酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用技术

技术编号:18952565 阅读:26 留言:0更新日期:2018-09-15 13:46
本发明专利技术公开了一种酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用,酯型儿茶素吡咯烷生物碱由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ或式Ⅴ或式Ⅵ所示结构表示,本发明专利技术提供的酯型儿茶素吡咯烷生物碱对高糖所致人脐静脉内皮细胞(HUVECS)衰老有拮抗作用,可以用于制备抗衰老药物,对农业和医疗健康具有重要意义,其中式Ⅰ结构如下:

Ester catechin pyrrolidine alkaloid and preparation method and application thereof

The present invention discloses an ester-type catechin pyrrolidine alkaloid and its preparation method and application. The ester-type catechin pyrrolidine alkaloid is expressed by the structure shown in formula I or formula II or formula III or formula IV or formula V or formula VI. The ester-type catechin pyrrolidine alkaloid provided in the present invention can induce senescence of human umbilical vein endothelial cells (HUVECS) induced by high glucose. It has antagonistic effect and can be used to prepare anti-aging drugs. It is of great significance to agriculture and medical health. The structure of formula I is as follows:

【技术实现步骤摘要】
酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物碱类化合物领域,具体地说涉及一种酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用。
技术介绍
茶叶中含有丰富的生物碱,占茶叶干物质的3%-5%。其中,大部分是嘌呤类生物碱,以及少量的嘧啶类生物碱。其中咖啡碱占3%-4%,可可碱占0.15%-0.2%,茶碱占0.02%-0.04%。研究表明,咖啡碱是茶叶中重要的滋味物质。而且,咖啡碱还具有强心、利尿、解毒、平喘等药理功能。大叶茶,为云南特有的茶种,原产于云南西双版纳、普洱等地,是制作普洱茶的原材料,尤其是云南大叶种古树茶昔归、紫鹃加工制成的晒青毛茶,晒青毛茶是取茶树一芽一叶或者一芽二,三叶的鲜叶加工而成,加工只有晒青工序,最大程度地保持了大叶种茶的“天然性、原始性”,古树茶昔归,开汤,汤色淡黄清亮,入口即香,无杂味,味甘;三泡后回甘更明显,香气高锐,两颊与舌底生津,舌面感觉微涩,化得很快;四至六泡,香气如兰,冰糖香渐显,深受当地居民喜爱。如果能从大叶茶中发现新型物质及开发出功能性活性成分,将有助加深我们对茶树在演化过程中,物质转化形成机制的认识,并且对合理开发利用大叶种茶提供重要参考,也会对农业和医药等领域作出重要贡献。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题之一是提供一种能够拮抗高糖所致细胞衰老的酯型儿茶素吡咯烷生物碱。酯型儿茶素吡咯烷生物碱,由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ或式Ⅴ或式Ⅵ所示结构表示:本专利技术所要解决的技术问题之二是提供上述酯型儿茶素吡咯烷生物碱在制备拮抗高糖所致细胞衰老药物中的用途。具体可提供一种拮抗高糖所致细胞衰老药物,由上述酯型儿茶素吡咯烷生物碱和药用辅料制成。上述拮抗高糖所致细胞衰老药物的药物剂型包括口服型、外用型和注射型。所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂;所述外用型包括栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂;所述注射型包括注射液、混旋液、冻干粉。具体制备方法参照制药领域的常规方法制备,所用药用辅料根据剂型不同选择制药领域通用的辅料。本专利技术所要解决的技术问题之三是提供上述酯型儿茶素吡咯烷生物碱的制备方法,包括以下步骤:(1)原料粉碎取大叶茶,对其粉碎处理,得到大叶茶粉末;(2)浸提、萃取用石油醚对大叶茶粉末进行浸提,过滤得到石油醚浸提滤渣,再用乙酸乙酯对石油醚浸提滤渣进行浸提,过滤得到乙酸乙酯浸提滤渣,再用甲醇对乙酸乙酯浸提滤渣进行浸提,过滤得到甲醇浸提滤液,甲醇浸提滤液经浓缩后溶于甲醇水溶液中,得到浸提产物甲醇水溶液,最后用二氯甲烷对浸提产物甲醇水溶液进行萃取,上层为甲醇部位水溶性成分,取甲醇部位水溶性成分,浓缩后得到甲醇部位水溶性成分膏状提取物;(3)分离纯化对甲醇部位水溶性成分膏状提取物进行分离纯化,得到所述酯型儿茶素吡咯烷生物碱。进一步地,所述大叶茶选用古树茶昔归晒青毛茶或紫鹃绿茶晒青毛茶。这两种茶都在民间广为流传或经报道具有很好的健康功效,并且经质谱检测含有较多这一类的儿茶素衍生物。进一步地,所述甲醇水溶液的体积浓度为10%。待分离的物质极性较大,采用这个浓度,提取效果更好。进一步地,步骤(2)中,石油醚浸提滤渣和乙酸乙酯浸提滤渣在被浸提前均预先经过干燥处理。这样处理,能够防止在浸提时由于残留溶剂而出现乳化。进一步地,分离纯化处理包括将甲醇部位水溶性成分膏状提取物溶解后依次经过MCI柱层析、Toyopearl柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和高效液相色谱柱洗脱。进一步地,所述大叶茶选用古树茶昔归晒青毛茶,分离纯化的具体过程为:将甲醇部位水溶性成分膏状提取物用<10%的甲醇水溶液溶解后过MCI柱,MCI柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分过Toyopearl柱,Toyopearl柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集40%甲醇水洗脱得到的组分过SephadexLH-20凝胶柱,SephadexLH-20凝胶柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分用高效液相半制备分离,分离色谱柱为PrepC18(10×250mmi.d.,5μm,Waters,Ireland)柱,流速2毫升/分钟,洗脱剂为乙腈水,洗脱条件为35分钟:19%乙腈水等度洗脱,28.761分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅰ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,30.668分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅱ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,26.469分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅲ和式Ⅳ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,33.874分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅴ和式Ⅵ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱。进一步地,所述大叶茶选用紫鹃绿茶晒青毛茶,分离纯化的具体过程为:将甲醇部位水溶性成分膏状提取物用<10%的甲醇水溶液溶解后过MCI柱,MCI柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分过Toyopearl柱,Toyopearl柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分过SephadexLH-20凝胶柱,SephadexLH-20凝胶柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分用高效液相半制备分离,分离色谱柱为PrepC18(10×250mmi.d.,5μm,Waters,Ireland)柱,流速2毫升/分钟,洗脱剂为乙腈水,洗脱条件为35分钟:19%乙腈水等度洗脱,28.766分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅰ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,30.672分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅱ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,26.471分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅲ和式Ⅳ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,33.877分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅴ和式Ⅵ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱。本专利技术所要解决的技术问题之四是提供上述酯型儿茶素吡咯烷生物碱的检测方法,利用UPLC-MS检测方法,流速0.18毫升/分钟;流动相:A相0.1%甲酸水,B相含0.1%甲酸的乙腈;洗脱条件:0-1.5分钟,6%乙腈水;1.5-4分钟,6%乙腈水-12%乙腈水;4-8分钟,12%乙腈水-25%乙腈水;8-10分钟,25%乙腈水-35%乙腈水;10-14分钟,35%乙腈水-45%乙腈水;14-18分钟,45%乙腈水-55%乙腈水;18-20分钟,55%乙腈水-90%乙腈水;20-22分钟,90乙腈水;22-23分钟,90%乙腈水-6%乙腈水;23-25分钟,6%乙腈水;式Ⅰ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的去质子化离子分子量为552.1551,保留时间为12.49分钟;式Ⅱ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的去质子化离子分子量为552.1551,保留时间为12.54分钟;式Ⅲ和式Ⅳ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的去质子化离子分子量为552.1551,保留时间为12.35分钟;式Ⅴ和式Ⅵ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的去质子化离子分子量为552.1551,保留时间为13.12分钟。本专利技术的有益效果体现在:1.本专利技术提供的具有生物活性的酯型儿茶素吡咯烷生物碱对高糖所致人脐静脉内皮细胞(HUVE本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.酯型儿茶素吡咯烷生物碱,其特征在于,由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ或式Ⅴ或式Ⅵ所示结构表示:

