一种桂利嗪有关物质的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种桂利嗪有关物质的检测方法，该方法为高效液相色谱法，采用C18色谱柱实施分离，并利用紫外检测器进行定量分析，色谱条件为：以乙酸铵溶液为流动相A，以体积百分比为0.2%的冰醋酸的乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱，其中，乙酸铵溶液的浓度为10g/L，pH=4.8～5.2；流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为225～235nm。本发明专利技术方法能够有效的分离出桂利嗪的杂质，分离度高，方法简便，易于操作，结果准确可靠，重现性好，灵敏度高。本发明专利技术填补了中国药典桂利嗪有关物质检测领域的空白，为提高和更好地控制桂利嗪产品质量提供了可靠保障。

A method for determination of related substances in

The invention provides a method for the determination of cinnarizine related substances, which is a high performance liquid chromatography method, is separated by a C18 chromatographic column and quantitatively analyzed by an ultraviolet detector. The chromatographic conditions are as follows: the mobile phase A is ammonium acetate solution, and the mobile phase B is acetonitrile solution with 0.2% glacial acetic acid. Gradient elution was carried out, in which the concentration of ammonium acetate solution was 10g/L, pH was 4.8-5.2, the flow rate was 0.8-1.2mL/min, and the detection wavelength was 225-235nm. The method of the invention can effectively separate the impurities of cinnarizine with high separation degree, simple method, easy operation, accurate and reliable results, good reproducibility and high sensitivity. The invention fills the blank in the detection field of cinnarizine related substances in the Chinese Pharmacopoeia, and provides a reliable guarantee for improving and better controlling the quality of cinnarizine products.

