一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法，包括如下步骤：(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，配制标准品溶液；(2)采用C18色谱柱、含有78～82％甲醇且余量为水的流动相进行洗脱，得色谱图；(3)绘制线性回归方程；(4)取含有丹参酮IIA的待测样品，加入甲醇进行提取，得待测样品溶液，将其色谱峰的峰面积带入所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。本发明专利技术的方法可以最大限度地将丹参酮IIA与其类似物杂质分离，确保丹参酮IIA被充分提取出来，并选择特定的流动相有效地提高检测的准确性。利用本发明专利技术的高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量时，具有专属性好，灵敏度高等优点。

A HPLC method for the determination of tanshinone IIA content

The invention relates to a method for the determination of tanshinone IIA content by high performance liquid chromatography, which comprises the following steps: (1) taking tanshinone IIA standard sample and preparing standard solution with methanol as solvent; (2) eluting it with C18 chromatographic column and mobile phase containing 78-82% methanol and the residual amount of water to obtain chromatogram; (3) drawing a linear diagram; Regression equation; (4) Take the sample containing tanshinone IIA, add methanol to extract, get the sample solution, and bring the peak area of the chromatographic peak into the linear regression equation, get the content of tanshinone IIA in the sample. The method of the invention can separate tanshinone IIA from impurities of its analogues to the greatest extent, ensure that tanshinone IIA is fully extracted, and select a specific mobile phase to effectively improve the detection accuracy. The high performance liquid chromatography method for the determination of tanshinone IIA has the advantages of good specificity and high sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法
本专利技术涉及中药中有效成分的分析
，具体涉及一种通过高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法。
技术介绍
丹参酮ⅡA为桔红色针状结晶,易溶于乙醇、丙酮、乙醚、苯等有机溶剂，微溶于水。其广泛应用于治疗心血管病的中成药制剂，如片剂、胶囊、冲剂、针剂，具有扩展血管、降压、抗栓的功能，对治疗冠心病、心绞痛、心律过速有显著疗效。然而，目前对于药材尤其时中成药中丹参酮IIA含量的测定，存在提取时受相似结构杂质干扰导致分离困难、检测精确度不高等缺陷。因此，亟待开发一种步骤简便、精度高的丹参酮IIA含量测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种通过高效液相色谱测定丹参酮IIA的含量的方法。本专利技术针对的含有丹参酮IIA的待测样品可以是丹参药材、丹参提取物或含有丹参酮IIA的中成药。所述丹参提取物可采用本领域常规的方法制备得到，例如：以乙醇为溶剂回流提取得到。本专利技术所述含有丹参酮IIA的中成药是本领域已知市售的品种，例如：复方血栓通胶囊、归龙接骨胶囊、赤丹胶囊等。本专利技术通过大量实践发现，当多种功效药材以及辅料共同加工成中成药时，由于其它成分和杂质的干扰，导致丹参酮IIA含量的提取步骤更为繁琐，结果准确性难以保证，而本专利技术提供的方法通过巧妙地选择甲醇作为提取溶剂，可以使丹参酮IIA被简便且充分地提取，为含量的准确检测提供保障，并选择特定比例的流动相进行洗脱分离；本专利技术提供的方法尤其适合待测样品为含有丹参的中成药时的情况。具体而言，本专利技术提供的方法包括如下步骤：(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱、含有78～82％甲醇且余量为水的流动相进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中丹参酮IIA色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)取含有丹参酮IIA的待测样品，干燥粉碎后，加入甲醇进行提取，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中丹参酮IIA色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。本专利技术通过大量实践发现，在提取丹参酮IIA尤其是含有大量且复杂杂质的情况下，常规用于提取丹参酮IIA的溶剂如乙醇、乙腈等对于丹参酮IIA的提取效率较低，而甲醇的提取效率高(比乙醇提高约25％，比乙腈提高约15％)。此外，不同浓度的甲醇水溶液对丹参酮IIA的提取效率也有明显差异，当采用纯甲醇时提取效率最好，且其他水溶性杂质较少。具体而言，本专利技术所述待测样品溶液的制备方法具体为：称取待测样品，每克样品加入10～15ml甲醇，超声提取后离心，取上清液；提取至少两次后合并上清液。