一种十六肽化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种十六肽化合物及其制备方法和应用。所述十六肽化合物的多肽序列为：RTGACFCVIYNGILYP，或序列第1位氨基酸R替换为K、序列第2位氨基酸T替换为S、序列第8位氨基酸V替换为I或L、序列第9位氨基酸I替换为V或L、序列第11位氨基酸N替换为Q、序列第13位氨基酸I替换为V或L或序列第14位氨基酸L替换为V或I中的一种或几种。本发明专利技术提供的十六肽化合物具有延长出血时间，显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成的功能，且毒性低，在制备抗血小板聚集或抗血栓的药物、药物组分或药物前体上具有广阔的应用前景。本发明专利技术提供的制备方法产率高，工艺简单。

【技术实现步骤摘要】
一种十六肽化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种十六肽化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
血栓性疾病是一类严重影响健康的疾病，常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞。目前临床上治疗血栓性疾病的药物主要分为抗血小板类药物、抗凝血药物和溶血栓药物。抗血小板类药物具有抑制血小板的粘附、聚集和释放功能，从而防止血栓形成。抗血小板药物可以有效地防止心血管疾病的发生，并可延长患者的生存期，抗血小板药物在临床应用日益广泛。目前，称霸于抗血小板药市场上的是美国百时美施贵宝和法国赛诺菲安万特联合研制开发的氯吡格雷，但氯吡格雷价格昂贵，并存在一些不良反应，如出血(严重出血事件的发生率为1.4%)、胃肠道不适、皮疹、头痛、眩晕、头昏和感觉异常，少数患者有过敏反应，表现为荨麻疹、瘙痒。国外报道了11例服用氯吡格雷患者发生严重血栓性血小板减少性紫癜，均在用药后14天内发生，其中10例患者需要进行血浆置换，1例患者死亡。因此，开发出效果显著安全性更佳的抗血小板聚集药物以部分替代这些进口药物，有利于我国抗血栓药物的发展，具有重要的研究意义和应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中抗血小板药物价格昂贵，安全性能不佳的缺点或不足，提供一种十六肽化合物。本专利技术提供的十六肽化合物能够延长出血时间，显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成，且毒性低，在制备抗血小板聚集或抗血栓的药物、药物组分或药物前体上具有广阔的应用前景。本专利技术的另一目的在于提供上述十六肽化合物的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述十六肽化合物在制备抗血小板聚集或抗血栓的药物、药物组分或药物前体中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种十六肽化合物，所述十六肽化合物的多肽序列为：RTGACFCVIYNGILYP，或序列第1位氨基酸R替换为K、序列第2位氨基酸T替换为S、序列第8位氨基酸V替换为I或L、序列第9位氨基酸I替换为V或L、序列第11位氨基酸N替换为Q、序列第13位氨基酸I替换为V或L或序列第14位氨基酸L替换为V或I中的一种或几种。专利技术人在偶然的机会下发现了具有如下多肽序列：RTGACFCVIYNGILYP的天然活性物质十六肽化合物具有延长出血时间，显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成的功能，且毒性低，在制备抗血小板聚集或抗血栓的药物、药物组分或药物前体，上具有广阔的应用前景。同时，根据相似氨基酸功能的简单替换，将该序列的部分氨基酸替换为具有相似功能基团的氨基酸也具有较好的延长出血时间，抑制血小板聚集，防止血栓形成的效果，如将序列第1位碱性的氨基酸R替换为同为碱性氨基酸的K，将序列第2位含羟基的氨基酸T替换为同样含有羟基的氨基酸S，将序列第8位的支链氨基酸V替换为同为支链氨基酸的I或L，将序列第9位氨基酸I替换为V或L（均含有支链氨基酸），将序列第11位含有酰胺基团的氨基酸N替换为同样含有酰胺基团的Q、将序列第13位氨基酸I替换为V或L（均含有支链氨基酸），将序列第14位氨基酸L替换为V或I（均含有支链氨基酸）及其各种替换的组合。本专利技术提供的十六肽化合物可根据常规的方法制备得到，在此，本专利技术也提供一种制备上述十六肽化合物的方法，所述制备方法包括如下步骤：S1：将2-ChlorotritylChlorideResin溶胀；S2：将所述多肽序列的第1位氨基酸R或K与所述2-ChlorotritylChlorideResin连接后封闭，然后脱保护；S3：在活化剂的作用下通过缩合反应连接所述多肽序列的第2位氨基酸T或S；S4：重复S2~S3的步骤，依次连接所述多肽序列中的氨基酸至序列结束；S5：从2-ChlorotritylChlorideResin上将所述十六肽化合物切割下来即得。本专利技术提供的制备方法可制备得到该十六肽化合物，产率高，工艺简单。优选地，S1中2-ChlorotritylChlorideResin于DCM溶剂中振荡溶胀，所述溶胀的时间为30min。