一种用于生化试剂复合酶的复合稳定剂及其应用，属于生化试剂技术领域。本发明专利技术的目的主要是保持复合酶中每种酶活力均能够有效保持的用于生化试剂复合酶的复合稳定剂及其应用。本发明专利技术由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白；蔗糖；乙二胺四乙酸二钠。本发明专利技术稳定剂构成成分简单，制备方法容易，成本低廉，维持生化试剂的长期稳定性，是一种高效的生化试剂复合酶的复合稳定剂。
Compound stabilizer for compound enzyme of biochemical reagent and its application
The invention relates to a compound stabilizer for biochemical enzyme compound enzyme and its application, belonging to the biochemical reagent technology field. The aim of the present invention is mainly to maintain the activity of each enzyme in the compound enzyme and to effectively maintain the compound stabilizer for biochemical reagent complex enzyme and its application. The invention is prepared by mixing the following weight parts of raw materials: bovine serum albumin; sucrose; disodium ethylenediaminetetraacetate. The stabilizer has the advantages of simple composition, easy preparation method, low cost, long-term stability of biochemical reagents, and is a high-efficiency compound stabilizer of biochemical reagent complex enzyme.
【技术实现步骤摘要】
一种用于生化试剂复合酶的复合稳定剂及其应用
本专利技术属于生化试剂
技术介绍
我国的临床生化诊断试剂一直不如欧美，甚至日本的一个主要原因，就是试剂的稳定性不如国外品牌，生化试剂中大部分生化反应是由酶来催化完成的，酶的稳定性就决定了试剂的稳定性。酶在液体中的稳定性一直是一个众所周知的难题，特别是在含酶的生化试剂中，确保酶的活性不随时间的改变而改变是个大难题。提高酶稳定性的方法很多，常见的有：固定化法、化学修饰法、蛋白质工程法、添加保护剂等方法。其中，使用保护剂是研究酶储藏稳定性最普通、最简单的方法，且有成本低、操作简单等优点。常用的保护剂有某些防腐剂、糖类、多元醇、蛋白及盐类等，在具体选择保护剂时，应根据保护剂与酶的相互作用不同而加以选择。常用的生化试剂单一稳定剂主要有D-甘露醇、D-海藻糖、蔗糖、无水葡萄糖、DTT、乙二醇、甘油、黄原胶、明胶、牛血清白蛋白等，不同的酶选择不同的稳定剂。但随着生化试剂配方的复杂化，加入酶的种类越来越多，试剂中的酶为至少2种酶以上的复合酶，例如葡萄糖测定试剂中含有葡萄糖氧化酶和过氧化物酶两种酶，只加入一种稳定剂不足以维持两种酶的活力，从而影响试剂的稳定性。目前，随着生化试剂的不断发展，试剂配方越来越复杂化，如何使试剂中的复合酶保持较高的活力成为生化试剂的难点，所以复合稳定剂的研究逐渐开展起来。根据单一稳定剂及酶的特性，使用至少两种单一稳定剂以上的组合，使酶保持较高的活力，以维持试剂的稳定。
技术实现思路
本专利技术的目的主要是保持复合酶中每种酶活力均能够有效保持的用于生化试剂复合酶的复合稳定剂及其应用。本专利技术由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白0.3-2；蔗糖0.1-3；乙二胺四乙酸二钠0.01-0.1。本专利技术各原料的重量份原料优选为：牛血清白蛋白0.3；蔗糖2.5；乙二胺四乙酸二钠0.02。本专利技术用于生化试剂复合酶的复合稳定剂在复合酶保持稳定酶活力的应用。本专利技术的优点和积极效果如下：1.本专利技术复合稳定剂配伍科学，稳定效果明显，成本低廉，加入稳定剂后的两种酶液均可在65℃水浴2h后其残存酶活力保持在55%以上，不加稳定剂的酶活力保持在25%左右。加入稳定剂后的两种酶液均可在室温25℃左右保存2个月后其残存酶活力保持在85%以上，不加稳定剂的酶活力保持在55%左右。2.本专利技术稳定剂构成成分简单，制备方法容易，成本低廉，维持生化试剂的长期稳定性，是一种高效的生化试剂复合酶的复合稳定剂。具体实施方式本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种用于生化试剂复合酶的复合稳定剂，以使添加了该复合稳定剂的生化试剂的长期稳定性增强。本专利技术由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白0.3-2；蔗糖0.1-3；乙二胺四乙酸二钠0.01-0.1。本专利技术各原料的重量份原料优选为：牛血清白蛋白0.3；蔗糖2.5；乙二胺四乙酸二钠0.02。实施例1本专利技术由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白0.3；蔗糖0.1；乙二胺四乙酸二钠0.01。