本专利技术通过大量实践发现，对于1g的待测样品而言，10～15ml甲醇单次提取并不能实现对丹参酮IIA的充分提取，而当提取2次以上并合并提取液，则可确保目标成分充分溶出。为了进一步减少杂质的影响，可将所述上清液过0.45μm滤膜后，再上样于高效液相色谱。作为本专利技术的一种具体的优选方案，所述待测样品溶液的制备方法具体为：称取待测样品1～3g，每克样品加入10～15ml甲醇，超声提取后混匀，以5500～6500r/min的速度离心，取上清液，在所得残渣中再次加入10～15ml甲醇进行提取，以4500～5500r/min的速度离心，取上清液，汇总上清液，过0.45μm滤膜，即可。本专利技术所述步骤(1)所述多份标准品溶液的浓度优选为1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL以及20.0μg/mL。在上述浓度标准品的覆盖范围内，本专利技术提供的方法具有极高的准确性。相应地，为了满足检测的准确性，本专利技术优选所述待测样品的取样量为1～3g。采用高效液相色谱检测时，优选所述标准品溶液或待测样品溶液的进样量为18～22μL。所述流动相的流速为1～1.5ml/min。本专利技术提供的方法采用UV-DAD检测器对经高效液相色谱分离后的样品进行检测；优选地，所述UV-DAD检测器的检测波长为270nm。本专利技术的方法可以最大限度地将丹参酮IIA与其类似物杂质分离，确保丹参酮IIA被充分提取出来，并选择特定的流动相有效地提高检测的准确性。利用本专利技术的高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量时，具有专属性好，灵敏度高等优点。附图说明图1为实施例1所得的线性回归方程；图2为实施例1所得待测样品溶液以及浓度为5.0μg/mL的标准品溶液的色谱图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1本实施例提供了一种测定丹参酮IIA含量的方法，该方法以丹参药材为待测样品，具体为：(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制浓度分别为1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL以及20.0μg/mL的多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别以20μL的进样量上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱、含有80％甲醇且余量为水的流动相以流速1ml/min进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中丹参酮IIA色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程(如图1所示，丹参酮ⅡA含量在0.5～5μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系)；所示线性回归方程具体为：F＝80.528C(μg/mL)-12.933，R2＝0.9994；(4)称取待测样品1g，加入10ml甲醇，超声提取后混匀，以6000r/min的速度离心，取上清液，在所得残渣中再次加入10ml甲醇进行提取，以5000r/min的速度离心，取上清液，汇总上清液，过0.45μm滤膜，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中丹参酮IIA色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。待测样品溶液以及浓度为5.0μg/mL的标准品溶液的色谱图如图2所示。由图2可知，样品中的杂质与丹参酮ⅡA得到了很好的分离，且样品与标准溶液中的丹参酮ⅡA保留时间几乎一致，该方法具有很好的专属性。平行测定该批样品三次，计算出该样品中丹参酮ⅡA的含量，结果见表1。表1：样品测定结果由上表实验结果可知相对标准偏差RSD为0.16％，精确度高。本专利技术采用与实施例1相同的方法对含有丹参酮IIA的多种中成药进行检测，均能获得精确的结果。实验例1：检出限及定量限根据流动相中样品组分在检测器上产生3倍基线噪声信号时所对应的浓度为检出限，流动相中样品组分在检测器上产生10倍基线噪声信号时所对应的浓度为定量限。该方法的检出限为197.9ng/mL，定量限为284.8ng/mL。实验例2：精密度1)按照实施例1提供的方法平行测定三份浓度为1.0μg/mL的标准溶液，结果见表1。表1：精密度(n＝3)由表1可见，相对标准偏差RSD为0.47％，试验方法精密度符合要求。2)分别称取三份1g的待测样品，计算其精密度，测定结果见表2。表2：精密度由表2可见，相对标准偏差RSD为1.9本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱、含有78～82％甲醇且余量为水的流动相进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中丹参酮IIA色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)取含有丹参酮IIA的待测样品，干燥粉碎后，加入甲醇进行提取，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中丹参酮IIA色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱、含有78～82％甲醇且余量为水的流动相进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中丹参酮IIA色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)取含有丹参酮IIA的待测样品，干燥粉碎后，加入甲醇进行提取，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中丹参酮IIA色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为丹参药材、丹参提取物或含有丹参酮IIA的中成药。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待测样品溶液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李颖，李永强，陈超，黄瑛，温霖，李爱民，
申请(专利权)人：国珍健康科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11