一种通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法，包括如下步骤：1)采用体积分数为75～85％的甲醇的水溶液从含有芍药苷的待测样品中提取芍药苷，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱。该方法的回收率位于95.56～106.85％之间，检出限及定量限分别为285.1ng/mL，822.8ng/mL，RSD为0.014％‑0.58％。该方法用于实际测定某批样品三次，样品中芍药苷含量在1.942％‑1.997％之间。

【技术实现步骤摘要】
一种通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法
本专利技术涉及液体色谱分析检测领域，具体涉及通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法。
技术介绍
牡丹皮为毛莨科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥根皮。具有清热凉血，活血散瘀功效。用于温毒发斑或发疹，阴虚发热，无汗蒸骨，肠痈，痈肿疮毒，肝火头痛，闭经，痛经，跌扑损伤。现代研究表明，牡丹皮酚类及其苷、单萜及其苷类成分为主要有效成分。目前，对牡丹皮中酚类成分丹皮酚的质控方法已有较多报道，而对其单萜苷类成分的质控方法较少。我们以单萜类成分芍药苷为代表，建立了HPLC测定牡丹皮中芍药苷的方法，为牡丹皮药材及饮片的质量控制提供参考依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种牡丹皮中芍药苷的准确检测方法，包括如下步骤：1)采用体积分数为75～85％的甲醇的水溶液从含有芍药苷的待测样品中提取芍药苷，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-3min流动相B的体积分数增加至15％，3-5min流动相B的体积分数由15％增加至30％，5-10min流动相B的体积分数维持在30％，10-15min，流动相B的体积分数下降至10％。优选的，所述待测样品为牡丹皮粉末。优选的，所述牡丹皮粉末的直径小于50目。优选的，所述步骤1)中采用体积分数为80％的甲醇的水溶液提取芍药苷。浓度为80％的甲醇的水溶液可最大限度地将芍药苷进行提取。优选的，所述待测样品与甲醇的水溶液的质量体积比1:18～22。在上述质量体积比的情况下，既可将芍药苷进行充分地提取，还不会带来提取液的浪费。优选的，所述步骤1)具体为：将待测样品与甲醇的水溶液混合，在功率400～600W的超声条件下处理25～35min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将多次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，即得所述待测液。通过上述操作，可将待测样品中的芍药苷充分地提取出来。优选的，所述步骤2)中控制流速为0.8～1.2mL·min-1，优选为1.0mL·min-1；优选的，柱温为33～37℃，优选为30℃。优选的，所述步骤2)中检测器为紫外检测器，检测波长为230nm；优选的，进样量为20μL。作为优选的方案，本专利技术的方法包括如下步骤：(1)取芍药苷标准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-3min流动相B的体积分数增加至15％，3-5min流动相B的体积分数由15％增加至30％，5-10min流动相B的体积分数维持在30％，10-15min，流动相B的体积分数下降至10％，检测过程中控制流速为1.0mL·min-1，柱温为30℃，紫外检测器的检测波长为230nm；得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中芍药苷色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)将待测样品与体积分数为80％的甲醇的水溶液按质量体积比1:18～22混合，在功率400～600W的超声条件下处理25～35min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将多次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，得待测液，将所述待测液进样于高效液相色谱柱中，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中芍药苷色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中芍药苷的含量。本专利技术的方法具有如下有益效果：1)本专利技术优化了提取剂的种类和选择，并对提取剂的用量进行了调整，可充分地将芍药苷从待测样品中提取出来，而且可节省提取剂的成本。2)本专利技术优化了液相色谱检测的方法，可准确地检测牡丹皮中的芍药苷。采用本专利技术的高效液相色谱法测定牡丹皮提取物中的芍药苷含量时，具有专属性好，灵敏度高等优点。该方法的回收率位于95.56～106.85％之间，检出限及定量限分别为285.1ng/mL，822.8ng/mL，RSD为0.014％-0.58％，该方法用于实际测定某批样品三次，样品中芍药苷含量在1.942％-1.997％之间。