改进的诊断花生过敏的测定法制造技术

本发明专利技术涉及诊断上有用的载体，其包含用于特异性捕获来自受试者的样品中的针对Ara h 7同种型7.0201的抗体的工具；包括在来自受试者的样品中检测针对Ara h 7同种型7.0201的抗体的存在或不存在的步骤的方法以及包含Ara h 7同种型7.0201或其变体的药物组合物。

Improved method for the diagnosis of peanut allergy

The present invention relates to a diagnostically useful vector comprising a tool for specifically capturing antibodies against the Ara h 7 homotype 7.0201 in a sample from a subject, a method for detecting the presence or absence of antibodies against the Ara h 7 homotype 7.0201 in a sample from a subject, and a method for containing different Ara h 7. A pharmaceutical composition of seed 7.0201 or its variants.

【技术实现步骤摘要】
改进的诊断花生过敏的测定法本专利技术涉及诊断上有用的载体，其包含用于特异性捕获来自受试者的样品中的针对Arah7同种型7.0201的抗体的工具；包括在来自受试者的样品中检测针对Arah7同种型7.0201的抗体的存在或不存在的步骤的方法以及包含Arah7同种型7.0201或其变体的药物组合物。在食物过敏中，与花生(Arachishypogea)有关的过敏受到最多的研究关注，因为它们比较常见，通常是永久性的，并且通常是严重的。美国的食物过敏反应死亡率登记暗示花生在63例死亡的59％中是触发因素，并且表明青少年和年轻成人的风险最高，另外的风险因素是过敏反应过程中肾上腺素注射的延迟和哮喘。花生是一种无处不在的食物，并且受影响的患者(往往对小剂量有反应)为了避免摄入会面临着无数的障碍，并遭受对生活质量产生的负面影响。主要在以下两种情况下怀疑花生过敏：当患者表现出严重的过敏反应时或在监测其他食物或空气过敏原的过敏条件的情况下。当通过阳性皮肤点刺测试(SPT)或花生特异性IgE测定(其相对于临床疾病的诊断可靠性目前不足)发现花生致敏时，则将患者送至提供基于双盲安慰剂对照的食物挑战(DBPCFC)的诊断的专业中心。这个程序是食物过敏诊断的金标准，但是它的应用需要住院治疗并且是昂贵的。此外，即使在训练有素的医生的控制下，使用花生的DBPCFC可能会导致严重或甚至威胁生命的反应。因此，对于基于来自怀疑患有花生过敏的受试者的样品中的特异性抗体的检测来诊断花生过敏的改进的测定法存在极大的兴趣。现有技术中描述的测定依赖于使用天然或重组过敏原检测主要花生过敏原如Arah1、Arah2、Arah3和Arah6(Flinterman,A.E.,vanHoffen,E.,denHartog,JagerC.F.,Koppelman,S.,Pasmans,S.G.,Hoekstra,M.O.,Bruijnzeel-Koomen,C.A.,Knulst,A.C.,Knol,E.F.(2007):ChildrenwithpeanutallergyrecognizepredominantlyArah2andArah6,whichremainsstableovertime,ClinExpAllergy2007；37；1221-1228；deLeon,M.P.,Drew,A.C.,Glaspole,I.N.,Suphioglu,C.,O’Hehir,R.E.,Rolland,J.M.(2007):IgEcross-reactivitybetweenthemajorpeanutallergenArah2andtreenutallergens,MolImmunol2007；44:463-471)。Arah2和Arah6是蓝豆蛋白(conglutin)类型的2S贮藏蛋白，并且属于醇溶蛋白超家族。该家族的成员的特征在于存在位于形成三个或四个分子内二硫键的约100个氨基酸残基的序列内的六个或八个半胱氨酸残基的保守模式。它们对热处理和蛋白质水解是稳定的。Arah2是花生的一种主要过敏原，并且以具有不同分子量(MW)的两种同种型存在，这是由于具有1,414Da的MW的12个氨基酸的插入引起的。在其一级蛋白序列中，Arah6与Arah2的同一性为53％，并且与Arah2相比，Arah6具有10个而不是8个半胱氨酸，但没有N-糖基化位点。像Arah2一样，Arah6对消化具有抵抗力，并且对加热是稳定的，特别是在烘烤过程中。已阐明了Arah6的三级结构，并鉴定了至少四个α螺旋结构和二硫键的位置参数。在生理条件下的消化实验中，Arah2和Arah6即使在还原条件下也能形成稳定的片段。这支持以下观点：Arah2和Arah6之间的交叉反应性由IgE反应性构象表位介导(Schmidt,H.,Krause,S.,Gelhaus,C.,Petersen,A.,Janssen,O.,andBecker,W.M.(2010):DetectionandstructuralcharacterizationofnaturalArah7,thethirdpeanutallergenofthe2Salbuminfamily,JProteomeRes2010；9:3701–709.)。Arah7是另一种花生过敏原，其同种型Arah7.0101最初由噬菌体展示系统鉴定并克隆，但最初在花生提取物中未发现天然对应物，这是其对过敏的影响在现有技术中被描述为低的原因之一。Schmidt等人(2008,DetectionandStructuralCharacterizationofNaturalArah7,theThirdPeanutAllgergenofthe2SAlbuminFamily)发现存在另一种同种型(Arah7.0201)。Arah7.0是在UNIPROT数据库中公布的除7.0101之外的另一种同种型)。然而，Schmidt等人没有提及诊断应用；他们所做的是纯粹的蛋白质组学研究。更重要的是，Schmidt等人使用的六个患者血清中只有五个(通过Arah7.0101反应性进行了预选择)显示与Arah7.0201的阳性IgE结合，表明Arah7.0201实际上反应性较低并且因此甚至具有比Arah7.0101更低的诊断价值。因此，据专利技术人所知，Arah7.0201直到本专利技术才被用于常规诊断。此外，一些研究已经使用纯化的花生蛋白(Arah1-3、Arah6)评估了一系列免疫学参数，发现临床严重程度与Arah2和6在低浓度下的识别和Arah1和3在较高浓度下的识别相关，表明Arah2的明显增加的效力(Peeters,K.A.,Koppelman,S.J.,vanHoffen,E.,vanderTas,C.W.,denHartog,JagerC.F.,Penninks,A.H.,Hefle,S.L.,Bruijnzeel-Koomen,C.A.,Knol,E.F.,andKnulst,A.C.(2007):Doesskinpricktestreactivitytopurifiedallergenscorrelatewithclinicalseverityofpeanutallergy？ClinExpAllergy.2007Jan；37(1):108-15.)。对花生过敏原Arah1、Arah2、Arah3、Arah6和Arah7的IgE抗体反应性也在使用重组过敏原的花生过敏患者中进行了研究。Codreanu等人评价了蛋白在2个大组的花生过敏患者中诊断花生过敏的表现。使用利用ImmunoCAP测试的UniCAP平台进行特异性IgE的测量。他们报道Arah2是花生过敏患者最敏感的过敏原，其中77-100％的病例存在可检测的IgE抗体，其次是Arah6(38-80％的病例)。相比之下，他们的数据表明没有患者对Arah7是单敏感的(Codreanu,F.,Collignon,O.,Roitel,O.,Thouvenot,B.,Sauvage,C.,Vilain,A.C.,Cousin,M.O.,Decoster,A.,Renaudin,JM.,Astier,C.,Monnez,JM.,Vallois,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诊断上有用的载体，其包含用于特异性捕获来自受试者的样品中的针对Ara h 7同种型7.0201，优选SEQ ID NO6，更优选针对选自SEQ ID NO7、SEQ ID NO8、SEQ ID NO9和SEQ ID NO10的序列，最优选针对SEQ ID NO8的抗体的工具，其中所述载体优选选自珠子、测试条，微量滴定板，微阵列，衍生自纤维素的固体聚合物，印迹，优选选自蛋白质印迹、线印迹和斑点印迹的印迹，玻璃表面，载玻片，生物芯片和膜，并且最优选是微量滴定板或线印迹。

