草豆蔻中桤木酮的含量测定方法技术

本发明专利技术属于中药质量控制领域，尤其涉及一种采用GC/MS法测定草豆蔻中桤木酮含量的方法。本发明专利技术采用的气相色谱串联质谱(GC/MS)技术是利用气相色谱进行有机物的分离，并由串联质谱完成待测物的定性和定量分析。本发明专利技术相比于以往分析方法，具有高选择性、线性范围大、高灵敏度、高准确度与精密度、分析时间短、样品处理步骤简单、等优点，适用于桤木酮含量差异较大的食品、药品质量分析，可为含桤木酮的食品、药材质量评价研究及草豆蔻的药典改进提供全新的检测方法，同时也可为桤木酮的体内分析研究提供技术参考。

Determination of alnalcone in Amomum cardamom

The invention belongs to the field of quality control of traditional Chinese medicine, in particular to a method for determining the content of aldehyde in Myristica cardamom by GC/MS. The gas chromatography tandem mass spectrometry (GC/MS) technique adopted by the invention is to separate organic matter by gas chromatography, and the qualitative and quantitative analysis of the substance to be measured is completed by the tandem mass spectrometry. Compared with the previous analytical methods, the present method has the advantages of high selectivity, wide linear range, high sensitivity, high accuracy and precision, short analytical time, simple sample processing steps and the like, and is suitable for the quality analysis of food and medicines containing alder ketone, and can be used for the evaluation and research of the quality of food and medicinal materials containing alder ketone. The Pharmacopoeia improvement provides a new method for the determination of aldosterone, and also provides a technical reference for the in vivo analysis of aldosterone.

【技术实现步骤摘要】
草豆蔻中桤木酮的含量测定方法
本专利技术属于中药质量控制领域，尤其涉及一种草豆蔻中桤木酮的含量测定方法。
技术介绍
草豆蔻(AlpiniakatsumadaiHayata)又名草蔻、豆蔻等，为姜科(Zingiberaceae)山姜属(AlpiniaRoxburgh)植物的干燥近成熟种子，主要分布于我国海南、广东、广西和云南等地，性温、味辛，归脾、胃经，具有燥湿行气，温中止呕功效；临床用于寒湿内阻，脘腹胀满冷痛，嗳气呕逆，不思饮食。草豆蔻化学成分主要为挥发油类、黄酮类、二苯庚烷类,尚有萜类、多糖等成分。二苯庚烷类化合物是具有1,7-二取代芳基并庚烷骨架结构化合物的统称，是一类低极性化合物，主要分为线性二苯庚烷类和环状二苯庚烷类，其中(4E,6E)-1,7-diphenylhepta-4,6-dien-3-one即桤木酮，为线性二苯庚烷类的重要代表之一。研究表明，以桤木酮为代表的二苯庚烷类化合物为一类重要生物活性成分，其在镇吐、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等方面表现出较好的药理活性。镇吐作用：YangY等对草豆蔻药理作用研究表明二苯庚烷类化合物为其镇吐止呕的有效成分；而DaitetsuShin等通过小鼠镇痛和家鸽止呕药效指标模型，对高良姜不同化学部位(即水提液、醇提液、挥发油、水提乙酸乙酯萃取物、醇提乙酸乙酯萃取物)进行筛选，结果显示各部位均具有镇痛、止呕双重药理作用，而且醇提物的活性强于水提物。抗炎作用：黄文哲等证明豆蔻明、乔松素、桤木酮和山姜素对幽门螺杆菌有抑制作用，是其治疗胃部疾病的主要原因之一；还表明这4个化合物也是草豆蔻抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌等细菌的活性成分，但只有二苯庚烷类化合物桤木酮对幽门螺杆菌和金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌等都表现出了较强抑菌活性。