附图说明图1为芍药苷标准曲线；图2为本实验的所述方法的专属性色谱图；图3为不同的提取剂提取效果的比较图；图4为不同浓度的甲醇提取液的提取效果比较图；图5为不同体积的甲醇提取液的提取效果比较图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1本实施例涉及牡丹皮中芍药苷的检测方法，包括如下步骤：A、制备芍药苷含量的标准曲线1)精密吸取1000μg/mL的芍药苷标准溶液各5μL、10μL、20μL、25μL及50μL，分别置于10mL比色管中，用甲醇定容至刻度，摇匀。即得浓度分别为0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL的梯度标准溶液。2)采用C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-3min流动相B的体积分数增加至15％，3-5min流动相B的体积分数由15％增加至30％，5-10min流动相B的体积分数维持在30％，10-15min，流动相B的体积分数下降至10％，检测过程中控制流速为1.0mL·min-1，柱温为30℃，紫外检测器的检测波长为230nm；得各份标准品溶液对应的色谱图；以标准溶液浓度C(μg/mL)作横坐标，以峰面积F作为纵坐标作图(图1)，所得线性回归方程为：F＝26.041C(μg/mL)-1.4254R2＝0.9999据此得出灵敏度S＝26.041(μg/mL)-1。由图1可知，待测液芍药苷含量在0.5～10μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系。B、牡丹皮样品中芍药苷含量的测定1)将牡丹皮粉碎后过50目筛，然后用体积分数为80％的甲醇溶液20ml与1g牡丹皮粉末混合，在功率500W的超声条件下处理30min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作一次，并将两次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，得待测液；2)按照与步骤A相同的液相色谱条件进行检测，测定三个平行样品，检测结果如表1：表1样品测定结果(n＝3)实验例1本实验例涉及本专利技术所述方法专属性的检测，包括如下步骤：在与实施例1相同的条件下下，分别对2.0μg/mL的标准溶液和样品进行测定，对比8.029min处芍药苷的谱线，见图2。图2表明，样品中的杂质与芍药苷得到了很好的分离，且样品与标准溶液中的芍药苷保留时间完全一致，该方法具有很好的专属性。实验例2本实验例涉及本专利技术所述方法精密度的测定，包括如下步骤：1)仪器精密度在实验最佳条件下，平行测定三份浓度为2μg/mL的标准溶液，结果见表2。表2精密度(n＝3)由表2可见，相对标准偏差RSD为0.58％，试验方法精密度符合要求。2)方法精密度采用方法“3.1样品处理方法”处理样品时，分别称取三份1.0000g样品，计算其日内精本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采用体积分数为75～85％的甲醇的水溶液从含有芍药苷的待测样品中提取芍药苷，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0‑3min流动相B的体积分数增加至15％，3‑5min流动相B的体积分数由15％增加至30％，5‑10min流动相B的体积分数维持在30％，10‑15min，流动相B的体积分数下降至10％。

【技术特征摘要】
1.一种通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采用体积分数为75～85％的甲醇的水溶液从含有芍药苷的待测样品中提取芍药苷，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-3min流动相B的体积分数增加至15％，3-5min流动相B的体积分数由15％增加至30％，5-10min流动相B的体积分数维持在30％，10-15min，流动相B的体积分数下降至10％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为牡丹皮粉末。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述牡丹皮粉末的直径小于50目。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中采用体积分数为80％的甲醇的水溶液提取芍药苷。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述待测样品与甲醇的水溶液的质量体积比1:18～22。6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：将待测样品与甲醇的水溶液混合，在功率400～600W的超声条件下处理25～35min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将多次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，即得所述待测液。7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中控制流速为0.8～1.2mL·min-1，优选为1.0mL·min-1；和/或，柱温为28～32℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈超，李永强，黄瑛，温霖，李爱民，李颖，
申请(专利权)人：国珍健康科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11