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西红花的组织培养法制造技术

技术编号:18703974 阅读:37 留言:0更新日期:2018-08-21 21:44
本发明专利技术公开了一种西红花的组织培养法,包括以下步骤:掰下西红花球茎的侧芽进行冲洗、消毒、切割,然后横放接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养,直至形成簇状生长的愈伤组织;将愈伤组织分割成小块后接种到诱导不定芽培养基上进行培养,直至长出不定芽;割取不定芽接种到球茎诱导培养基中,从而获得小球茎Ⅰ;再将小球茎Ⅰ接种到壮苗培养基上进行壮苗培养,得可出瓶种植进行移栽的小球茎Ⅱ。采用该方法能获得大量的西红花组培种苗。

Tissue culture of Crocus sativus

The invention discloses a tissue culture method of Crocus sativus, which comprises the following steps: breaking off the lateral bud of Crocus sativus bulb to wash, disinfect and cut, then transversely inoculating it to the callus induction medium for culture until it forms a cluster-like growth callus; dividing the callus into small pieces and inoculating it to induction. The adventitious buds were harvested and inoculated into the corm induction medium to obtain the corm I. Then the corm I was inoculated into the strong seedling medium for strong seedling culture, and the corm II could be transplanted out of the bottle. A large number of tissue culture seedlings of Crocus sativus can be obtained by this method.