YANGJ等研究口服草豆蔻对鼠败血症的药理作用结果表明与显著降低血清炎性因子(TNF-α、IL-1β)水平有关。抗癌作用：李元圆等通过对草豆蔻化学成分及体外抗肿瘤作用的研究，表明草豆蔻70％乙醇提取物的乙酸乙酯部位化学成分主要为二苯庚烷类成分桤木酮、豆蔻明、山姜素、乔松素，是草豆蔻的主要化学成分。而采用MTT法测定化合物对Bel7402和L0-2细胞增殖的抑制率，实验结果表明桤木酮能显著抑制Bel7402和L0-2细胞增殖，其他几种化合物对Bel7402和L0-2细胞增殖抑制不明显。抗氧化作用：LeeSiEun等研究发现高良姜提取液能减轻氧化剂H2O2对V79-4细胞繁殖的抑制作用，用高良姜提取液(100μg/ml)处理过的细胞比未处理过的成活率提高48％，推测与其活性成分二苯庚烷类等有关，且对自由基生成抑制作用明显。目前，仅有文献和中国药典报道利用TLC和HPLC法对草豆蔻中桤木酮进行定性鉴别和含量测定，但TLC和HPLC定性定量方法操作繁琐，耗时长，定量不够准确，检测限较高，不适用于桤木酮低含量和含量差异较大的药材检测。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种草豆蔻中桤木酮的含量测定方法，具体为采用GC/MS法测定草豆蔻中桤木酮含量的方法。该方法可以高效率的对中药材草豆蔻中桤木酮进行鉴别及含量测定。为了实现上述目的，本专利技术提供的草豆蔻中桤木酮的含量测定方法，具体包括以下步骤。(1)供试品溶液的制备分别称取3批草豆蔻干燥药材，用粉碎机粉碎(过3号筛)，得药材细粉末，置密封袋于干燥器中保存备用。精密称取药材细粉约1.0g，放入已知重量的250ml锥形瓶中，依次精密加入甲醇溶剂(分析纯)100ml和咖啡因内标储备液5ml，称重，记录溶剂总重量，盖紧瓶塞并用锡箔纸和封口膜包裹，置于超声清洗器中超声30min，放冷称重，用甲醇溶剂补足损失重量，过滤，取溶剂总体积一半的续滤液置于旋蒸瓶中，于45℃旋蒸挥干溶剂，用甲醇复溶，用有机系0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液置50ml容量瓶中定容，即得供试品溶液。(2)对照品及内标储备溶液的制备。分别称取桤木酮对照品约0.02g和咖啡因标准品(内标)约0.02g，精密称定，置100ml烧杯中，加甲醇(色谱纯)20ml溶解，置50ml容量瓶加甲醇(色谱纯)定容，即得对照品储备溶液(394.0μg/ml)和内标储备溶液(388.0μg/ml)。(3)GC-MS条件。GC条件：SH-Rxi-5SilMS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm，日本岛津公司)；程序升温，起始温度100℃，保持3min，以30℃/min升至260℃，保持6min，再以10℃/min升至280℃，保持6min；载气(He)总流速20mL/min，柱流速2.35ml/min，压力165.7kPa；分流比30:1；进样口温度250℃；进样体积1μl。MS条件：接口温度270℃；电子轰击(EI)离子源；电子能量70eV；离子源温度200℃；溶剂切除时间2.5min；数据采集方式SIM模式，SIM条件为“分组1：采集时间9～12min；每个质量数扫描时间0.2s；质量数选择194、109、165。分组2：采集时间14～18min；每个质量数扫描时间0.2s；质量数选择262、171、128、157。(4)建立回归方程。精密量取对照品储备液100～200μl，甲醇倍比稀释，分别加入等量内标溶液，得到一系列浓度的含等量内标的对照品溶液。最终稀释倍数分别为对照品储备液的4、8、10、16、20、40、80和160倍(均含19.4μg/ml咖啡因)，进样体积1μl；以对照品与咖啡因峰面积比值(Y)为纵坐标，对照品溶液的进样量(X)为横坐标，建立回归方程，得回归方程Y＝0.0312X+0.126(r＝0.9941)，线性范围2.463～98.50ng。(5)试样中桤木酮的含量测定。将试样进样，根据样品的峰面积，代入上述回归方程，分别计算得出试样中桤木酮的含量。本专利技术的显著技术效果。【李元圆,俞桂新,杨莉,王峥涛.草豆蔻药材质量控制方法研究[J].中国中药杂志,2010,35(16):2091-2094】文献中以山姜素、乔松素、小豆蔻明和桤木酮为指标成分，建立草豆蔻药材的高效液相色谱含量测定方法，作为草豆蔻药材的质量评价，其采用的HPLC法得到桤木酮的检测限和定量限分别为1.015g/ml、4.692g/ml，桤木酮的线性范围为50.12～1003ng(r＝0.9999)，仪器分析时间为90min。