一株枯草芽孢杆菌YL13及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株枯草芽孢杆菌YL13及其应用。本发明专利技术的菌株YL13是首次通过诱变得到的广谱性的拮抗植物病害的菌株，在抑制油茶炭疽病菌、油茶根腐病菌、油茶软腐病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌、番茄早疫病菌、梭孢菌、水稻纹枯病菌上的效果显著，还能进一步促进植物的生长，相关抗菌剂的制备方法简单、成本低、环保、无污染，效果突出，具有很好的应用前景。

A Bacillus subtilis YL13 and its application

The invention discloses a Bacillus subtilis YL13 and its application. The strain YL13 of the invention is the first broad-spectrum antagonistic plant disease strain induced by mutation, and has remarkable effect on inhibiting anthracnose fungus of Camellia oleifera, root rot fungus of Camellia oleifera, soft rot fungus of Camellia oleifera, anthracnose fungus of Dalbergia dalbergiae, anthracnose fungus of sandalwood, early blight fungus of tomato, Clostridium spp. and sheath blight fungus of The preparation method of related antimicrobial agents is simple, low cost, environmental protection, pollution-free, and the effect is outstanding. It has a good application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌YL13及其应用
本专利技术属于生物防治
，涉及一株枯草芽孢杆菌YL13及其拮抗病害和/或促植物生长方面的应用。
技术介绍
目前林木病害的控制仍采用以化学防治的方式为主，这种方法不仅导致土壤、大气、水体等生态环境的污染，造成林副产品的农药残留，而且也误杀天敌导致生态平衡的破坏；长期应用农药还造成有害生物的抗性增强；同时化学农药效果的持续性也存在着一定的局限性。因此，寻找一种经济、安全、有效的防治措施是当务之急。生物防治以其安全、高效及无污染等特点已经成为植物病害防治的重要途径，其中拮抗细菌在植物病害生物防治中起到非常重要的作用。有些细菌不仅能防治病害，而且还可以促进植物生长，增加作物产量。从自然界分离筛选获得对病害具有拮抗作用的生防菌株具有重要意义。但目前相关的技术还很薄弱，筛选的菌株功能比较单一。例如：申请号为200910042461.4的专利技术中公开了一种高效防治油茶炭疽病的枯草芽孢杆菌Y13，但该菌株的防治效果还有待进一步提高，而且该菌株仅对油茶炭疽病有一定的防治效果，对其他类型的炭疽病，如降香黄檀、檀香炭疽病菌的抑制作用并不显著，大大限制了该菌株的使用范围。目前报道的大部分生防菌株只能针对个别种类或者少数种类的病菌具有防治效果，很少有广谱性的生防菌株出现。如果能够找到一种广谱性的对多种类型病菌均有显著防治作用的新菌株，并据此研发相关的制剂，促进植物生长将有重大意义。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是针对现有技术的空白，提供一种广谱性的高效防治植物病害的菌株枯草芽孢杆菌YL13，保藏号为CCTCCNO:M2018008。本专利技术的次要目的是提供如下几方面的应用：所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于抑制油茶炭疽病菌、油茶根腐病菌、油茶软腐病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌、番茄早疫病菌、梭孢菌、水稻纹枯病菌中的一种或多种。所述的枯草芽孢杆菌YL13尤其应用于抑制油茶炭疽病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌中的一种或多种。所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于抑制或致畸炭疽病病菌菌丝。所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于抑制炭疽病病菌分生孢子的萌发。所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于制备拮抗油茶炭疽病菌、油茶根腐病菌、油茶软腐病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌、番茄早疫病菌、梭孢菌、水稻纹枯病菌中的一种或多种的制剂。所述的枯草芽孢杆菌YL13尤其应用于制备拮抗油茶炭疽病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌中的一种或多种的制剂。所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于促进植物的生长。所述的植物包括：油茶、降香黄檀、檀香、番茄、芒果、水稻。本专利技术的新菌株YL13培养基为牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，琼脂20g，pH7.0—7.4。