一种通过高效液相色谱测定绿原酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种通过高效液相色谱法测定绿原酸含量的方法，包括如下步骤：1)采用体积分数为48～52％的甲醇的水溶液从含有绿原酸的待测样中提取得到绿原酸，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积比为12～17：83～88的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行检测。本发明专利技术通过优化高效液相色谱法的条件，在测定金银花提取物中绿原酸的含量时，具有良好的专属性，灵敏度高，回收率在92.98～117.28％％之间。

【技术实现步骤摘要】
一种通过高效液相色谱测定绿原酸的方法
本专利技术涉及中药有效成分的分析领域，具体涉及一种通过高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量的方法。
技术介绍
金银花为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花，金银花具有清热解毒，疏散风热的功效，为临床常用中药材。近年来，临床对金银花的需求量更是逐年增加。但由于受种植地域环境的影响以及采摘时间、加工方式以及储存条件的影响导致金银花药材的质量参差不齐。绿原酸是金银花的主要抗菌、抗病毒有效药理成分之一。绿原酸也是一种重要的生物活性物质，增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。但在体内能被蛋白质灭活，与咖啡酸相似，口服或腹腔注射时，可提高大鼠的中枢兴奋性。可增加大鼠及小鼠的小肠蠕动和大鼠子宫的张力。有利胆作用，能增进大鼠的胆汁分泌。因此可通过检测金银花中绿原酸的含量来判断绿原酸的质量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种通过高效液相色谱测定金银花中绿原酸含量的方法，包括如下步骤：1)采用体积分数为48～52％的甲醇的水溶液从含有绿原酸的待测样中提取得到绿原酸，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积比为12～17∶83～88的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行检测。优选的，所述步骤1)中采用体积分数为50％的甲醇的水溶液提取绿原酸。优选的，所述步骤2)中，以体积比为15∶85的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行检测。优选的，所述待测样为金银花粉末。进一步优选的，所述金银花粉末的直径小于50目。优选的，所述待测金银花的提取物在所述甲醇的水溶液中的质量浓度为1.5～2.5mg/mL。进一步优选的，所述步骤1)具体为：将待测金银花提取物与甲醇的水溶液混合，在功率400～600W的超声条件下处理25～35min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将多次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，即得所述待测液。优选的，所述步骤2)中控制流速为0.8～1.2mL·min-1，优选为1.0mL·min-1；进一步优选的，柱温为33～37℃，优选为35℃。优选的，所述步骤2)中检测器为VWD检测器，检测波长为327nm；进一步优选的，进样量为20μL。作为优选的方案，本专利技术的方法包括如下步骤：1)取待测金银花粉末，然后用体积分数为50％的甲醇溶液将所述待测金银花提取物溶解，使其浓度为0.4mg/mL，在功率400～600W的超声条件下处理30min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将两次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，得待测液；2)取所述待测液20μL向色谱柱中进样，选择反相C18色谱柱，流动相为体积比为15∶85的甲醇与0.4％的磷酸，控制流速为1mL·min-1；柱温为35℃，检测器为VWD检测器，检测波长为327nm。作为优选的方案，本专利技术的方法包括如下步骤：(1)取绿原酸准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱，以体积比为15∶85的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中绿原酸色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)将粒径小于50目的待测金银花粉末与体积分数为50％的甲醇的水溶液混合，使得待测金银花在所述甲醇的水溶液中的质量浓度为1.5～2.5mg/mL，在功率400～600W的超声条件下处理25～35min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将多次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，即得待测液，将所述待测液进样于高效液相色谱柱中，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中绿原酸色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中绿原酸的含量。本专利技术上具有如下有益效果：本专利技术通过优化高效液相色谱法的条件，在测定金银花提取物中绿原酸的含量时，具有良好的专属性，仪器和方法的精密度高。加标回收率在92.98～117.28％％之间。方法学研究与实际应用表明该方法可以准确测定金银花提取物中绿原酸的含量。