优选地，S2中封闭过程为：向溶胀后2-ChlorotritylChlorideResin中加入所述多肽序列的第1位氨基酸R或K、Fmoc-Pro-OH氨基酸和N,N-二异丙基乙胺DIEA，振荡，然后用甲醇封闭。更为优选地，所述Fmoc-Pro-OH氨基酸与第1位氨基酸R或K的摩尔用量比不小于3:1；所述DIEA与第1位氨基酸R或K的摩尔用量比不小于10:1。优选地，S3中所述活化剂为N,N-二异丙基乙胺DIEA，所述DIEA与第1位氨基酸R或K的摩尔用量比不小于10:1。优选地，S4中切割的过程为：利用切割液进行切割，所述切割液的组成为：TFA95%、水1%、EDT2%、TIS2%；所述切割时间为120min。优选地，所述制备方法还包括在每次连接上所述多肽序列的氨基酸后进行检测的步骤。更为优选地，所述检测的过程为：向2-ChlorotritylChlorideResin中加入检测试剂，于105℃~110℃下加热5min。本领域常规的检测剂均可用于本专利技术。当2-ChlorotritylChlorideResin变深蓝色时为阳性反应。上述十六肽化合物在制备抗血小板聚集或抗血栓的药物、药物组分或药物前体中的应用也在本专利技术的保护范围内。本专利技术提供的十六肽化合物既可单一使用，也可作为抗血栓药物其中一个化合物使用。其一般在室温条件下使用，剂量可为100~400μg/kg/每天，按蛋白多肽化合物类食品或药物的条件使用，同时参照目前市面的抗血栓药物的适用范围。优选地，所述药物为粉剂、注射针剂或口服液。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的十六肽化合物具有延长出血时间，显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成的功能，且毒性低，在制备抗血小板聚集或抗血栓的药物、药物组分或药物前体上具有广阔的应用前景。本专利技术提供的制备方法产率高，工艺简单。附图说明图1为实施例1提供的十六肽化合物的急性毒性实验结果，其中A（左）为对照组未进行灌胃14天后的小鼠状态，A（右）为连续14天每天灌胃5g/kg的十六肽化合物后的小鼠状态；B为鼠处理前后体重变化图，其中NS代表无显著统计学意义；图2为小鼠血液中丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶的活性结果。具体实施方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本专利技术的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本专利技术所要求保护的范围。实施例1本实施例提供一种十六肽化合物，其多肽序列为RTGACFCVIYNGILYP。该十六肽化合物可通过如下制备方法制备得到：合成顺序：从C端到N端。(1)树脂溶涨：将2-ChlorotritylChlorideResin放入反应管中，加DCM(15ml/g)，振荡30min。(2)接第一个氨基酸：通过沙芯抽滤掉溶剂，加入氨基酸R和3倍摩尔过量（与氨基酸R的摩尔量相比）的Fmoc-Pro-OH氨基酸，加入DMF溶解，再加入10倍摩尔过量的DIEA（与氨基酸R的摩尔量相比），振荡60min本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种十六肽化合物，其特征在于，所述十六肽化合物的多肽序列为：RTGACFCVIYNGILYP，或序列第1位氨基酸R替换为K、序列第2位氨基酸T替换为S、序列第8位氨基酸V替换为I或L、序列第9位氨基酸I替换为V或L、序列第11位氨基酸N替换为Q、序列第13位氨基酸I替换为V或L或序列第14位氨基酸L替换为V或I中的一种或几种。

【技术特征摘要】
1.一种十六肽化合物，其特征在于，所述十六肽化合物的多肽序列为：RTGACFCVIYNGILYP，或序列第1位氨基酸R替换为K、序列第2位氨基酸T替换为S、序列第8位氨基酸V替换为I或L、序列第9位氨基酸I替换为V或L、序列第11位氨基酸N替换为Q、序列第13位氨基酸I替换为V或L或序列第14位氨基酸L替换为V或I中的一种或几种。2.权利要求1所述十六肽化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：S1：将2-ChlorotritylChlorideResin溶胀；S2：将所述多肽序列的第1位氨基酸R或K与所述2-ChlorotritylChlorideResin连接后封闭，然后脱保护；S3：在活化剂的作用下通过缩合反应连接所述多肽序列的第2位氨基酸T或S；S4：重复S2~S3的步骤，依次连接所述多肽序列中的氨基酸至序列结束；S5：从2-ChlorotritylChlorideResin上将所述十六肽化合物切割下来后，提纯，浓缩即得。3.根据权利要求2所述十六肽化合物的制备方法，其特征在于，S1中2-ChlorotritylChlorideResin于DCM溶剂中振荡溶胀，所述溶胀的时间为30min。4.根据权利要求2所述十六肽化合物的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海涛，余华军，伍俊，罗辉，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44