金纳米-脂质体复合纳米颗粒及其药物组合物和应用制造技术

本发明专利技术提供一种金纳米‑脂质体复合纳米颗粒，所述纳米颗粒为由脂质体囊泡包裹的金纳米颗粒，所述脂质体囊泡的表面修饰有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇，所述金纳米颗粒表面修饰有质粒和穿膜肽，所述脂质体囊泡由二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3‑二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇组成。本发明专利技术还提供了所述金纳米‑脂质体复合纳米颗粒的制备方法及其包括所述金纳米‑脂质体复合纳米颗粒的一种药物组合物。本发明专利技术提供的金纳米‑脂质体复合纳米颗粒作为载体具有较高的转染效果，本发明专利技术提供的药物组合物对于多种肿瘤具有较好的治疗效果。

Gold nanoparticle liposome composite nanoparticles and their pharmaceutical compositions and Applications

The invention provides a gold nanoparticle liposome composite nanoparticle. The nanoparticle is a gold nanoparticle encapsulated by a liposome vesicle. The surface of the liposome vesicle is modified with a Distearyl phosphatidylethanolamine polyethylene glycol. The gold nanoparticle is modified with a plasmid and a membrane penetrating peptide, and the liposome vesicle is covered with a gold nanoparticle. It consists of two oil phosphatidylethanolamine, 2,3 two, three hydroxymethyl propyl ammonium chloride and cholesterol. The invention also provides a preparation method of the gold nanoliposome composite nanoparticles and a pharmaceutical composition comprising the gold nanoliposome composite nanoparticles. The gold nanoparticle liposome composite nanoparticle provided by the invention has high transfection effect as a carrier, and the drug composition provided by the invention has good therapeutic effect for a variety of tumors.

