一种鲍鱼血细胞处理方法技术

本发明专利技术公开了一种鲍鱼血细胞处理方法，首先在2ml离心管中加入1ml抗凝保护剂；然后用解剖刀划开鲍鱼腹足部血窦，将鲍鱼倾斜20‑30°放在冰上以便血液更易流出；待血液流出，用无菌注射器抽1ml血直接注入到加入抗凝保护剂后的离心管中；用一种用于流式细胞仪检测的血液过滤器过滤血液到新的2ml离心管中；再经18℃，3000rpm离心10min，去掉上清；最后用1ml滤菌海水重新悬浮血细胞制成鲍血淋巴悬液。该方法通过采用合适的血液抗凝保护剂和血液过滤器，能够有效的延长血细胞的凝集时间，快速过滤血液中的杂质，改善血液的纯度，减少实验误差，使实验结果更加准确。

Abalone blood cell processing method

The invention discloses an abalone blood cell processing method, in which 1 ml anticoagulant protectant is first added into a 2 ml centrifugal tube, then the abdominal and foot sinuses of the abalone are incised with a dissecting knife, and the abalone is tilted 20 30 and placed on ice so that the blood is easier to flow out, and 1 ml blood is directly injected into the abalone with an aseptic syringe to add an anticoagulant protectant. In the centrifugal tube, the blood was filtered into a new 2 ml centrifugal tube by a blood filter for flow cytometry, then centrifuged at 18 C for 10 minutes at 3 000 rpm to remove the supernatant. Finally, the abalone hemolymph suspension was made by suspending the blood cells with 1 ml sea water. This method can effectively prolong the agglutination time of blood cells, quickly filter the impurities in blood, improve the purity of blood, reduce the experimental error and make the experimental results more accurate.

