一种从混合生育酚浓缩液中制备高含量d-γ-生育酚的方法技术

本发明专利技术公开了一种从混合生育酚浓缩液中制备高含量d‑γ‑生育酚单体的方法。目前的方法中，有的是用到大量有机溶剂，有的对设备要求过高，有的则收率偏低，不适用于工业化生产。本发明专利技术将混合生育酚浓缩液溶解于低极性有机溶剂中，通过硅胶制备色谱吸附，加入低极性的有机溶剂洗脱不吸附的杂质，然后利用不同浓度的洗脱剂梯度洗脱，分段收集回收溶剂后可获得混合生育酚含量≥90％，γ‑生育酚相对含量≥80％的单体产物。本发明专利技术能够实现利用混合生育酚浓缩液为原料通过一次硅胶柱色谱分离得到高含量γ‑生育酚单体，提取工艺简单，克服了传统工艺中溶剂回收套用困难，环境污染大、分离效率低等问题。

A method for preparing high content d- gamma tocopherol from mixed tocopherol concentrate

The invention discloses a method for preparing high content d_gamma_tocopherol monomer from mixed tocopherol concentrate. Some of the current methods are used in a large number of organic solvents, some require too much equipment, and some have low yield, which is not suitable for industrial production. The method dissolves the mixed tocopherol concentrate in low polar organic solvents, prepares chromatographic adsorption by silica gel, elutes non-adsorbed impurities by adding low polar organic solvents, and then uses gradient elution of different concentrations of eluents to collect and recover the solvents in stages, and obtains the mixed tocopherol content (>90%) and the gamma tocopherol phase. The monomer products with a content of more than 80% were obtained. The invention can realize the separation of high content gamma tocopherol monomer from mixed tocopherol concentrate by a silica gel column chromatographic method. The extraction process is simple, and overcomes the problems of difficult solvent recovery and application, environmental pollution and low separation efficiency in the traditional process.