本专利技术的研发思路是为了解决炭疽病害化学防治存在的缺点和不足，在已有的生防菌株枯草芽孢杆菌Y13基础上进行诱变，期望得到功能进一步强化的新菌株，从而得到经济、安全、有效的防治措施，进而促进植物生长。(1)采用紫外线对保藏编号为CCTCCNO.M208264的枯草芽孢杆菌Y13进行诱变，以降香黄檀炭疽菌为病原菌，筛选获得最佳诱变菌株Uv-8，抑菌率在80.75％以上；采用紫外线-亚硝基胍复合诱变，筛选获得最佳诱变菌株NTG1-8，抑菌率达86.47％，较原始菌株Y13提高12.79％，将其重命名为YL13。对诱变YL13进行抗菌谱测定，结果显示该诱变株能够有效抑制油茶炭疽病、油茶根腐病、降香黄檀炭疽病、檀香炭疽病、番茄早疫病菌、梭孢菌、水稻纹枯病菌等多种植物病原菌，且抑菌率菌均在80％以上，相较而言，枯草芽孢杆菌Y13则只对油茶炭疽病有显著的防治作用。(2)采用单因素试验及响应面分析的方法，分析了诱变株YL13发酵培养过程中的基础培养基、C\N源，最适pH值、接种量、培养温度、摇床转速及培养时间等因素对其生长量的影响，获得了菌株YL13的最佳发酵培养基及培养条件；获得菌株YL13的最佳基础培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，最佳碳源是牛肉膏，最佳氮源是蛋白胨，最适pH7.0—7.4，最佳接种量是6％，最适培养温度是30℃，最佳摇床转速为170r/min，最适培养时间是36h；通过响应面分析设计实验，确定了YL13最佳培养基配方为：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，琼脂20g，pH7.0—7.4。最佳接种量确定：在最佳培养基中按3％、4％、5％、6％、7％、8％的接种量接入种子液，发酵36h后测定OD600值。结果见图5。最适培养温度的筛选：将YL13菌种接种至最佳培养液中后，置于24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃下，振荡培养36h后测定OD600值。结果见图6。最佳摇床转速的筛选：种子培养基中接入适量的种子液之后，将三角瓶置于130r/min、150r/min、170r/min、190r/min、210r/min、230r/min的摇床转速下振荡培养，发酵36h后测定OD600值。结果见图7。最佳培养时间的筛选：将种子液接种至最优培养液后，在最佳培养条件下培养6h、12h、24h、36h、48h、60h后测定OD600值。结果见图8。(3)研制了诱变株YL13的新型水分散粒剂，同时研究新型水分散剂的货架期及林间防效，该剂型在林间应用时能以极少量达到最佳效果。确定诱变株新型水分散粒剂配方为：皂土与1.0×1010--1.0×1011cfu/mL菌株发酵液按6:1—8:1的料液质量比混合，添加4-6％木质素磺酸钠、2-3％萘磺酸甲醛缩合物钠盐、3-5％丁基萘磺酸钠、3-5％硫酸铵、以及18-22％的水。此菌剂能够在常温环境下密封贮存12个月以上。对YL13新型水分散粒剂进行毒性测试，说明YL13菌剂属于安全无污染的生物菌剂。将其应用于实验林，林间防治效果达80％以上，能与化学药剂百菌灵等相媲美。本专利技术的菌株YL13是首次通过诱变得到的广谱性的拮抗植物病害的拮抗菌株。其在抑制油茶炭疽病菌、油茶根腐病菌、油茶软腐病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌、番茄早疫病菌、梭孢菌、水稻纹枯病菌上的效果显著，还能进一步促进植物的生长，相关抗菌剂的制备方法简单、成本低、环保、无污染，效果突出，具有很好的应用前景。本专利技术菌株Y13保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心命名：BacillussubtilisYL13编号：CCTCCNO:M2018008时间：2018年1月4日地点：中国，武汉，武汉大学。附图说明图1紫外线诱变初筛平板对峙实验结果；图2为复合诱变初筛平板对峙实验结果；图3为枯草芽孢杆菌YL13致畸炭疽病病菌菌丝的实验结果；图4为枯草芽孢杆菌YL13抑制炭疽病病菌分生孢子的萌发的实验结果；图5为枯草芽孢杆菌YL13发酵培养时的最佳接种量；图6为枯草芽孢杆菌YL13发酵培养时的最适培养温度；图7为枯草芽孢杆菌YL13发酵培养时的最佳转速；图8为枯草芽孢杆菌YL13发酵培养时的最佳培养时间；图9为新型水分散粒剂的润湿剂添加比例筛选试验结果；图10为新型水分散粒剂的崩解剂添加比例筛选试验结果；图11为新型水分散粒剂的水分添加比例筛选试验结果；图12为枯草芽孢杆菌YL13应用于促进植物生长的实验本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YL13，保藏号为CCTCC NO:M 2018008。

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)YL13，保藏号为CCTCCNO:M2018008。2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于抑制油茶炭疽病菌、油茶根腐病菌、油茶软腐病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌、番茄早疫病菌、梭孢菌、水稻纹枯病菌中的一种或多种。3.权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于抑制油茶炭疽病菌、降香黄檀炭疽病菌、檀香炭疽病菌中的一种或多种。4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌YL13应用于抑制或致畸炭疽病病菌菌丝。5.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌YL...

【专利技术属性】
技术研发人员：周国英，刘君昂，刘慧年，陈雁影，朱嘉成，董文统，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43