【技术特征摘要】
2017.02.15 EP 17000245.5;2017.06.26 EP 17001081.31.一种诊断上有用的载体，其包含用于特异性捕获来自受试者的样品中的针对Arah7同种型7.0201，优选SEQIDNO6，更优选针对选自SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9和SEQIDNO10的序列，最优选针对SEQIDNO8的抗体的工具，其中所述载体优选选自珠子、测试条，微量滴定板，微阵列，衍生自纤维素的固体聚合物，印迹，优选选自蛋白质印迹、线印迹和斑点印迹的印迹，玻璃表面，载玻片，生物芯片和膜，并且最优选是微量滴定板或线印迹。2.根据权利要求1所述的诊断上有用的载体，其中所述载体进一步包含用于特异性捕获以下抗体的工具：针对选自Arah2、Arah6、Arah1、Arah3、Arah9、Arah8和Arah5，更优选选自Arah2、Arah6、Arah1、Arah3、Arah9的一种或多种其他抗原的抗体，更优选针对Arah2的抗体和/或针对Arah6的抗体，最优选针对Arah2的抗体。3.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至2中任一项所述的诊断上有用的载体，和任选用于特异性检测捕获的抗体的工具。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述诊断上有用的载体包含用于特异性捕获针对选自Arah2、Arah6、Arah1、Arah3、Arah9、Arah8和Arah5的一种或多种其它抗原的抗体的工具，其中用于特异性捕获针对同种型7.0201，优选SEQIDNO6，更优选针对选自SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9和SEQIDNO10的序列，最优选针对SEQIDNO8的抗体的工具和用于特异性捕获针对一种或多种其他抗原的抗体的工具在分开的载体上，或者其中用于特异性捕获针对Arah7同种型7.0201，优选SEQIDNO6，更优选针对选自SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9和SEQIDNO10的序列，最优选针对SEQIDNO8的抗体的工具和用于特异性捕获针对一种或多种其他抗原的抗体的工具在一个载体上，优选与一个载体共价连接。5.一种方法，所述方法包括在来自受试者的样品中检测针对Arah7同种型7.0201，优选SEQIDNO6，更优选针对选自SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9和SEQIDNO10的序列，最优选针对SEQIDNO8的抗体的存在的步骤。6.根据权利要求5所述的方法，所述方法还包括以下步骤：在来自受试者的样品中检测针对一种或多种其他抗原的抗体的存在，所述抗原优选地选自Arah2、Arah6、Arah1、Arah3、Arah9、Arah8和Arah5，更优选选自Arah2、Arah6、Arah1、Arah3和Arah9，最优选Arah2和/或Arah6。7.根据权利要求5至6中任一项所述的方法，其中同时检测针...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·苏尔，S·罗威尔，B·布瑞克斯，A·韦曼，
申请(专利权)人：欧蒙医学诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE