一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法技术

本发明专利技术属于植物组织发酵培养技术领域，具体涉及一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法。本发明专利技术通过获取能够快速形成愈伤组织的外植体，经过无菌处理后，将外植体进行愈伤组织诱导培养，愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基，获取大量的愈伤组织。将扩繁的愈伤组织转入愈伤组织液体增殖发酵培养基，进行花魔芋愈伤组织块发酵培养，获取大量的花魔芋组织块。本发明专利技术所使用的外植体污染率低，愈伤组织形成速度快，不用进行魔芋种苗生产和田间耕种管理，产量不受季节气候条件影响，获取的花魔芋组织块营养价值与田间栽培所收获魔芋块茎一致。能够快速获得大量花魔芋组织块，大大缩短了生产周期，有利于规模化大批量生产。

A method of free cultivation and rapid fermentation for producing Amorphophallus konjac tissue blocks

The invention belongs to the technical field of plant tissue fermentation and culture, in particular to a fermentation production method for quickly obtaining konjac tissue blocks without cultivation. The invention obtains an explant capable of rapidly forming callus, and after aseptic treatment, the explant is induced to culture callus, and the callus is transferred to the callus proliferation medium to obtain a large number of callus. The expanded callus was transferred into the liquid multiplication and fermentation medium of callus, and the callus of Amorphophallus Florida was fermented to obtain a large number of Amorphophallus florida. The explant used in the invention has low contamination rate, rapid callus formation, no need for konjac seedling production and field tillage management, and the yield is not affected by seasonal and climatic conditions. The nutritional value of the tissue block obtained by the method is consistent with that of the konjac tuber harvested by field cultivation. A large number of tissue blocks of Amorphophallus Florida can be obtained quickly, which greatly shortens the production cycle and is conducive to large-scale mass production.