【技术实现步骤摘要】
一种从混合生育酚浓缩液中制备高含量d-γ-生育酚的方法
本专利技术涉及天然VE的生产方法，特别是一种高含量d-γ-生育酚单体的制备方法。
技术介绍
维生素E(VitaminE，简称VE)，又名抗不育维生素，是生育酚和生育三烯酚以及具有d-α-生育酚活性衍生物的总称，广泛存在于动植物脂肪、脏器、植物油料和叶绿植物中。作为提取天然VE的原料，植物油脂的脱臭馏出物(DD油)是目前工业化提取的天然VE的主要来源。由于DD油中组份复杂，且天然VE各种同系物之间的结构差异极小，采用传统的分离方法往往只能得到混合生育酚，很难得到高纯度的天然VE及其各种同系物单体。而各生育酚同系物单体的生理活性、功能及抗氧化性又是有差别的，各种生育酚同系物单体的生物活性依次为：α-生育酚(活性假设为100)＞β-生育酚(活性为10-50)＞γ-生育酚(活性为10)＞δ-生育酚(活性为1)。抗氧化活性在体内差异不大，但是在体外，特别是在高温下其抗氧化能力依次为：δ-生育酚＞γ-生育酚＞β-生育酚＞α-生育酚，这点恰好与生理功能相反，所以有必要将其分离，开发不同的用途。例如d-α-生育酚由于其生物活性高可以作生命营养品补充剂，d-δ-生育酚由于其体外抗氧化活性高可以作为天然抗氧化剂使用。而最近多项研究表明，在抗炎症，免疫损伤及肿瘤等方面优于其它类型的生育酚，已经越来越受到研究者和消费者的注意。近年来也研究表明d-γ-生育酚具有抗肿瘤，抗炎症等作用。如公开文献JiangQ，AmesBN.γ-Tocopherol，butnotα-tocopherol，decreasesproinflammatoryeicosanoidsandinflammationdamageinrats[J].TheFASEBJournal，2003，17(8)：816-822；因此，从混合生育酚中直接分离纯化生育酚各个同系物具有研究意义和经济效益。如公开文献JiangQ，ChristenS，ShigenagaMK，etal.γ-Tocopherol，themajorformofvitaminEintheUSdiet，deservesmoreattention[J].TheAmericanjournalofclinicalnutrition，2001，74(6)：714-722。由于脱臭馏出物成分复杂、各成分之间性质比较相似，单独采用一种方法很难从中得到高纯度的天然VE及其同系物单体，必须先对原料进行预处理以拉大各组份的性质差异，然后利用各组份物理及化学性质的差异，使用相应的分离提取手段。专利文献CN101220018A公开了一种采用四区八柱的模拟移动床系统，以正己烷等有机溶剂为流动相，硅胶为固定相的方法模拟VE在固定相和流动相间多次反复吸附、分离的方式分离得到维生素E的各种单体。由于此方法在各区间阀门切换时间上不易操作，溶剂的选择和回收上存在一定的困难，且对设备要求高，国内尚未有工业化分离天然VE的报道。专利文献CN102432584A中公开了一种利用反相层析柱从混合生育酚分离制备天然VE的方法，该方法虽然可以实现利用较低含量的原料一次上柱分离得到3种天然VE的单体，但是该方法使用了成本高的反相层析硅胶，载样量低，分离成本高，且使用多种毒性较大的有机溶剂，溶剂回收套用复杂，工业化前景较低。专利文献US2005131240A1中公开了一种利用离子交换树脂分离生育酚同系物尤其是d-γ与6生育酚单体的方法，但是该方法是以高含量的混合生育酚(含量90％左右)为起始原料，且用到两种有机溶剂溶解，溶剂耗量大，回收套用复杂，分离成本高，使该方法应用受到一定的限制。专利文献US6867308B2中也公开了一种利用离子交换树脂及硅胶柱色谱分离生育酚同系物中d-γ-生育酚单体的方法，与专利文献US2005131240A1类似，离子交换树脂与硅胶柱色谱中均需要用到两种有机溶剂，溶解耗量大，d-γ-生育酚单体回收率低，分离成本高。专利文献US4480108、US4602098及US4607111等根据混合生育酚中α、β、γ及δ4种单体的酯类衍生物进行脱酰反应的难易程度不同，采用脱酰反应与色谱分离或蒸馏相结合，现实各个生育酚同系物的分离。这类方法并不是直接以混合生育酚作为原料分离，而是发生化学反应，而且过程较为复杂，因此也不易工业化放大。从上可以看到，目前关于天然VE中分离提纯得到的高纯度混合生育酚及生育酚同系物单体的专利文献较多，这些方法各有其有利的方面，但也存在许多缺陷，有的是用到大量有机溶剂，有的对设备要求过高，有的则收率偏低，不适用于工业化生产。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种操作简便、成本低、易于工业化生产的d-γ-生育酚单体的方法。为此，本专利技术采用以下技术方案实现：一种从混合生育酚浓缩液中制备高含量d-γ-生育酚单体的方法，以含量为50-95％的混合生育酚为原料，其中γ-生育酚相对含量≥50％，采用制备色谱分离γ-生育酚单体，经过一次制备色谱纯化得到总生育酚含量≥90％，其中d-γ-生育酚相对含量≥80％的产物，具体步骤如下：1)上样：将作为原料的所述混合生育酚浓缩液与1号低极性有机溶剂混合以得到上样液，将上样液上制备色谱分离；上样之前先用所述1号低极性有机溶剂平衡柱子，所述1号低极性有机溶剂用量为柱容量的1-3倍；2)梯度洗脱：上样后继续用上样用的所述1号低极性有机溶剂洗脱，所述1号低极性有机溶剂用量为柱容量的1-3倍，分段收集洗脱液I和洗脱液II；再依次用2号洗脱剂和3号洗脱剂梯度洗脱，其中，所述2号洗脱剂由所述1号低极性有机溶剂和4号高极性有机溶剂组成，所述3号洗脱剂由所述1号低极性有机溶剂和4号高极性有机溶剂组成，所述2号洗脱剂和所述3号洗脱剂用量分别为柱容量的1-5倍，继续收集洗脱液II并收集洗脱液III；3)层析柱再生：再用所述4号高极性有机溶剂继续洗脱层析柱，所述4号高极性有机溶剂用量为柱容量的1-3倍，收集洗脱液IV。本专利技术的技术方案中，优选地，收集大于等于流出液体积0％，小于流出液体积30％的流出物液为洗脱液I；收集大于等于流出液体积30％，小于流出液体积50％的流出物液为洗脱液II；收集大于等于流出液体积50％，小于流出液体积80％的流出物液为洗脱液III；收集大于等于流出液体积80％，小于等于流出液体积100％的流出物液为洗脱液IV。真空回收上柱各个步骤收集的有机溶剂，此溶剂可套用，不同阶段的洗脱液得到不同的组份(这里不同的组份指的是溶剂洗脱后，然后按顺序接收不同的组分)，组份I中主要是脂肪酸甲酯、甾醇酯、脂肪烃及少量的d-α-生育酚等组份，组份II中主要得到的是大部分d-α-生育酚及少量d-γ-生育酚，组份III中主要是d-γ-生育酚组份，组份IV中主要是d-δ-生育酚、植物甾醇、色素等极性组份。(如图1所示)本专利技术的技术方案中，优选地，步骤1)中，所述混合生育酚浓缩液的重量与所述1号低极性有机溶剂的体积的比例为0.5～2。本专利技术的技术方案中，优选地，所述制备色谱中固定相为键合硅胶或者不定型硅胶。本专利技术的技术方案中，优选地，所述键合硅胶的粒径为20～200μm，孔径为形状为球型；所述不定型硅胶粒径为20～2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从混合生育酚浓缩液中制备高含量d‑γ‑生育酚单体的方法，其特征在于，以含量为50‑95％的混合生育酚浓缩液为原料，其中γ‑生育酚相对含量≥50％，采用制备色谱分离γ‑生育酚单体，经过一次色谱纯化得到总生育酚含量≥90％，其中γ‑生育酚相对含量≥80％的产物。