本专利技术采用GC/MS法得到的桤木酮定量限(S/N＝10)为0.657μg/ml，检测限(S/N＝3)为0.164μg/ml，灵敏度提升106倍；本专利技术桤木酮线性范围为2.463～98.50ng(r＝0.9941)，相比之下本专利技术所得的线性范围更宽(扩大5倍)，更适用于桤木酮含量差异较大的药品质量分析；本专利技术气质联用分析时间为18min，缩短5倍仪器分析周期，极大提高分析效率；此外，本专利技术平均回收率(n＝6)为93.16％，RSD为1.4％，满足准确度要求，以上测定结果表明该方法灵敏度高、简单快速、专属性强、重现性好、绿色环保且检测成本低(载气为惰性气体，无有机试剂流动相消耗)，适用于桤木酮含量差异较大的食品、药品质量分析。本专利技术采用的气相色谱串联质谱(GC/MS)技术是利用气相色谱进行有机物的分离，并由串联质谱完成待测物的定性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种草豆蔻中桤木酮的含量测定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：分别称取3批草豆蔻干燥药材，用粉碎机粉碎(过3号筛)，得药材细粉末，置密封袋于干燥器中保存备用。精密称取药材细粉约1.0g，放入已知重量的250ml锥形瓶中，依次精密加入甲醇溶剂(分析纯)100ml和咖啡因内标储备液5ml，称重，记录溶剂总重量，盖紧瓶塞并用锡箔纸和封口膜包裹，置于超声清洗器中超声30min，放冷称重，用甲醇溶剂补足损失重量，过滤，取溶剂总体积一半的续滤液置于旋蒸瓶中，于45℃旋蒸挥干溶剂，用甲醇复溶，用有机系0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液置50ml容量瓶中定容，即得供试品溶液；(2)对照品及内标储备溶液的制备：分别称取桤木酮对照品约0.02g和咖啡因标准品(内标)约0.02g，精密称定，置100ml烧杯中，加甲醇(色谱纯)20ml溶解，置50ml容量瓶加甲醇(色谱纯)定容，即得对照品储备溶液(394.0g/ml)和内标储备溶液(388.0g/ml)；(3)GC‑MS条件：GC条件：SH‑Rxi‑5Sil MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm，日本岛津公司)；程序升温，起始温度100℃，保持3min，以30℃/min升至260℃，保持6min，再以10℃/min升至280℃，保持6min；载气(He)总流速20mL/min，柱流速2.35ml/min，压力165.7kPa；分流比30:1；进样口温度250℃；进样体积1μl；MS条件：接口温度270℃；电子轰击(EI)离子源；电子能量70eV；离子源温度200℃；溶剂切除时间2.5min；数据采集方式SIM模式，SIM条件为“分组1：采集时间9～12min；每个质量数扫描时间0.2s；质量数选择194、109、165。分组2：采集时间14～18min；每个质量数扫描时间0.2s；质量数选择262、171、157、128”；(4)建立回归方程：精密量取对照品储备液适量，甲醇稀释，分别加入等量内标溶液，得到一系列浓度的含等量内标的对照品溶液，最终稀释倍数分别为对照品储备液的4、8、10、16、20、40、80和160倍(均含19.4μg/ml咖啡因)，进样体积1μl；以对照品与咖啡因峰面积比值(Y)为纵坐标，对照品溶液的进样量(X)为横坐标，建立回归方程；(5)试样中桤木酮的含量测定：将试样进样，根据样品的峰面积，代入上述回归方程，分别计算得出试样中桤木酮的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种草豆蔻中桤木酮的含量测定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：分别称取3批草豆蔻干燥药材，用粉碎机粉碎(过3号筛)，得药材细粉末，置密封袋于干燥器中保存备用。精密称取药材细粉约1.0g，放入已知重量的250ml锥形瓶中，依次精密加入甲醇溶剂(分析纯)100ml和咖啡因内标储备液5ml，称重，记录溶剂总重量，盖紧瓶塞并用锡箔纸和封口膜包裹，置于超声清洗器中超声30min，放冷称重，用甲醇溶剂补足损失重量，过滤，取溶剂总体积一半的续滤液置于旋蒸瓶中，于45℃旋蒸挥干溶剂，用甲醇复溶，用有机系0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液置50ml容量瓶中定容，即得供试品溶液；(2)对照品及内标储备溶液的制备：分别称取桤木酮对照品约0.02g和咖啡因标准品(内标)约0.02g，精密称定，置100ml烧杯中，加甲醇(色谱纯)20ml溶解，置50ml容量瓶加甲醇(色谱纯)定容，即得对照品储备溶液(394.0g/ml)和内标储备溶液(388.0g/ml)；(3)GC-MS条件：GC条件：SH-Rxi-5SilMS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm，日本岛津公司)；程序升温，起始温度100℃，保持3min...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯雪松，王睿，张雨佳，
申请(专利权)人：中国医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21