抑制长链非编码RNA TRALR制剂的应用制造技术

技术编号:18955060 阅读:46 留言:0更新日期:2018-09-15 14:26
本发明专利技术公开了一种抑制长链非编码RNA TRALR制剂的应用。通过研究利用lncRNA测序发现,lncRNA TRALR在替莫唑胺抵抗的脑胶质瘤细胞系中呈异常高表达,特异性干扰lncRNA TRALR的表达可以阻滞胶质瘤细胞在G2/M期,抑制其增殖;促进SA‑β‑gal活性,促进胶质瘤细胞衰老;还能显著抑制BMI1、上调p21水平,促进细胞周期阻滞和衰老,增加脑胶质瘤替莫唑胺的敏感性。因此,可以将抑制lncRNA TRALR表达的试剂用于制备脑胶质瘤患者化疗增敏剂、治疗制剂。为脑胶质瘤患者的治疗提供强有力的分子生物学依据,具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抑制长链非编码RNATRALR制剂的应用
本专利技术属于肿瘤分子生物学
,具体涉及一种抑制长链非编码RNATRALR制剂的应用。
技术介绍
脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,约占原发性恶性脑肿瘤的80%,根据欧洲神经肿瘤协会(EANO)统计,全世界脑胶质瘤每年发生率约为6/100,000。脑胶质瘤的治疗方法是世界性的难题,特别是恶性胶质母细胞瘤,即便采取最优治疗方案,患者预后仍旧十分不理想,平均生存期仅13.3-15个月。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是近二十年来出现的一种治疗脑胶质瘤效果较好的新药,经美国FDA批准、美国国立综合癌症网络指南推荐已成为治疗脑胶质瘤的首选化疗药物。TMZ属于新型咪唑嗪类口服抗肿瘤药,易于透过血瘤屏障,其活性产物MTIC通过N3、N7、O6位鸟嘌呤和O3位的腺嘌呤DNA烷基化,发挥细胞毒性作用。由于肿瘤细胞内在的因素或者获得性抗性的出现,脑胶质瘤患者对TMZ治疗逐渐产生了抵抗,肿瘤治疗疗效降低。O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)通过转移DNA上异常的O6甲基,从而抑制TMZ介导的DNA损伤,导致胶质瘤细胞TMZ抵抗。最新研究表明,除了MGMT之外,肿瘤细胞表皮生长因子(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)等多种信号通路的异常均参与了TMZ抵抗的发生,然而其具体机制仍未阐明。因此,深入探讨TMZ抵抗发生的分子机制,并采取有效的措施进行干预,将为提高脑胶质瘤的化疗疗效提供重要的新思路。近年来研究发现,不同类别的脑胶质瘤组织中lncRNAs表达谱具有显著差异,脑胶质瘤的发病及预后与lncRNAs的表达和功能失调密切相关。分子病理学在精准医学时代的肿瘤研究与诊治中日益发挥着极其重要的作用。随着肿瘤发生发展机制研究及针对性药物开发与临床应用的飞速进展,肿瘤相关分子病理检测也从组织或者细胞学标本,扩展至液体活检;采用的分析手段也更为灵敏、多层面及高通量,并逐步向智能化迈进。精准分子分型已成为肿瘤诊断、治疗及全程管理过程中不可或缺的环节。特别是跨越肿瘤发生部位、以基因型作为直接靶标的治疗模式的探索与实践,给分子病理学提出了新的要求。本专利技术以lncRNATRALR为靶标的脑胶质瘤治疗新策略,为研究lncRNAs在脑胶质瘤TMZ抵抗中的分子机制提供新的实验证据。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备胶质瘤化疗增敏剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:本专利技术的第二个目的是提供一种抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备治疗胶质瘤制剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:本专利技术的第三个目的是提供一种抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备阻滞胶质瘤细胞在G2/M期,抑制其增殖的制剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:本专利技术的第四个目的是提供一种抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备促进SA-β-gal活性,促进胶质瘤细胞衰老的制剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:本专利技术的第五个目的是提供一种抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备抑制BMI1、上调p21表达水平,同时促进BMI1K48位泛素化制剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:本专利技术公开了一种抑制长链非编码RNATRALR制剂的应用。