【技术实现步骤摘要】
西红花的组织培养法
本专利技术涉及西红花的组织培养法,特别是一种西红花的组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
西红花,因为它的柱头可以用作香料和药物治疗疾病而广泛种植,同时可以广泛应用于制药、食品加工和着色等行业。然而,西红花的花不育,不能产生有活力的种子。传统的繁殖体系,如通过分球繁殖速度缓慢,且导致病毒的积累,影响西红花的品质,因此期待通过组织培养繁殖从而提供了一种潜在而有效的方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种西红花的组织培养法,采用该方法能获得大量的西红花组培种苗。为了解决上述技术问题,本专利技术提供一种西红花的组织培养法(西红花的组织培养快速繁殖方法),包括以下步骤:1)、取生长健壮且无病虫害的西红花球茎,掰下侧芽(长度约1~2cm)后流水冲洗;2)、愈伤组织的诱导:将上述流水冲洗后的西红花球茎侧芽经消毒(常规消毒)后,切割成长度为3~5mm,横放接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养,直至形成簇状生长的愈伤组织;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmolm-2·s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;3)、不定芽诱导:将步骤2)所得的愈伤组织分割成长度为0.5~1cm的小块;将小块愈伤组织接种到诱导不定芽培养基上进行培养,直至小块愈伤组织长出0.6~1.1cm的不定芽;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmolm-2·s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;4)、小球茎培养:割取步骤3)所得的不定芽作为单株小苗,将此小苗接种到球茎诱导培养基中,从而使其进一步发育成至少有一条长度≥0.9cm根的小球茎Ⅰ;培养条件为:16小时光照,光照强度40~50μmolm-2·s-1,温度为22~26℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;5)、壮苗培养:将上述小球茎Ⅰ接种到壮苗培养基上进行壮苗培养,培养条件为:16小时光照,光照强度40~50μmolm-2·s-1,温度为22~26℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行,直至获得至少有2条长度≥0.9cm根的小球茎Ⅱ。注:此小球茎Ⅱ直径约2cm,根的数量一般为2~3根;此小球茎Ⅱ可出瓶种植进行移栽。作为本专利技术的西红花的组织培养法的改进,步骤2)的愈伤组织诱导培养基:MS+6-BA5~10mg/L+NAA1~2mg/L+白砂糖20~30g/L+琼脂7~9g/L,pH为5.5~6.0。愈伤组织诱导培养基的制作方法具体如下:以MS基本培养基为基础,分别加入6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、白砂糖、琼脂均匀混合,利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl调节pH为5.5~6.0;每1L的MS基本培养基中加5~10mg的6-BA、1~2mgNAA、20~30g白砂糖、7~9g琼脂。作为本专利技术的西红花的组织培养法的进一步改进,步骤3)的不定芽诱导培养基:MS+TDZ0.5~1mg/L+PIC1~2mg/L+白砂糖20~30g/L+琼脂7~9g/L,pH为5.5~6.0。不定芽诱导培养基的制作方法具体如下:以MS为基本培养基为基础,分别加入噻苯隆(TDZ)、毒莠定(PIC)、白砂糖、琼脂均匀混合,利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl调节pH为5.5~6.0;每1LMS基本培养基中加0.5~1mg噻苯隆(TDZ)、1~2mg毒莠定(PIC)、20~30g白砂糖、7~9g琼脂。作为本专利技术的西红花的组织培养法的进一步改进,所述步骤4)的球茎诱导培养基:MS+NAA1mg/L+白砂糖20~30g/L+琼脂7~9g/L,pH为5.5~6.0;所述步骤5)的壮苗培养基:1/2MS基本培养基+1mg/LNAA+白砂糖15~30g/L+琼脂7~9g/L,pH为5.5~5.8。球茎诱导培养基的制作方法具体如下:以MS基本培养基为基础,分别加入NAA、白砂糖、琼脂均匀混合,利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl调节pH为5.5~6.0;每1L的MS基本培养基加入1mg的NAA、20~30g白砂糖、7~9g琼脂。壮苗培养基的制作方法具体如下:以1/2MS基本培养基(即溶液中大量元素的含量为MS基本培养基的一半)为基础,分别加入萘乙酸(NAA)、白砂糖、琼脂均匀混合,利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl调节pH为5.5~5.8;每1L的1/2MS基本培养基中加1mg萘乙酸、15~30g白砂糖、7~9g琼脂。作为本专利技术的西红花的组织培养法的进一步改进,所述步骤1)为:先将侧芽放入质量浓度为0.8~1.2%的洗衣粉水溶液中浸泡20~40min(例如为30min),然后再将侧芽放入纱袋中用自来水冲洗1~2小时。在本专利技术中,作为优选的培养基如下:愈伤组织诱导培养基:MS+6-BA10mg/L+NAA1mg/L+白砂糖25g/L+琼脂8g/L,pH为5.8。不定芽诱导培养基:MS+PIC1mg/L+TDZ1mg/L+白砂糖25g/L+琼脂8g/L,pH为5.8。球茎诱导培养基:MS+NAA1mg/L+白砂糖25g/L+琼脂8g/L,pH为5.8。壮苗培养基:1/2MS基本培养基+1mg/LNAA+白砂糖25g/L+琼脂8g/L,pH为5.8。更优选的培养基为:愈伤组织诱导培养基:MS+6-BA10mg/L+NAA2mg/L+白砂糖25g/L+琼脂8g/L,pH为5.8。不定芽诱导培养基:MS+PIC2mg/L+TDZ1mg/L+白砂糖25g/L+琼脂8g/L,pH为5.8。依照上述方法,只需90~110天即可获得试管苗;因此采用本专利技术的方法可以长期得到大量的试管苗。本专利技术的西红花组织培养法,属于一种离体快速繁殖的组织培养方法。依照植物组织培养中细胞全能性的原理,利用侧芽可以在短时间内产生大量遗传背景相同、长势一致的优质西红花,而且依靠实验室可以实现周年的长期提供优质种苗。在本专利技术的方法中,将长势健壮且无病虫害的西红花球茎上取得的侧芽进行消毒,通过合适的诱导培养基进行诱导不定芽以及诱导小球茎,可以获得大量的无菌苗。采用本专利技术的方法,一般仅需90~110天即可得到可出瓶种植的种苗。因此西红花组培苗一周年内的繁殖系数理论上为35倍以上。所以,本专利技术的西红花的组织培养法,是一种不受季节等因素影响,高效、快速提供优质西红花,克服了西红花常规栽培方法繁殖缓慢的缺点。综上所述,本专利技术建立的西红花组织培养体系将为良种(西红花球茎)繁育提供理论依据和技术支撑。在本专利技术中:1)、本专利技术利用西红花侧芽作为外植体,诱导愈伤组织容易;进行壮苗培养能够大大提高西红花的移栽成活率;西红花侧芽对外源激素比较不敏感,外源激素(愈伤组织诱导培养基中所使用的激素)浓度稍高,有利于西红花侧芽伤口愈合,长成愈伤组织。因此,本专利技术在愈伤组织阶段培养中采用了较高浓度的植物激素培养,建立质优量大的繁育体系,在后几个阶段采用了相对较低的植物激素培养,保证了培养过程中培养物体内外源激素的积累水平比较低,从而保障了较高的增殖系数和代数。2)、本专利技术对侧芽插入培养基的方式进行了比较,发现将侧芽横放在培养基上有利于愈伤组织的产生。3)、愈伤组织呈现出本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.西红花的组织培养法,其特征是包括以下步骤:1)、取生长健壮且无病虫害的西红花球茎,掰下侧芽后流水冲洗;2)、愈伤组织的诱导:将上述流水冲洗后的西红花球茎侧芽经消毒后,切割成长度为3~5mm,横放接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养,直至形成簇状生长的愈伤组织;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmol m‑2·s‑1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;3)、不定芽诱导:将步骤2)所得的愈伤组织分割成长度为0.5~1cm的小块;将小块愈伤组织接种到诱导不定芽培养基上进行培养,直至小块愈伤组织长出0.6~1.1cm的不定芽;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmol m‑2·s‑1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;4)、小球茎培养:割取步骤3)所得的不定芽作为单株小苗,将此小苗接种到球茎诱导培养基中,从而使其进一步发育成至少有一条长度≥0.9cm根的小球茎Ⅰ;培养条件为:16小时光照,光照强度40~50μmol m‑2·s‑1,温度为22~26℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;5)、壮苗培养:将上述小球茎Ⅰ接种到壮苗培养基上进行壮苗培养,培养条件为:16小时光照,光照强度40~50μmol m‑2·s‑1,温度为22~26℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行,直至获得至少有2条长度≥0.9cm根的小球茎Ⅱ。...

【技术特征摘要】
1.西红花的组织培养法,其特征是包括以下步骤:1)、取生长健壮且无病虫害的西红花球茎,掰下侧芽后流水冲洗;2)、愈伤组织的诱导:将上述流水冲洗后的西红花球茎侧芽经消毒后,切割成长度为3~5mm,横放接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养,直至形成簇状生长的愈伤组织;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmolm-2·s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;3)、不定芽诱导:将步骤2)所得的愈伤组织分割成长度为0.5~1cm的小块;将小块愈伤组织接种到诱导不定芽培养基上进行培养,直至小块愈伤组织长出0.6~1.1cm的不定芽;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmolm-2·s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;4)、小球茎培养:割取步骤3)所得的不定芽作为单株小苗,将此小苗接种到球茎诱导培养基中,从而使其进一步发育成至少有一条长度≥0.9cm根的小球茎Ⅰ;培养条件为:16小时光照,光照强度40~50μmolm-2·s-1,温度为22~26℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;5)、壮苗培养:将上述小球茎Ⅰ接种到壮苗培养基上进行壮苗培养,培养条件为:...

【专利技术属性】
技术研发人员:毛碧增马阳阳何伯伟
申请(专利权)人:浙江大学
类型:发明
国别省市:浙江,33

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