【技术实现步骤摘要】
一种桂利嗪有关物质的检测方法
本专利技术涉及一种药物中的杂质检测方法，具体涉及一种桂利嗪有关物质的检测方法。
技术介绍
桂利嗪（英文名：Cinnarizine，分子式：C26H28N2，分子量：368.52）为白色或类白色结晶或结晶性粉末，无臭，在三氯甲烷中易溶，在沸乙醇中溶解，在水中几乎不溶。桂利嗪又名脑益嗪、桂益嗪，作用于血管平滑肌而使血管扩张，能显著地改善血循环。而且对各种血管收缩物质(如:5-羟色胺，肾上腺素，增压素等)有拮抗作用，能缓解血管痉挛，同时有预防血管脆化的作用。临床适用于脑血栓形成、脑栓塞、脑动脉硬化、脑出血恢复期，蛛网膜下腔出血恢复期、脑外伤后遗症、内耳眩晕症、冠状动脉硬化及由于末梢循环不良引起的疾病等治疗。近年来有关文献报道，本品可用于慢性荨麻疹，老年性皮肤瘙痒等过敏性皮肤病。主在某些非血管性疾病中亦有应用，如治疗中老年性失眠、皮肤银屑病、慢性结肠炎等。作为一种药物，除了应当具有一定的疗效外，能否实现精准、便捷的定量分析也是获得广泛推广的技术前提之一。目前，中国药典中并未收载桂利嗪有关物质的检测方法，随着我国对药品质量控制工作要求的提高，建立有关物质的标准和检测方法成为提高和更好地控制桂利嗪质量的迫切要求。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种桂利嗪有关物质的检测方法，该方法能够有效地分离出桂利嗪的杂质，结果准确可靠，重现性好，且易于操作。本专利技术的目的是这样实现的，一种桂利嗪有关物质的检测方法，该方法为高效液相色谱法，采用C18色谱柱实施分离，并利用紫外检测器进行定量分析，色谱条件为：以乙酸铵的水溶液为流动相A，以体积百分含量为0.2%的冰醋酸的乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱，其中，乙酸铵的浓度为10g/L，pH=4.80~5.20；流速为0.8~1.2mL/min；检测波长为225~235nm。进一步地，本专利技术中，流动相A和流动相B按照下表中的梯度程序进行梯度洗脱：。优选地，在本专利技术中，所述乙酸铵溶液的pH=5.0。优选地，在本专利技术中，所述流速为1.0ml/min。优选地，在本专利技术中，所述检测波长为230nm。优选地，在本专利技术中，所述C18色谱柱的规格为：长度100mm，内径4.0mm，填料粒径3μm。本专利技术以桂利嗪合成工艺中可能引入或降解生成的杂质的分离度和灵敏度为指标，建立了一种桂利嗪有关物质的高效液相色谱检测方法。在本专利技术中，所述的桂利嗪有关物质是指在桂利嗪合成工艺中引入的或降解生成的杂质，包括1-（二苯基甲基）哌嗪（杂质A）、（Z）-1-（二苯基甲基）-4-（3-苯基丙-2-烯基）哌嗪（杂质B）、4-（二苯基甲基）-1,1-双[（E）-3-苯基丙-2-烯基]哌嗪氯化物（杂质C）、1-（二苯基甲基）-4-[（1RS，3E）-4-苯基-1-[（E）-2-苯基乙烯基]丁-3-烯基]哌嗪（杂质D）、1,4-二（二苯基甲基）哌嗪（E）、肉桂基哌嗪、二苯溴甲烷。方法学验证结果表明，本专利技术方法色谱条件系统稳定，线性好，精密度高，色谱条件灵敏度高，专属性好，测定溶液8h内稳定，耐用性试验结果显示流速、pH、波长的微小变化不影响桂利嗪有关物质的测定。本专利技术方法能够有效的分离桂利嗪上述工艺杂质及降解杂质，分离度高，方法简便，易于操作，结果准确可靠，重复性好，灵敏度高。填补了桂利嗪相关物质检测领域的空白，为提高和更好地控制桂利嗪产品质量提供了可靠保障。附图说明图1是实施例1系统适用性试验中6次进样所得HPLC检测图谱。图2是实施例1溶液稳定性试验中混合对照品溶液的HPLC检测图谱。图3是实施例1溶液稳定性试验中供试品溶液的HPLC检测图谱。图4是实施例2中混合对照品溶液的HPLC检测图谱。图5是实施例2中供试品溶液的HPLC检测图谱。图6是实施例2中对照溶液的HPLC检测图谱。图7是实施例3中混合对照品溶液的HPLC检测图谱。图8是实施例3中供试品溶液的HPLC检测图谱。图9是实施例3中对照溶液的HPLC检测图谱。图10是实施例4中混合对照品溶液的HPLC检测图谱。图11是实施例4中供试品溶液的HPLC检测图谱。图12是实施例4中对照溶液的HPLC检测图谱。图13是实施例5中混合对照品溶液的HPLC检测图谱。图14是实施例5中供试品溶液的HPLC检测图谱。图15是实施例5中对照溶液的HPLC检测图谱。具体实施方式下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术，在以下各实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂未标明来源和规格的均为市售分析纯或色谱纯。实施例1仪器：采用高效液相色谱仪，Waters，2695-2487；电子天平，SQP；pH计，上海精科PHS-3C。试剂：乙腈（色谱纯），安徽时联特种溶剂有限公司；甲醇（色谱纯），安徽时联特种溶剂有限公司；冰醋酸（分析纯），天津市永大化学试剂有限公司；乙酸铵（分析纯），天津市永大化学试剂有限公司。色谱条件：色谱柱：VenusilXBPC18(4.0×100mm)；流速，1.0ml/min；检测波长，230nm；样品浓度，2.5mg/ml；进样量，10μl。流动相：A相：10g/L乙酸铵溶液（pH5.0）；B相：0.02%冰醋酸的乙腈溶液。按下列梯度程序进行洗脱：。溶液配制：各杂质一级储备液的配制：分别取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、二苯溴甲烷、肉桂基哌嗪对照品各适量，精密称定，分别加甲醇溶解并稀释制成1ml中约含1.25mg相应杂质的杂质储备液。混合对照品溶液的制备：分别精密量取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、二苯溴甲烷、肉桂基哌嗪的杂质储备液各50μl及桂利嗪对照品适量，置同一10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1ml中约含2.5mg桂利嗪对照品和6.25μg的各杂质对照品的混合对照溶液。供试品溶液的制备：取该供试品适量(含桂利嗪约25mg)，精密称定，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；再从该量瓶中精密量取溶液2.5mL，置于另一10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。系统适用性溶液的制备：取12.5mg桂利嗪及15.0mg盐酸氟桂利嗪溶解于甲醇溶剂中，并用甲醇稀释定容至100.0ml，取稀释液2.5ml，再用甲醇稀释定容至50.0ml。试验内容：1、系统适用性试验取系统适用性溶液连续进样6次，记录桂利嗪和氟桂利嗪峰面积和保留时间，桂利嗪峰与盐酸氟桂利嗪峰分离度大于5，计算峰面积的RSD％和保留时间的RSD％，结果如下表1及附图1。表1系统适用性溶液中各物质的峰面积、保留时间、分离度从图1及上述表中可以看出，连续进样6针，各物质的峰面积与保留时间的RSD值均符合要求，盐酸氟桂利嗪与主峰的分离度均符合规定，适合有关物质的检查，可以有效的对杂质控制，说明本方法的系统适用性良好。2、线性考察为准确测定本品各杂质，进行线性考察，即设计各物质在一定范围内峰面积与浓度之间的关系，各线性浓度均从定量限浓度开始试验，具体如下：取桂利嗪对照品适量和各杂质适量，精密称定，分别加甲醇溶解并稀释制成一系列浓度的各对照品溶液，照上述方法进行测定，记录色谱图，以各对照品溶液浓度为横坐标x，峰面积为纵本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种桂利嗪有关物质的检测方法，其特征在于，该方法为高效液相色谱法，采用C18色谱柱实施分离，并利用紫外检测器进行定量分析，色谱条件为：以乙酸铵的水溶液为流动相A，以体积百分含量为0.2%的冰醋酸的乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱，其中，乙酸铵的水溶液的浓度为10g/L，pH=4.8～5.2；流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为225～235nm。

【技术特征摘要】
1.一种桂利嗪有关物质的检测方法，其特征在于，该方法为高效液相色谱法，采用C18色谱柱实施分离，并利用紫外检测器进行定量分析，色谱条件为：以乙酸铵的水溶液为流动相A，以体积百分含量为0.2%的冰醋酸的乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱，其中，乙酸铵的水溶液的浓度为10g/L，pH=4.8～5.2；流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为225～235nm。2.根据权利要求1所述的桂利嗪有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A和流动相...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志伟，孙盺，刘亚丽，马欣宁，赵盼琢，张晓晓，刘玉真，姚军，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：河北,13