实施例2本专利技术由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白1.1；蔗糖1.6；乙二胺四乙酸二钠0.06。实施例3本专利技术由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白2；蔗糖3；乙二胺四乙酸二钠0.1。实施例4本专利技术各原料的重量份原料优选（最佳配比）为：牛血清白蛋白0.3；蔗糖2.5；乙二胺四乙酸二钠0.02。本专利技术用于生化试剂复合酶的复合稳定剂在复合酶保持稳定酶活力的应用。本专利技术的复合稳定剂主要是由三种成分组成，其中添加了乙二胺四乙酸二钠，它可以排除大部分过度金属元素对测试的干扰，而且与牛血清白蛋白、蔗糖组合到一起后会对蛋白活性起一定的保护作用，使酶保持较高的活力，从而维持试剂的稳定性。以下通过稳定性实验来证明本申请的有效性：实验1该稳定剂由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白1；蔗糖3；乙二胺四乙酸二钠0.01。为了考察稳定剂对生化试剂复合酶体系保藏的效果，专利技术人利用本实施例的复合稳定剂做了以下实验。因复合酶中主要含有葡萄糖氧化酶和过氧化物酶，所以分别对两种酶进行实验。1.不同稳定剂对葡萄糖氧化酶的影响1.1葡萄糖氧化酶酶活力测定酶活力单位定义为：酶液在37℃、pH4.0的条件下,1min内催化葡萄糖反应产生1μg过氧化氢所需的酶量为一个活力单位(U)。1.2酶热稳定性的测定将加有不同种类、不同浓度稳定剂的酶液(酶活力单位约8000U/mL)在pH4.0,65℃水浴下处理2h后，立即用冷水冷却，稀释至适宜倍数，测其酶活。以不加稳定剂的酶液作对照,分别计算酶活保留率。表1不同稳定剂对葡萄糖氧化酶热稳定性的影响1由表1可知加入复合稳定剂后,酶活保留率均高于各种单一稳定剂单独使用时的酶活保留率,其中选用1%牛血清白蛋白、3%蔗糖和0.01%的乙二胺四乙酸二钠组成的复合稳定剂加入酶液中,65℃水浴处理2h后残酶活可达58.7%，较对照高出33.2%。1.3葡萄糖氧化酶的保存实验葡萄糖氧化酶的保存实验在室温25℃左右进行，不加防腐剂的酶液很容易发生霉变，因此先在酶液中加入防腐剂。然后将加有不同种类、不同浓度稳定剂的酶液于pH4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液中,分别于洗净灭菌过的大三角瓶中,室温下放置60d，测定各自的酶活保留率。表2不同稳定剂对葡萄糖氧化酶的储存稳定性1由表2可知加入复合稳定剂后,酶活保留率均高于各种单一稳定剂单独使用时的酶活保留率,复合稳定剂组在平均温度25℃左右的室温下保存2个月,酶活保留率高达89.5%,比对照高出31.4%。2.不同稳定剂对过氧化物酶的影响2.1过氧化物酶酶活力测定测定方法：以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在过氧化物酶存在及pH6.0的磷酸盐缓冲液条件下，过氧化氢可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的物质，可用分光光度计在470nm处测定吸光度值，即可求出该酶的活性。2.2酶热稳定性的测定将加有不同种类、不同浓度稳定剂的酶液(酶活力单位约8000U/mL)在pH6.0,65℃水浴下处理2h后，立即用冷水冷却，稀释至适宜倍数，测其酶活。以不加稳定剂的酶液作对照,分别计算酶活保留率。表3不同稳定剂对过氧化物酶热稳定性的影响1由表3可知加入复合稳定剂后,酶活保留率均高于各种单一稳定剂单独使用时的酶活保留率,其中选用1%牛血清白蛋白、3%蔗糖和0.01%的乙二胺四乙酸二钠组成的复合稳定剂加入酶液中,65℃水浴处理2h后残酶活可达57.8%，较对照高出32.6%。2.3过氧化物酶的保存实验过氧化物酶的保存实验在室温25℃左右进行，不加防腐剂的酶液很容易发生霉变，因此先在酶液中加入防腐剂。然后将加有不同种类、不同浓度稳定剂的酶液于pH6.0的磷酸盐缓冲液中,分别于洗净灭菌过的大三角瓶中,室温下放置60d，测定各自的酶活保留率。表4不同稳定剂对过氧化物酶的储存稳定性1由表4可知加入复合稳定剂后,酶活保留率均高于各种单一稳定剂单独使用时的酶活保留率,复合稳定剂组在平均温度25℃左右的室温下保存2个月,酶活保留率高达87.4%,比对照高出31%。实验2该稳定剂由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白0.8；蔗糖0.2；乙二胺四乙酸二钠0.08。为了考察稳定剂对生化试剂酶体系保藏的效果，专利技术人利用本实施例的复合稳定剂做了以下实验。因复合本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于生化试剂复合酶的复合稳定剂，其特征在于：由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白 0.3‑2； 蔗糖0.1‑3；乙二胺四乙酸二钠0.01‑0.1。
【技术特征摘要】
1.一种用于生化试剂复合酶的复合稳定剂，其特征在于：由以下重量份的原料混合制成：牛血清白蛋白0.3-2；蔗糖0.1-3；乙二胺四乙酸二钠0.01-0.1。2.根据权利要求1所述的用于生化试剂复合...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，徐李鹏，刘玲，赵雪，
申请(专利权)人：吉林基蛋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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