【技术实现步骤摘要】
一种鲍鱼血细胞处理方法
本专利技术涉及鲍鱼血细胞处理
，具体涉及一种鲍鱼血细胞处理方法。
技术介绍
鲍鱼由于营养丰富，经济价值高，成为我国重要的海水养殖品种。目前，在生物实验领域，并没有一种完全针对鲍鱼血细胞的统一处理方式。人们通常采用各种不同的方式来处理鲍鱼的血细胞。在不加抗凝保护剂的情况下，鲍鱼血细胞一旦离体，几分钟内即大量凝集。即便加入某些抗凝保护剂的鲍鱼血细胞也会在短时间内大量死亡。这样不仅要求实验在短时间内就要完成，还会导致实验结果受系统误差影响较大、实验成本增加，实验结果不准确等问题。因此快速处理血细胞，确保在一定时间内鲍鱼血细胞不凝集在实验中十分重要。目前，用于流式细胞仪检测的贝类(鲍鱼)血液，并没有一套完整或正规的处理装置，人们一般将收集到的血液不经过滤处理就直接进行流式细胞仪检测。结果表明，没有经过处理的血液含有较多杂质，呈现出来的图像是一个比较混乱、杂乱无章的散点图。另外，未处理细胞群容易造成检测仪堵塞，需要花很长的时间对检测仪进行清洗(10-40min)，才能继续进行测样。这样不仅耽误检测的进程，也无形间造成测试费用升高(200元/h)。所以在鲍鱼血细胞处理过程中采用合适的血液过滤器也十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供鲍鱼血细胞处理方法，通过采用合适的血液抗凝保护剂和血液过滤器，能够有效的延长血细胞的凝集时间，快速过滤血液中的杂质，改善血液的纯度，减少实验误差，使实验结果更加准确。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述处理方法包括如下步骤：(1)首先在2ml离心管中加入1ml抗凝保护剂；(2)然后用解剖刀划开鲍鱼腹足部血窦，将鲍鱼倾斜20-30°放在冰上以便血液更易流出；(3)待血液流出，用无菌注射器抽1ml血直接注入到加入抗凝保护剂后的离心管中；(4)用一种用于流式细胞仪检测的血液过滤器过滤步骤(3)中液体到新的2ml离心管中；(5)再经18℃，3000rpm离心10min，去掉上清；(6)最后用1ml滤菌海水重新悬浮经过步骤(5)处理的血细胞制成鲍血淋巴悬液。上述鲍鱼血细胞处理方法中，所述抗凝保护剂由以下成分组成：氯化钠2.45～2.55g、EDTA0.9～1.1g、1，4-哌嗪二乙磺酸0.22～0.24g和0.1mMPBS100ml。优选地，所述抗凝保护剂由以下成分组成：氯化钠2.5g、EDTA1g、1，4-哌嗪二乙磺酸0.23g和0.1mMPBS100ml。上述鲍鱼血细胞处理方法中，所述抗凝保护剂的制备方法为：(1)将0.1mMPBS缓冲液倒入烧杯中，再向烧杯中加入固体氯化钠粉末搅拌3-5分钟，直到氯化钠全部溶解，然后再加入1，4-哌嗪二乙磺酸粉末充分搅拌溶解得混合溶液A；(2)将混合溶液A放入38-40℃水浴锅中加热，再缓慢加入EDTA，边加入边搅拌，直到EDTA完全溶解得混合溶液B；(3)将混合溶液B转到室温状态下用磁力搅拌器搅拌0.5-1h，使各组分充分溶解到PBS缓冲液中；(4)超净工作台开启紫外杀菌功能30-35min，然后在超净工作台上将混合溶液B先用0.45um无菌滤器过滤除杂放入灭菌蓝盖瓶中，再用0.22um无菌滤器将蓝盖瓶中液体过滤除菌，最终得到鲍鱼血细胞抗凝保护剂。优选地，上述鲍鱼血细胞抗凝保护剂的制备方法中，所述步骤(2)中水浴锅加热温度为40℃。优选地，上述鲍鱼血细胞抗凝保护剂的制备方法中，所述步骤(3)中磁力搅拌器搅拌时间为0.5h。上述鲍鱼血细胞抗凝保护剂可在4℃或室温条件下，保存于灭菌蓝盖瓶中备用。另外，所述血液过滤器一种血液过滤器，包括固定台、竖杆、过滤装置和置物装置，置物装置放置于过滤装置的下方，过滤装置通过压圈杆安装在竖杆上，压圈杆通过高度调节钮安装在竖杆上，竖杆安装在固定台上，过滤装置包括上压圈和下压圈，上压圈和下压圈均和压圈杆连接。所述上压圈与下压圈之间设置有筛绢。利用筛绢过滤掉血液中的杂质。其中，所述上压圈上设置有四个压扣，四个压扣均布在所述上压圈的外围。四个压扣能够牢固的将上压圈扣压在下压圈上，同时能够扣住上压圈与下压圈之间的筛绢。进一步地，所述上压圈上设置有格口网，所述格口网具有四个方形网格。利用格口网将筛绢在空间上分为四个部分。更进一步地，所述置物装置包括置物盒和离心管，所述离心管放置在置物盒中。优选地，所述置物盒内设置有圆柱状凹槽，所述圆柱状凹槽中放置有冰块。用冰块维持过滤血液所需的低温环境。前述的血液过滤器中，所述圆柱状凹槽中设置有两个隔离片，两个隔离片垂直交叉设置。通过垂直交叉设置的两个隔离片，将圆柱状凹槽空间上分成四个小槽，四个小槽与格口网的四个方形网格一一对应，每个小槽中放置一个离心管，从而便于标记样品，不会造成混淆。前述的血液过滤器中，所述压扣的材质为塑料。前述的血液过滤器中，所述上压圈和下压圈的材质均为不锈钢。前述的血液过滤器中，所述固定台为菱形铁制固定台。菱形铁制固定台能够保证本专利技术的稳固性，不会因位于竖杆一侧的置物装置而倾倒。本专利技术的优点：经过上述处理方法处理后的鲍鱼血细胞，由于加入抗凝保护剂，血细胞取出后可在较长时间内不聚集成团，依旧保持细胞的完整性和独立性，而且经过血液过滤器过滤后，血液中杂质大大减少，所以通过此处理方法处理后的血细胞在后续实验中可得到成本更低，数据更准确的实验结果。附图说明图1是血液过滤器结构示意图；图2是置物装置结构示意图。附图标记：1-固定台，2-竖杆，3-过滤装置，4-置物装置，5-压圈杆，6-上压圈，7-下压圈，8-压扣，9-置物盒，10-离心管，11-凹槽，12-隔离片，13-格口网，14-高度调节钮。图3是鲍鱼血细胞离体1.5h后在各抗凝保护剂中的凝集情况(无抗凝保护剂组为对照组)；图4是鲍鱼血细胞离体3h后在各抗凝保护剂中的凝集情况；图5是鲍鱼血细胞离体4h后在各抗凝保护剂中的凝集情况；图6是鲍鱼血细胞离体5h后在各抗凝保护剂中的凝集情况；图3-6中，箭头所指为细胞凝集现象。具体实施方式下面将通过具体实施例来对本专利技术进行进一步的解释，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本专利技术的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本专利技术的范围。本专利技术的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。实施例1一种血液过滤器，如图1、2所示，包括固定台1、竖杆2、过滤装置3和置物装置4，所述置物装置4放置于过滤装置3的下方，所述过滤装置3通过压圈杆5安装在竖杆2上，压圈杆5通过高度调节钮14安装在竖杆2上，竖杆2安装在固定台1上，所述过滤装置3包括上压圈6和下压圈7，所述上压圈6和下压圈7均和竖杆2连接。上压圈6与下压圈7之间设置有筛绢。格口网13通过筛绢对血液进行过滤。进一步的，为了便于更换设置在上压圈6与下压圈7之间的筛绢，上压圈6上设置有四个压扣8，四个压扣8均布在所述上压圈6的外围。四个压扣8能够牢固的将上压圈6扣压在下压圈7上，同时能够扣住上压圈6与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述处理方法包括如下步骤：(1)首先在2ml离心管中加入1ml抗凝保护剂；(2)然后用解剖刀划开鲍鱼腹足部血窦，将鲍鱼倾斜20‑30°放在冰上以便血液更易流出；(3)待血液流出，用无菌注射器抽1ml血直接注入到加入抗凝保护剂后的离心管中；(4)用一种用于流式细胞仪检测的血液过滤器过滤步骤(3)中液体到新的2ml离心管中；(5)再经18℃，3000rpm离心10min，去掉上清；(6)最后用1ml滤菌海水重新悬浮经过步骤(5)处理的血细胞制成鲍血淋巴悬液。