附图说明图1为10μg/mL标准品的色谱图；图2为待测样品的色谱图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1本实施例涉及从金银花提取物中提取绿原酸的方法，包括如下步骤：A、制备绿原酸含量的标准曲线1)精密配制400μg/mL绿原酸标准使用液，分别稀释至10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，60μg/mL，80μg/mL梯度标准溶液。2)取所述待测液20μL向色谱柱中进样，选择反相C18色谱柱，流动相为体积比为15∶85的甲醇与0.4％的磷酸，控制流速为1mL·min-1；柱温为35℃，检测器为VWD检测器，检测波长为327nm，进行测定。以标准溶液浓度C(μg/mL)作横坐标，以峰面积F作为纵坐标作图，所得线性回归方程为：F＝60.686C(μg/mL)-3.3433R2＝0.9996，据此得出灵敏度S＝60.686(μg/mL)-1由图1可知，待测液中绿原酸含量在10～80μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系。B、绿原酸样品中绿原酸含量的测定1)将绿原酸粉碎后过50目筛，然后用体积分数为50％的甲醇溶液40ml与0.2g绿原酸粉末混合，在功率500W的超声条件下处理30min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作一次，并将两次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，得待测液；2)按照与步骤A相同的液相色谱条件进行检测，测定三个平行样品，检测结果如表1：表1实验例1本实验例涉及本专利技术所述方法的专属性测定，其操作为：选择与实施例1相同的实验条件，分别对标准溶液和待测金银花样品进行测定，10μg/mL标准品出峰时间为6.926min，测金银花样品出峰时间为6.96min。如图1、图2，证明本专利技术的方法具有良好的专属性。实验例2本实验例涉及本专利技术所述方法的精密度测定，其操作为：1)仪器精密度采用与实施例1相同的条件，平行测定三份浓度为80μg/mL的标准溶液，结果见表2。表2精密度(n＝3)由表2可见，相对标准偏差RSD为0.04％，试验方法精密度符合要求。2)方法精密度采用与实施例1相同的方法处理样品，精密称取三份样品分别为0.1975g、0.2067g、0.2039g计算其日内精密度，称取样品三份，质量分别为0.1975g、0.2040g、0.2069g计算其日间精密度。测定结果见表3、表4。表3日内精密度表4日间精密度由表3、4可见，相对标准偏差RSD为0.38～0.54％，该方法重现性良好。实验例3本实验例涉及本专利技术所述方法中加标回收率的测定，包括如下操作：精密称取一份样品0.2067g，加入2ml(400μg/mL)绿原酸标准溶液；称取一份样品为0.2069g，加入18ml(400μg/mL)绿原酸标准溶液，按“3.1样品前处理方法”处理样品。测定回收率，结果见表5。表5加标回收率由表5可见，回收率在92.98～117.28％之间，表明有很好的测定准本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过高效液相色谱测定绿原酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采用体积分数为48～52％的甲醇的水溶液从含有绿原酸的待测样中提取得到绿原酸，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积比为12～17∶83～88的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种通过高效液相色谱测定绿原酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采用体积分数为48～52％的甲醇的水溶液从含有绿原酸的待测样中提取得到绿原酸，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积比为12～17∶83～88的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中采用体积分数为50％的甲醇的水溶液提取绿原酸。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，以体积比为15∶85的甲醇与0.4％的磷酸为流动相进行检测。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样为金银花粉末。5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述金银花粉末的直径小于50目。6.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述待测样在所述甲醇的水溶液中的质量浓度为1.5～2.5mg/mL。7.根据权利要求1～6任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：将待测金银花粉末与甲醇的水溶液混合，在功率400～600W的超声条件下处理25～35min，然后涡旋混匀，离心，取上清液，重复上述操作至少一次，并将多次得到的上清液混合后过0.45μm的滤膜，即得所述待测液。8.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中控制流速为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄瑛，李永强，陈超，温霖，李颖，李爱民，
申请(专利权)人：国珍健康科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11