【技术实现步骤摘要】
一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法
本专利技术属于植物组织发酵培养
，具体涉及一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法。技术背景花魔芋(Amorphophalluskonjac)，又称花杆莲，花杆南星，麻芋子等，学名蒟蒻，属天南星科多年生草本植物，是多年生草本植物。花魔芋中含有大量的葡甘露糖和17种人体所需的氨基酸，以及多种不饱和脂肪酸。花可供观赏，地下块茎扁圆形，营养成分极为丰富，用途广泛。去毒后可加工成美味可口的食品，并具有燥湿化痰、健胃开脾、消肿攻毒、降低胆固醇等医疗作用。在工业上，魔芋制品可代替果胶、瓜胶，用于卷烟纸、磁带、胶片、纺织印染浆料及建筑涂料、农药、化妆品的添加剂等。花魔芋是我国目前主栽魔芋品种之一,其球茎含葡甘聚糖在55%以上(干基),最高近60%,利用价值最高。葡甘聚糖具有具胶溶性、凝胶性、成膜性等特性而被广泛应用于食品和保健方面,具有降血脂、降血糖、抗癌、美容、减肥等功效。近年来魔芋的栽培面积不断扩大，需求量不断攀升，魔芋生产中常因其自然繁殖率低且生长周期长，且用种短缺，极大地限制了魔芋产业的发展，采用魔芋组织块的发酵生产方法可以为魔芋产品的生产带来极大的便利。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法，包括获取能够快速形成愈伤组织的外植体，外植体无菌处理后，将外植体进行愈伤组织诱导培养，愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基，获取大量的愈伤组织，将扩繁的愈伤组织转入愈伤组织液体增殖发酵培养基，进行花魔芋愈伤组织块发酵培养，获取大量的花魔芋组织块。所述的获取能够快速形成愈伤组织的外植体是指采集外植体的类型是球茎上新发的小块茎，小块茎放入无菌蒸馏水中浸泡30min后，用75%的乙醇消毒30s，再用3%过氧化氢消毒20min，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍去除小块茎表面的过氧化氢即为外植体。所述的花魔芋愈伤组织的诱导培养，是指在无菌条件下将小块茎用解剖刀去皮并切成长约0.5cm×0.5cm的小块，接入愈伤组织诱导培养基，置于24~26℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养12~18天；愈伤组织诱导培养基为：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L+5g/L葡萄糖+15g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0。所述的花魔芋愈伤组织增殖培养，是指是将愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基上，每皿接种3~5个切成直径为0.2~0.5cm的愈伤组织小块，置于24~26℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养；10天后，愈伤组织长至1~1.5cm的淡黄色球状体；愈伤组织增殖培养基为：MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+5g/L葡萄糖+15g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0。所述花魔芋愈伤组织块发酵培养，是指将扩繁的愈伤组织块切成直径为0.2~0.4cm的愈伤组织小块，转入液体培养基进行发酵培养，发酵培养条件设置为22~26℃，O2浓度为8~9mg/L，pH为5.8~6.0；液体培养基为：NH4NO3650mg/L，KNO3900mg/L，CaCl2·2H2O440mg/L，MgSO4·7H2O370mg/L，KH2PO4700mg/L，KI0.83mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Na2MnO4·2H2O0.25mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，FeSO4·7H2O（27.8mg/L）+Na2-EDTA·2H2O（37.3mg/L），肌醇100mg/L，烟酸0.5mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5mg/L，盐酸硫胺素（维生素B1）0.5mg/L，甘氨酸2mg/L，15g/L蔗糖。培养45~60天，期间根据花魔芋组织块生长情况更换发酵液一次，获得的组织块为直径3~5cm的球状组织块。所述魔芋组织块发酵液在115℃、67Kpa下灭菌15min。本专利技术的有益效果：可以快速获得大量魔芋组织块，使用的外植体污染率低，愈伤组织形成速度快，不用进行魔芋种苗生产和田间耕种管理，产量不受季节气候条件影响，获取的花魔芋组织块营养价值与田间栽培所收获花魔芋块茎一致。能够快速获得大量花魔芋组织块，大大缩短了生产周期，有利于规模化大批量生产。具体实施方式实施例一一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一采集外植体类型为球茎上新发的小块茎，将小块茎放入无菌蒸馏水中浸泡30min后，用75%的乙醇消毒30s，再用3%过氧化氢消毒20min，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍去除小块茎表面的消毒液；步骤二在无菌条件下将小块茎用解剖刀去皮并切成长约0.5cm×0.5cm的小块，接入愈伤组织诱导培养基，置于24℃、湿度65%的培养箱中暗培养18天；愈伤组织诱导培养基为：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L+5g/L葡萄糖+15g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤三将愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基上，每皿接种3~5个切成直径为0.2~0.5cm的愈伤组织小块，置于24℃、湿度65%的培养箱中暗培养；10天后，愈伤组织长至1~1.5cm的淡黄色球状体。愈伤组织增殖培养基为：MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+5g/L葡萄糖+15g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤四将扩繁的愈伤组织块切成直径为0.2~0.4cm的愈伤组织小块，转入液体培养基进行发酵培养，发酵培养条件设置为22℃，O2浓度为8~9mg/L，pH为5.8~6.0；液体培养基为：NH4NO3650mg/L，KNO3900mg/L，CaCl2·2H2O440mg/L，MgSO4·7H2O370mg/L，KH2PO4700mg/L，KI0.83mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Na2MnO4·2H2O0.25mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，FeSO4·7H2O（27.8mg/L）+Na2-EDTA·2H2O（37.3mg/L），肌醇100mg/L，烟酸0.5mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5mg/L，盐酸硫胺素（维生素B1）0.5mg/L，甘氨酸2mg/L，15g/L蔗糖。培养60天，期间根据花魔芋组织块生长情况更换发酵液一次，获得的组织块为直径3~5cm的球状组织块。所述魔芋组织块发酵液在115℃、67Kpa下灭菌15min。实施例二一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一采集外植体类型为球茎上新发的小块茎，将小块茎放入无菌蒸馏水中浸泡30min后，用75%的乙醇消毒30s，再用3%过氧化氢消毒20min，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍去除小块茎表面的消毒液；步骤二在无菌条件下将小块茎用解剖刀去皮并切成长约0.5cm×0.5cm的小块，接入愈伤组织诱导培养基，置于25℃、湿度70%的培养箱中暗培养15天；愈伤组织诱导培养基为：MS+6-BA0.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一 采集外植体类型为球茎上新发的小块茎，将小块茎放入无菌蒸馏水中浸泡30 min后，用75%的乙醇消毒30 s，再用3%过氧化氢消毒20 min，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍去除小块茎表面的过氧化氢；步骤二 在无菌条件下将小块茎用解剖刀去皮并切成长约0.5 cm×0.5 cm的小块，接入愈伤组织诱导培养基，置于24~26 ℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养12~18天；愈伤组织诱导培养基为：MS+6‑BA 0.50 mg/L+NAA 0.10 mg/L+5 g/L葡萄糖+15 g/L蔗糖+7.8 g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤三 将愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基上，每皿接种3~5个切成直径为0.2~0.5 cm的愈伤组织小块，置于24~26 ℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养；10天后，愈伤组织长至1~1.5 cm的淡黄色球状体；愈伤组织增殖培养基为：MS+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 6‑BA+5 g/L 葡萄糖+15 g/L蔗糖+7.8 g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤四 将扩繁的愈伤组织块切成直径为0.2~0.4 cm的愈伤组织小块，转入液体培养基进行发酵培养，发酵培养条件设置为22~26 ℃，O2浓度为8~9 mg/L，pH为5.8~6.0；液体培养基为：NH4NO3 650 mg/L，KNO3 900 mg/L，CaCl2·2H2O 440 mg/L，MgSO4·7H2O 370 mg/L，KH2PO4 700 mg/L，KI 0.83 mg/L，H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O 22.3 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MnO4·2H2O 0.25 mg/L，CuSO4·5H2O 0.025 mg/L，CoCl2·6H2O 0.025 mg/L，FeSO4·7H2O（27.8 mg/L）+Na2‑EDTA·2H2O（37.3 mg/L），肌醇100 mg/L，烟酸0.5 mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5 mg/L，盐酸硫胺素（维生素B1）0.5 mg/L，甘氨酸2 mg/L，15 g/L蔗糖；培养45~60天，期间根据花魔芋组织块生长情况更换发酵液一次；所述魔芋组织块发酵液在115 ℃、67 Kpa下灭菌15 min。...

【技术特征摘要】
1.一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一采集外植体类型为球茎上新发的小块茎，将小块茎放入无菌蒸馏水中浸泡30min后，用75%的乙醇消毒30s，再用3%过氧化氢消毒20min，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍去除小块茎表面的过氧化氢；步骤二在无菌条件下将小块茎用解剖刀去皮并切成长约0.5cm×0.5cm的小块，接入愈伤组织诱导培养基，置于24~26℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养12~18天；愈伤组织诱导培养基为：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L+5g/L葡萄糖+15g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤三将愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基上，每皿接种3~5个切成直径为0.2~0.5cm的愈伤组织小块，置于24~26℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养；10天后，愈伤组织长至1~1.5cm的淡黄色球状体；愈伤组织增殖培养基为：MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+5g/L葡萄糖+15g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤四将扩繁的愈伤组织块切成直径为0.2~0.4cm的愈...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚洪龙，李竹梅，唐利洲，刘潮，王海波，高永，
申请(专利权)人：曲靖师范学院，
类型：发明
国别省市：云南,53