【技术特征摘要】
1.一种鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述处理方法包括如下步骤：(1)首先在2ml离心管中加入1ml抗凝保护剂；(2)然后用解剖刀划开鲍鱼腹足部血窦，将鲍鱼倾斜20-30°放在冰上以便血液更易流出；(3)待血液流出，用无菌注射器抽1ml血直接注入到加入抗凝保护剂后的离心管中；(4)用一种用于流式细胞仪检测的血液过滤器过滤步骤(3)中液体到新的2ml离心管中；(5)再经18℃，3000rpm离心10min，去掉上清；(6)最后用1ml滤菌海水重新悬浮经过步骤(5)处理的血细胞制成鲍血淋巴悬液。2.根据权利要求1所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述抗凝保护剂由以下成分组成：氯化钠2.45～2.55g、EDTA0.9～1.1g、1，4-哌嗪二乙磺酸0.22～0.24g和0.1mMPBS100ml。3.根据权利要求2所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述抗凝保护剂的制备方法为：(1)将0.1mMPBS缓冲液倒入烧杯中，再向烧杯中加入固体氯化钠粉末搅拌3-5分钟，直到氯化钠全部溶解，然后再加入1，4-哌嗪二乙磺酸粉末充分搅拌溶解得混合溶液A；(2)将混合溶液A放入38-40℃水浴锅中加热，再缓慢加入EDTA，边加入边搅拌，直到EDTA完全溶解得混合溶液B；(3)将混合溶液B转到室温状态下用磁力搅拌器搅拌0.5-1h，使各组分充分溶解到PBS缓冲液中；(4)超净工作台开启紫外杀菌功能30-35min，然后在超净工作台上将混合溶液B先用0.45um无菌滤器过滤除杂放入灭菌蓝盖瓶中，再用0.22um无菌滤器将蓝盖瓶中液体过滤除菌，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明珠，杨熙芸，孔瑶瑶，李圣强，时心泽，毕秀娟，潘世杰，姚传伟，李浩宇，孟晓雪，刘明芳，阮泽立，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37