通过研究利用lncRNA测序发现,lncRNATRALR在替莫唑胺抵抗的脑胶质瘤细胞系中呈异常高表达,特异性干扰lncRNATRALR的表达可以阻滞胶质瘤细胞在G2/M期,抑制其增殖;促进SA-β-gal活性,促进胶质瘤细胞衰老;还能显著抑制BMI1、上调p21水平,促进细胞周期阻滞和衰老,增加脑胶质瘤替莫唑胺的敏感性。因此,可以将抑制lncRNATRALR表达的试剂用于制备脑胶质瘤患者化疗增敏剂、治疗制剂等。为脑胶质瘤患者的治疗提供强有力的分子生物学依据,具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。附图说明图1为构建替莫唑胺抵抗的T98G脑胶质瘤细胞系;在前期实验中,通过体外分阶段递增药物浓度诱导法,由10μMTMZ初始诱导剂量,梯度浓度诱导直至达到TMZ临床化疗有效血药浓度剂量100μM,构建了TMZ抵抗的脑胶质瘤T98G细胞系(T98G-R)。图1-a中A实验发现TMZ抵抗细胞的IC50值显著高于亲本细胞(T98GvsT98G-R:163vs1850μM);图1-a中B实验采用MTS法检测细胞增殖活性,发现TMZ抵抗细胞在梯度浓度TMZ处理下,增殖活性显著高于亲本细胞,验证上述TMZ抵抗细胞系对TMZ的耐药性。细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。研究发现,替莫唑胺引起DNA损伤通过甲基化DNA的鸟嘌呤的6-位氧原子,通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡发生细胞增殖的抑制效果。我们通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期,通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。脑胶质瘤亲本/TMZ抵抗细胞系分别用100μMTMZ处理0d、3d、5d,图1-b结果显示TMZ抵抗细胞系中TMZ导致的G2/M期阻滞得到明显改善。由此我们认为该TMZ抵抗的T98G脑胶质瘤细胞系具有稳定的替莫唑胺化疗抗性。图2为筛选并验证胶质瘤TMZ抵抗细胞中差异表达的lncRNA;采用转录组测序技术和lncRNA测序技术(IlluminaHiSeqTM2000),选取脑胶质瘤T98G细胞系和TMZ抵抗的T98G-R细胞系进行表达谱分析。分析结果共鉴定出740个known_lncRNA和109个novel-lncRNA。利用cuffdiff软件进行差异表达分析,筛选到23个差异表达的lncRNA,其中上调的lncRNA20个,下调的lncRNA3个。进一步通过Real-TimePCR验证差异表达lncRNA的表达水平,证实lncRNAXLOC_024808在T98G-R、U343-R细胞系均显著高表达,并将上述lncRNA命名为lncRNATRALR。图3为敲低lncRNATRALR导致G2/M期阻滞,抑制增殖;使用SmartSilencer技术在高表达本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.抑制IncRNA TRALR表达的试剂在制备胶质瘤化疗增敏剂上的应用,该IncRNA TRALR的序列见SEQ NO:1。

【技术特征摘要】
1.抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备胶质瘤化疗增敏剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:3.抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备治疗胶质瘤制剂上的应用,该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的抑制IncRNATRALR表达的试剂包括以下SmartSilencer中的一种或几种,序列为:5.抑制IncRNATRALR表达的试剂在制备阻滞胶质瘤细胞在G2/M期,抑制其增殖的制剂上的应用;该IncRNATRALR的序列见SEQNO:1。6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,...

【专利技术属性】
技术研发人员:龚志成颜元良徐志杰陈曦霍雷李学军曾双双钱龙熊小明
申请(专利权)人:中南大学湘雅医院
类型:发明
国别省市:湖南,43

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