【技术特征摘要】
1.酯型儿茶素吡咯烷生物碱,其特征在于,由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ或式Ⅴ或式Ⅵ所示结构表示:2.如权利要求1所述的酯型儿茶素吡咯烷生物碱在制备拮抗高糖所致细胞衰老药物中的用途。3.拮抗高糖所致细胞衰老药物,其特征在于,由如权利要求1所述的酯型儿茶素吡咯烷生物碱和药用辅料制成。4.如权利要求3所述的拮抗高糖所致细胞衰老药物,其特征在于,所述拮抗高糖所致细胞衰老药物的药物剂型包括口服型、外用型和注射型。5.如权利要求1所述的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)原料粉碎取大叶茶,对其粉碎处理,得到大叶茶粉末;(2)浸提、萃取用石油醚对大叶茶粉末进行浸提,过滤得到石油醚浸提滤渣,再用乙酸乙酯对石油醚浸提滤渣进行浸提,过滤得到乙酸乙酯浸提滤渣,再用甲醇对乙酸乙酯浸提滤渣进行浸提,过滤得到甲醇浸提滤液,甲醇浸提滤液经浓缩后溶于甲醇水溶液中,得到浸提产物甲醇水溶液,最后用二氯甲烷对浸提产物甲醇水溶液进行萃取,上层为甲醇部位水溶性成分,取甲醇部位水溶性成分,浓缩后得到甲醇部位水溶性成分膏状提取物;(3)分离纯化对甲醇部位水溶性成分膏状提取物进行分离纯化,得到所述酯型儿茶素吡咯烷生物碱。6.如权利要求5所述的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的制备方法,其特征在于,所述大叶茶选用古树茶昔归晒青毛茶或紫鹃绿茶晒青毛茶。7.如权利要求5或6所述的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的制备方法,其特征在于,分离纯化处理包括将甲醇部位水溶性成分膏状提取物溶解后依次经过MCI柱层析、Toyopearl柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和高效液相色谱柱洗脱。8.如权利要求5或6所述的酯型儿茶素吡咯烷生物碱的制备方法,其特征在于,所述大叶茶选用古树茶昔归晒青毛茶,分离纯化的具体过程为:将甲醇部位水溶性成分膏状提取物用<10%的甲醇水溶液溶解后过MCI柱,MCI柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分过Toyopearl柱,Toyopearl柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集40%甲醇水洗脱得到的组分过SephadexLH-20凝胶柱,SephadexLH-20凝胶柱使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱,收集50%甲醇水洗脱得到的组分用高效液相半制备分离,分离色谱柱为PrepC18(10×250mmi.d.,5μm,Waters,Ireland)柱,流速2毫升/分钟,洗脱剂为乙腈水,洗脱条件为35分钟:19%乙腈水等度洗脱,28.761分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅰ所示的酯型儿茶素吡咯烷生物碱,30.668分钟洗脱液经浓缩干燥...

【专利技术属性】
技术研发人员:鲍官虎程剑
申请(专利权)人:安徽农业大学
类型:发明
国别省市:安徽,34

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