一种产不饱和脂肪酸的方法技术

本发明专利技术提供了一种产不饱和脂肪酸的方法，包括如下步骤：S1.将长白伞形霉(Umbelopsis changbaiensis)菌株UM‑28接种于种子培养基中，发酵得到种子液；S2.将S1中种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；S3.将S2中经过发酵培养的物质于布氏漏斗内进行真空抽滤，收集湿菌体，干燥后得到干菌体；S4.将S3中干菌体加入盐酸浸泡，水浴后，冷却，加入三氯甲烷，震荡，离心去除上层杂质，有机层加入氯化钠溶液，再次离心，收集不饱和脂肪酸。其代谢产物中不饱和脂肪酸含量高达75.69％，其中主要的成分是油酸和亚油酸。其开发和利用价值高，应用前景可观。

【技术实现步骤摘要】
一种产不饱和脂肪酸的方法
本专利技术属于微生物
，更具体地，涉及一株产不饱和脂肪酸的长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)UM-28的应用。
技术介绍
不饱和脂肪酸是碳链未完全被氢原子所饱和的含有一个或多个双键的一类物质，是生物膜的重要组成成分，其不饱和度与细胞膜的流动性密切相关。而细胞膜的流动性是生化物质膜转运的基础，不饱和脂肪酸含量越高，生化物质转运越容易。脂肪酸也是许多重要代谢产物(前列腺素、血栓烷、白细胞三烯、脂氧素和环氧二十碳三烯等)的前体物质，对于人体血液流变、血管弹性、白细胞功能和血小板激活等具有重要的调节作用。此外，不饱和脂肪酸对人体一些营养素缺乏症和某些慢性病有积极防治作用，在促进婴幼儿视力与脑部发育，预防与改善糖尿病、肥胖、心脑血管疾病等健康方面起着重要的作用，膳食中不饱和脂肪酸的种类及比例对维持机体健康非常重要，摄入的脂肪酸不足或比例失衡均会对健康造成影响甚至诱发某些疾病的产生。微生物来源的油脂具有传统的动植物油脂不可比拟的优势，其发酵生产不占用耕地，产量受自然环境的影响较小，可利用多种碳源氮源发酵生产。被认为是动植物油脂的替代资源。伞形霉属(Umbelopsis)隶属于真菌界(Fungi)毛霉门(Mucoromycota)毛霉亚门(Mucoromycotina)伞形霉目(Umbelopsidales)的伞形霉科(Umbelopsidaceae)，是该科的唯一属。该属真菌细胞含多种脂肪酸，多为长链(大于12碳)偶数碳不饱和脂肪酸，主要集中于16～18碳(约占90％)。伞形霉属真菌是重要的油脂生产菌。比如，本属的深黄伞形霉(Umbelopsisisabellina)油脂积累可达干重的86％，已用于基因工程来提高油脂产量。该种油脂中含多种不饱和脂肪酸，例如，γ-亚麻酸(GLA)，它是组成人体各组织生物膜的结构材料，也是合成前列腺素的前体。无论是将微生物油脂作为生物柴油应用于工业，还是将其作为功能性油脂应用于食品保健，都将具有广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术提供了一株产不饱和脂肪酸的长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)UM-28在产不饱和脂肪酸中的应用。本专利技术对高产菌株进行鉴定及油脂组成气相色谱法分析(GC)检测，为该菌株产油脂的开发与利用提供一定的参考依据。本专利技术的技术目的通过以下技术方案实现：一株产不饱和脂肪酸的长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)UM-28，所述长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)UM-28于2013年1月21日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC3.16317。所述长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)UM-28的ITS基因序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术同时提供一种产不饱和脂肪酸的方法，包括如下步骤：S1.将长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)菌株UM-28接种于种子培养基中，发酵得到种子液；S2.将S1中种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；S3.将S2中经过发酵培养的物质于布氏漏斗内进行真空抽滤，收集湿菌体，干燥后得到干菌体；S4.将S3中干菌体加入盐酸浸泡，水浴后，冷却，加入三氯甲烷，震荡，离心去除上层杂质，有机层加入氯化钠溶液，再次离心，收集不饱和脂肪酸；所述长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)UM-28于2013年1月21日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC3.16317。优选地，所述S1中发酵为在180r/min摇床震荡，25℃连续培养24h.优选地，所述的种子液按5％的接种量接种到发酵培养基中。优选地，所述得种子培养基为：将马铃薯200g，葡萄糖20g加入蒸馏水1000mL中。优选地，所述的发酵培养基为：将葡萄糖120g，酵母膏0.5g，磷酸二氢钾2g，硫酸铵2g和蒸馏水1000mL混合，pH值为5.9～6.0。