【技术实现步骤摘要】
金纳米-脂质体复合纳米颗粒及其药物组合物和应用
本专利技术属于医药
具体而言，本专利技术提供了一种金纳米-脂质体复合纳米颗粒及其药物组合物和应用。
技术介绍
目前，在多种肿瘤的基因治疗中，常用载体主要有病毒载体和非病毒载体。虽然病毒载体展现了优秀的基因转染效率，但是它们可能引发突变和其它致癌作用。再者，病毒载体的重复使用可能诱发免疫缺失。而常用的非病毒载体包括聚合物，纳米颗粒(磁性纳米粒子、金纳米颗粒、具有不同表面修饰的碳纳米颗粒)和商业试剂(Lipofectamine2000,Lipofectamine3000)等，转染效率较低，不能对癌症起到很好的基因治疗效果。而目前金纳米颗粒的使用很大程度的用于肿瘤的光热治疗，在基因治疗方面的应用也仅用于载体。CRISPR/Cas9系统是一个多功能的基因编辑平台，在治疗具有挑战性的疾病(如癌症)时有潜在的优势。但由于常用的Cas9蛋白尺寸较大，目前的常用载体很难对其进行高效的递送，限制了其在基础研究和治疗的应用。因此，寻找一种合适的载体将治疗肿瘤的药物(如CRISPR/Cas9系统)高效地递送到肿瘤病灶，就显得尤为重要。
技术实现思路
因此，基于上述已有技术的缺陷，本专利技术的目的是提供一种金纳米-脂质体复合纳米颗粒及其药物组合物和应用。针对上述专利技术目的，本专利技术是通过下述技术方案实现的：本专利技术提供一种金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其中，所述纳米颗粒为由脂质体囊泡包裹的金纳米颗粒，所述脂质体囊泡的表面修饰有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)，所述金纳米颗粒表面修饰有穿膜肽和质粒，所述脂质体囊泡由二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵(DOTAP)和胆固醇组成。优选地，根据前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其中，所述穿膜肽为HIV-1-transactivator转录肽。更优选地，根据前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其中，所述金纳米颗粒的粒径为10～20nm。再优选地，根据前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其中，所述金纳米颗粒和所述质粒的摩尔比为0.1～1000：0.1～10000000，优选为0.1～100：1～100000，更优选为0.1～10:5000～100000，还优选为1～1000：50000。还优选地，根据前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其中，所述脂质体囊泡中的二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇摩尔比为0.1～4：0.1～8：0.1～9，优选为0.2～4：0.1～5：0.1～6。本专利技术提供一种前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒的制备方法，其中，所述方法包括：(1)按照配比，将穿膜肽，质粒与金纳米颗粒混合后静止获得第一混合液，(2)按照配比，将步骤(1)获得的第一混合液与脂质体囊泡混合后静止获得第二混合液，(3)按照配比，将步骤(2)获得的第二混合液与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇混合获得所述脂质体纳米颗粒。优选地，步骤(1)、(2)的静止时间和/或(3)的混合时间为15-30分钟。其中，步骤(1)中穿膜肽、质粒与金纳米颗粒可在水、PBS或葡萄糖溶液中进行混合。步骤(3)中所述混合温度可为55℃。优选地，根据前述的制备方法，其中，步骤(2)中的所述脂质体囊泡的制备方法包括：(a)按照配比，将二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇溶于氯仿与甲醇的混合液中，(b)旋转蒸发步骤(a)获得的所述混合液至只剩磷脂膜，(c)在步骤(b)获得的所述磷脂膜中加入水、PBS或葡萄糖，(d)超声至形成所述脂质体囊泡。优选地，步骤(b)中的旋转蒸发温度为30-35℃。本专利技术提供一种药物组合物，其中，所述药物组合物包括治疗肿瘤的药物和前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒。优选地，所述治疗肿瘤的药物选自以下的一种或多种：核苷酸、核苷酸衍生物、核酸、核酸衍生物、多肽和蛋白。其中，所述金纳米-脂质体复合纳米颗粒可作为所述药物的载体。优选地，根据前述的药物组合物，其中，所述治疗肿瘤的药物包括核酸时，所述核酸的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示或如SEQIDNO：1所示的任意一种核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且具有相同功能的核苷酸序列，优选地，所述核酸选自脱氧核糖核酸、小干扰核糖核酸和导向核糖核酸中的一种或多种；所述治疗肿瘤的药物包括蛋白时，所述蛋白为Cas9。在一些实施方案中，在所述药物组合物中，所述治疗肿瘤的药物为CRISPR/Cas9系统。其中，所述CRISPR/Cas9系统中sgRNA的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，可以促进细胞凋亡(GenBankid:568815582:23678822-23690367)。本专利技术提供前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒或前述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药品或医疗产品中的应用。优选地，所述肿瘤为黑色素瘤、前列腺癌或乳腺癌。在采用前述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒作为载体的转染过程中，可以采用激光照射的方法提高细胞摄入率和转染效率。具体地，所述激光照射的时间可以为1～20分钟，所述激光照射的强度可以为10-100mW～24-48W/cm2，激光器为500-540nm。本专利技术提供的金纳米-脂质体复合纳米颗粒作为载体具有较高的转染效果。通过采用所述金纳米-脂质体复合纳米颗粒，在不需要任何其他转染试剂的情况下，可以高效地将CRISPR/Cas9系统递送到细胞内，通过激光照射，提高了细胞摄入率和转染效率，从而达到多种肿瘤的基因治疗效果。本专利技术提供的药物组合物对于多种肿瘤具有较好的治疗效果。附图说明以下，结合附图来详细说明本专利技术的实施方案，其中：图1示出了本专利技术提供的金纳米-脂质体复合纳米颗粒的制备以及治疗流程；图2示出了实施例1所制备的纳米颗粒；其中，附图标记A为所述纳米颗粒的结构，附图标记B为质粒，金纳米颗粒与穿膜肽摩尔比50000：1：10制备的纳米颗粒；附图标记C为质粒，金纳米颗粒与穿膜肽摩尔比50000：1000：1000制备的纳米颗粒。图3示出了实施例1所述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒作为载体对黑色素瘤的治疗；图4示出了在不同照射时间和激光强度下，实施例8制备的金纳米-脂质体复合纳米颗粒的体外转染效果；附图标记说明：1、金纳米颗粒；2、穿膜肽；3、质粒；4、脂质体囊泡。具体实施方式下面通过具体的实施例进一步说明本专利技术，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本专利技术。以下实施例中，除具体指明的试验材料、条件以及操作方法外，实施例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的。因此，本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本专利技术所用材料和操作方法是本领域公知的。以下实施例中使用的试剂和仪器如下：试剂：十六烷基三甲基溴化铵CTAB，氯金酸，硼氢化钠，硝酸银，硫酸，抗坏血酸，二油酰磷脂酰乙醇胺，2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵，胆固醇，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)，氯仿，甲醇，购自上海西格玛奥德里奇；sgPLK-1a质粒，穿膜肽HIV-1-transactivator转录肽：唯尚立德。实施例1：本实施例用于说明本专利技术提供的金纳米-脂质体复合纳米颗粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金纳米‑脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述纳米颗粒为由脂质体囊泡包裹的金纳米颗粒，所述脂质体囊泡的表面修饰有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇，所述金纳米颗粒表面修饰有穿膜肽和质粒，所述脂质体囊泡由二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3‑二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇组成。

【技术特征摘要】
1.一种金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述纳米颗粒为由脂质体囊泡包裹的金纳米颗粒，所述脂质体囊泡的表面修饰有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，所述金纳米颗粒表面修饰有穿膜肽和质粒，所述脂质体囊泡由二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇组成。2.根据权利要求1所述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，金纳米颗粒表面修饰的所述穿膜肽为HIV-1-transactivator转录肽。3.根据权利要求1或2所述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述金纳米颗粒的粒径为10～20nm。4.根据权利要求1至3中任一项所述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述金纳米颗粒和所述质粒的摩尔比为0.1～1000：0.1～10000000，优选为0.1～100：1～100000，更优选为0.1～10:5000～100000，还优选为1～1000：50000。5.根据权利要求1至4中任一项所述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述脂质体囊泡中的二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇摩尔比为0.1～4：0.1～8：0.1～9，优选为0.2～4：0.1～5：0.1～6。6.一种权利要求1至5中任一项所述的金纳米-脂质体复合纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：(1)按照配比，将质粒，穿膜肽与金纳米颗粒混合后静止获得第一混合液，(2)按照配比，将步骤(1)获得的第一混合液与脂质体囊泡混合后静止获得第二混合液，(3)按照配比，将步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋兴宇，王鹏，郑文富，张灵敏，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京,11