【技术特征摘要】
1.一种从混合生育酚浓缩液中制备高含量d-γ-生育酚单体的方法，其特征在于，以含量为50-95％的混合生育酚浓缩液为原料，其中γ-生育酚相对含量≥50％，采用制备色谱分离γ-生育酚单体，经过一次色谱纯化得到总生育酚含量≥90％，其中γ-生育酚相对含量≥80％的产物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包含以下步骤：1)上样：将作为原料的所述混合生育酚浓缩液与1号低极性有机溶剂混合以得到上样液，将上样液上制备色谱分离；上样之前先用所述1号低极性有机溶剂平衡柱子，所述1号低极性有机溶剂用量为柱容量的1-3倍；2)梯度洗脱：上样后继续用上样用的所述1号低极性有机溶剂洗脱，所述1号低极性有机溶剂用量为柱容量的1-3倍，分段收集洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ；再依次用2号洗脱剂和3号洗脱剂梯度洗脱，其中，所述2号洗脱剂由所述1号低极性有机溶剂和4号高极性有机溶剂组成，所述3号洗脱剂由所述1号低极性有机溶剂和4号高极性有机溶剂组成，所述2号洗脱剂和所述3号洗脱剂用量分别为柱容量的1-5倍，继续收集洗脱液Ⅱ并收集洗脱液Ⅲ；3)层析柱再生：再用所述4号高极性有机溶剂继续洗脱层析柱，所述4号高极性有机溶剂用量为柱容量的1-3倍，收集洗脱液Ⅳ。3.根据权利要求2所述的方法，其中，收集大于等于流出液体积0％，小于流出液体积30％的流出物液为洗脱液Ⅰ；收集大于等于流...

【专利技术属性】
技术研发人员：代志凯，李祥清，马金萍，王义永，许新德，邵斌，
申请(专利权)人：浙江医药股份有限公司新昌制药厂，
类型：发明
国别省市：浙江,33