优选地，所述的发酵培养为在180r/min摇床震荡，25℃连续发酵5天。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：本专利技术提供了一株UM-28菌株在代谢产物中不饱和脂肪酸含量高达75.69％，其中主要的成分是油酸和亚油酸。其开发和利用价值高，应用前景可观。附图说明图1为菌株UM-28的菌落的形态。图2为菌株UM-28的显微形态。图3为菌株UM-28的系统进化树。图4为标准样品GC谱图。图5为菌株UM-28代谢产物油脂气相色谱图。具体实施方式下面通过实施例和附图对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本专利技术进行进一步说明，但不能理解为对本专利技术保护范围的限制。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施例1：1、菌株来源与培养基土壤采集于中国吉林省长白山地区(北纬42°10′548″—44°02′274″，东经126°35′399″—128°55′815″)。选取合适采样点去除表层有机质，用小铁铲取土壤20—30g于无菌塑料袋中，记录采集日期、地点，坐标位置，生态环境等信息，送至实验室进一步处理。所用的主要试剂和仪器为：麦芽提取物培养基(MaltExtractAgar.MEA)购于OXOID公司，主要用于形态观察；马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，加入蒸馏水1000mL，用于菌株分离、纯化；种子培养基(g/L)：将马铃薯200g，葡萄糖20g加入蒸馏水1000mL中；发酵培养基(g/L)：将葡萄糖120g，酵母膏0.5g，磷酸二氢钾2g，硫酸铵2g，蒸馏水1000mL，pH值为5.9～6.0。ITSPCR扩增采用通用引物ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)和ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′)，由上海美吉生物医药科技有限公司北京分公司合成。2、真菌的分离采用稀释分离平板法，从选取的样品中称取5g，倒入装有500ml的无菌蒸馏水稀释，在室温条件下磁力搅拌机上用200rpm剧烈搅动10min，用移液器吸取200μL悬浮液滴在表面干燥的PDA培养基上，用玻璃珠涂布并标记与记录，放在预先设置为25℃的培养箱中进行培养。3、菌株的纯化对形态初步鉴定为接合菌的菌株，采用单孢法进行纯化。挑取孢子囊，放入1mL无菌水的试管中，剧烈震荡使孢囊壁消解或破裂释放出孢囊孢子，震荡混匀制成孢子悬浮液。用移液枪吸取1μL孢子悬浮液，打入新的1mL无菌水的试管中稀释。每稀释1次，其浓度达到原始浓度的10-3倍。吸取100μL合适稀释倍数(10-3–10-6)的孢子悬浮液，滴入含有抗生素(50μg/mL氨苯青霉素，50μg/mL硫酸链霉素)的PDA培养皿中，3mm玻璃珠涂布均匀，室温倒置培养。培养12小时后，每隔3小时在体视显微镜下观察培养皿中孢子萌发情况，寻找萌发的单个孢子并标记位置。切取单孢菌落的培养块，转至PDA冷冻管中继续培养成熟，加10％甘油于4℃下保藏。4、菌株UM-28鉴定4.1形态学鉴定：参考《常见与常用真菌》方法，对目标菌株进行菌落、显微形态等进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产不饱和脂肪酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将长白伞形霉(Umbelopsis changbaiensis)菌株UM‑28接种于种子培养基中，发酵得到种子液；S2.将S1中种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；S3.将S2中经过发酵培养的物质于布氏漏斗内进行真空抽滤，收集湿菌体，干燥后得到干菌体；S4.将S3中干菌体加入盐酸浸泡，水浴后，冷却，加入三氯甲烷，震荡，离心去除上层杂质，有机层加入氯化钠溶液，再次离心，收集不饱和脂肪酸。

【技术特征摘要】
1.一种产不饱和脂肪酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将长白伞形霉(Umbelopsischangbaiensis)菌株UM-28接种于种子培养基中，发酵得到种子液；S2.将S1中种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；S3.将S2中经过发酵培养的物质于布氏漏斗内进行真空抽滤，收集湿菌体，干燥后得到干菌体；S4.将S3中干菌体加入盐酸浸泡，水浴后，冷却，加入三氯甲烷，震荡，离心去除上层杂质，有机层加入氯化钠溶液，再次离心，收集不饱和脂肪酸。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的发酵为在180r/mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小勇，宋震，王亚宁，吕美林，刘波，陈峥，邱君志，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，中国科学院大学，
类型：发明
国别省市：北京,11