impurities in tinibacil completely conform to the guidelines of method validation in Chinese Pharmacopoeia in terms of system applicability, specificity, precision, quantitative limit, detection limit, linearity and scope, accuracy and durability, and can be used for the quality control of dasartinib APIs.

【技术实现步骤摘要】
一种达沙替尼中1-（2-羟乙基）哌嗪的检测方法
本专利技术涉及一种HPLC法测定达沙替尼中1-（2-羟乙基）哌嗪的方法，属于药物分析

技术介绍
达沙替尼（Dasatinib），化学名为：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺(一水合物)，商品名为SPRYCEL,是由百时美施贵宝公司研发的一种口服酪氨酸激酶抑制剂。达沙替尼是一种针对BCR-ABL的高效的小分子多靶向的第二代酪氨酸激酶抑制剂。它最初是用来作为一种Src激酶家族（比如Fyn，Yes，Src，和Lyk）的抑制剂，但是它依然能够抑制BCR-ABL，EphA2，血小板生长因子受体和c-Kit，而且，它能够与其他酪氨酸和丝氨酸、苏氨酸激酶（比如丝裂原活化蛋白激酶、受体酪氨酸激酶、盘状结构域受体等）结合。达沙替尼能够有效抑制除了T315I突变的伊马替尼耐受的野生型和BCR-ABL突变细胞株增殖和活性。达沙替尼于2006年6月28日通过美国FDA的优先审批，用于治疗成人所患的甲磺酸伊马替尼（Imatinibmesylate）耐药或不能耐受的所有病期（慢性期、加速期、淋巴细胞急变期）的慢性骨髓性白血病。同时，美国食品药品监督管理局也经正常程序批准达沙替尼治疗成人所患的对其他疗法耐药或不能耐受的费城染色体阳性的急性淋巴细胞性白血病。我国食品药品监督管理局于2011年9月8日批准达沙替尼用于慢性髓性白血病的二线治疗。2017年11月9日，美国食品药品监督管理局批准达沙替尼（dasatinib）治疗处于慢性期的费城染色体阳性（Ph+）、儿童慢性髓系白血病（CML）。1-(2-羟乙基)哌嗪是合成达沙替尼所用的起始物料，达沙替尼成品中可能存在1-(2-羟乙基)哌嗪，根据ICH指导原则中的质量指导原则部分，需要控制原料药中的杂质。目前还没有文献报道达沙替尼中的1-(2-羟乙基)哌嗪杂质的检测方法，本专利技术首次提出了了一种达沙替尼中1-(2-羟乙基)哌嗪杂质的检测方法，其采用手性衍生化试剂N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺（FDAA）进行柱前衍生化，实现采用普通C18色谱柱进行达沙替尼中的1-(2-羟乙基)哌嗪杂质的分离测定。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种达沙替尼中1-（2-羟乙基）哌嗪杂质的检测方法，采用手性衍生化试剂N-A-（5-氟-2,4-二硝基苯基）-L-丙氨酰胺（FDAA）对达沙替尼中的1-（2-羟乙基）哌嗪进行柱前衍生化，从而实现采用普通C18色谱柱进行达沙替尼中1-（2-羟乙基）哌嗪杂质的分离测定，使其在系统适用性、专属性、精密度、定量限、检测限、线性和范围、准确度和耐用性等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于达沙替尼原料药的质量控制。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种达沙替尼中1-（2-羟乙基）哌嗪的检测方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；所述空白溶液包括碱性缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液(Marfey，s溶液)；所述对照品溶液包括1-(2-羟乙基)哌嗪、缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液；所述供试品溶液包括达沙替尼、缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液(Marfey，s溶液)；（2）测定方法：分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0±0.1mL/min；柱温：30±2℃；进样量：20μl；运行时间：25min；检测波长：340nm；流动相为三乙胺-乙腈体系，进行梯度洗脱。所述空白溶液的配制步骤为：移取稀释液于进样瓶中，依次加入碱性缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液(Marfey，s溶液)并盖紧进样瓶，保温，取出后，移取盐酸溶液至进样瓶中，盖紧进样瓶，摇匀；再从上述溶液中移取适量于进样瓶中，加入混合溶液，混匀即得空白溶液；所述对照品溶液：移取1-(2-羟乙基)哌嗪储备液于进样瓶中，依次加入适量缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液(Marfey，s溶液)并盖紧进样瓶，保温，取出后，移取盐酸溶液至进样瓶中，盖紧进样瓶，摇匀；再从上述溶液中移取适量于进样瓶中，加入混合溶液，混合即得对照品溶液；所述供试品溶液：移取适量达沙替尼样品储备液于进样瓶中，依次加入适量缓冲溶液和N-A-（5-氟-2,4-二硝基苯基）-L-丙氨酰胺溶液（Marfey，s溶液）并盖紧进样瓶，保温，取出后，移取盐酸溶液至进样瓶中，盖紧进样瓶，摇匀；再从上述溶液中移取适量于进样瓶中，加入混合溶液，混合即得供试品溶液；所述稀释液为甲醇；所述甲醇为AR及以上级；所述缓冲溶液为碳酸氢钠溶液；所述混合溶液由三乙胺和乙腈组成；所述1-(2-羟乙基)哌嗪储备液是用稀释液甲醇溶解1-(2-羟乙基)哌嗪制得；所述达沙替尼样品储备液是用稀释液甲醇溶解达沙替尼制得。所述三乙胺溶液的浓度为0.5%wt；所述三乙胺溶液的pH值为3.0，优选利用磷酸调节三乙胺的pH至3.0；所述色谱柱可为ThermoAcclaimTMC18，5μm,4.6×250mm。其中，流动相梯度过程如下：时间（min）流动相三乙胺流动相乙腈07525152575167525257525更优选的，本专利技术所述的测定方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；所述空白溶液的配制步骤为：准确移取稀释液甲醇50μl于2ml的进样瓶中，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液50μl和Marfey，s溶液100μl并盖紧进样瓶，在40℃保温90min，取出后，准确移取40μl的2mol/L盐酸溶液，盖紧进样瓶，摇匀；从上述溶液中准确移取100μl，至2ml进样瓶中，加入400μl混合溶液，混匀即得。对照品溶液，也即1-（2-羟乙基）哌嗪定位溶液：准确移取1-（2-羟乙基）哌嗪储备液50μl于2ml的进样瓶中后，照空白溶液中自“加0.5mol/L碳酸氢钠溶液50μl”起，依法操作，即得。供试品溶液，也即达沙替尼定位溶液：准确移取达沙替尼样品储备液50μl于2ml的进样瓶中后，照空白溶液中自“加0.5mol/L碳酸氢钠溶液50μl”起，依法操作，即得。所述稀释液为甲醇；所述甲醇为AR及以上级；所述1-（2-羟乙基）哌嗪储备液是用稀释液甲醇溶解1-（2-羟乙基）哌嗪制得；所述达沙替尼样品储备液是用稀释液甲醇溶解达沙替尼制得。所述混合溶液由三乙胺和乙腈组成。（2）测定方法：分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20μl；运行时间：25min；检测波长：340nm；流动相：三乙胺-乙腈，进行梯度洗脱。其中，所述三乙胺溶液的浓度为0.5%wt；所述三乙胺溶液的pH值为3.0，优选利用磷酸调节三乙胺的pH至3.0；所述色谱柱可为ThermoAcclaimTMC18，5μm,4.6×250mm。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种达沙替尼中1‑(2‑羟乙基)哌嗪的检测方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；所述空白溶液包括碱性缓冲溶液和N‑A‑(5‑氟‑2,4‑二硝基苯基)‑L‑丙氨酰胺溶液；所述对照品溶液包括1‑（2‑羟乙基）哌嗪、缓冲溶液和N‑A‑(5‑氟‑2,4‑二硝基苯基)‑L‑丙氨酰胺溶液；所述供试品溶液包括达沙替尼、缓冲溶液和N‑A‑(5‑氟‑2,4‑二硝基苯基)‑L‑丙氨酰胺溶液；（2）测定方法：分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图,色谱条件如下:色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0±0.1mL/min；柱温：30±2℃；进样量：20μl；运行时间：25min；检测波长：340nm；流动相为三乙胺‑乙腈体系，进行梯度洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种达沙替尼中1-(2-羟乙基)哌嗪的检测方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；所述空白溶液包括碱性缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液；所述对照品溶液包括1-（2-羟乙基）哌嗪、缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液；所述供试品溶液包括达沙替尼、缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液；（2）测定方法：分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图,色谱条件如下:色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0±0.1mL/min；柱温：30±2℃；进样量：20μl；运行时间：25min；检测波长：340nm；流动相为三乙胺-乙腈体系，进行梯度洗脱。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述空白溶液的配制步骤为：移取稀释液于进样瓶中，依次加入碱性缓冲溶液和N-A-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺溶液并盖紧进样瓶，保温，取出后，移取盐酸溶液至进样瓶中，盖紧进样瓶，摇匀；再将上述溶液移取至进样瓶中，加入混合溶液，混匀即得...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦静，谢金昌，张寨花，周建，
申请(专利权)人：珠海润都制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44