一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法技术

本发明专利技术公开了一种湖泊沉积物叶绿素a含量的测定方法，该方法称取一定量的冻干研磨好的湖泊沉积物于离心管中，使用无水乙醇作为沉积物叶绿素a的浸提液，摇晃均匀，在低温避光处浸提24h，通过离心获取上清液，用可见分光光度计测定665nm和750nm波长处的吸光度，加10%的盐酸进行酸化后，再次测定665nm和750nm波长处的吸光度，最后计算沉积物叶绿素a的含量。本发明专利技术操作可行，安全实用，结果重现性好。

A method for calculating chlorophyll a content in Lake Sediments

The invention discloses a method for determining the content of chlorophyll a in Lake sediments. The method weighs a certain amount of lyophilized and ground lake sediments in a centrifugal tube, uses anhydrous ethanol as the extract of chlorophyll a in the sediments, shakes evenly, leaches them at low temperature and avoids light for 24 hours, obtains supernatant by centrifugation, and uses visible spectrophotometry. The absorbance at wavelengths of 665 nm and 750 nm was measured by spectrophotometer. After acidification with 10% hydrochloric acid, the absorbance at wavelengths of 665 nm and 750 nm was determined again. Finally, the content of chlorophyll a in sediments was calculated. The invention is feasible, safe and practical, with good reproducibility.

【技术实现步骤摘要】
一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法
本专利技术提供一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，属于湖泊环境监测

技术介绍
叶绿素a是存在于所有自养生物的一种光合色素，能够被直接测定并用来作为光能自养生物量的主要指示。以往对叶绿素的研究多集中在上层水体中的叶绿素测定，很少涉及到沉积物，实际上，沉积物中叶绿素a的含量关系到底栖动物的食物来源和底质环境的质量。现在有关水体叶绿素a的方法多样，且有相关的实验操作规范作为指导，到目前为止，有关沉积物叶绿素a含量的测定在国内是尚无成文的规范可以执行。而为了能有效地估计湖泊水库等的初级生产力，对湖库沉积物叶绿素a含量的测定方法进行摸索是很有必要的。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供了一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，解决了现有技术中对于湖泊沉积物中叶绿素a含量测定物规范操作方法的技术问题。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，首先，称取湖泊沉积物于离心管中，加入无水乙醇浸提液摇晃均匀，在低温避光处浸提24h，离心获取上清液；然后，采用分光光度法测取665nm和750nm波长处的吸光度值，加入10％的盐酸进行酸化后，再测量665nm和750nm波长处的吸光度值；最后，利用上述数据计算湖泊沉积物内的叶绿素a的含量。进一步，湖泊沉积物经真空冷冻干燥机进行冻干处理，然后经研磨处理后呈粉末状。进一步，低温浸提的温度为4℃。进一步，浸提过程中摇晃2-3次使样品充分混合。进一步，离心条件：转速4500r/min，时间15min，离心温度为4℃。进一步，使用1cm光程的玻璃比色皿，无水乙醇作参比溶液进行吸光度值测量。进一步，叶绿素a的含量的计算公式为：Chl-a＝A*K*[(D665b-D750b)-(D665a-D750a)]*V/(M*L)上式中，：Chl-a为沉积物叶绿素a的含量，单位：μg/g；A为叶绿素a的消光系数，取12.0；K为因子系数，取2.43；D665b为酸化前665nm波长下的吸光度值；D665a为酸化后665nm波长下的吸光度值；D750b为酸化前750nm波长下的吸光度值；D750a为酸化后750nm波长下的吸光度值；V为提取液体积，单位mL；M为沉积物用量，g；L为比色皿光程，cm。本专利技术所达到的有益技术效果：本专利技术提供的一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，该方法中，冻干处理的沉积物减少了叶绿素a的损失；使用对人体安全无毒害的无水乙醇作浸提液；研磨完全的沉积物便于提取剂充分提取色素；结果的重现性好。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。下面结合实施例对本专利技术专利进一步说明。本专利技术提供一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，首先，称取湖泊沉积物于离心管中，加入无水乙醇浸提液摇晃均匀，在低温避光处浸提24h，离心获取上清液；然后，采用分光光度法测取665nm和750nm波长处的吸光度值，加入10％的盐酸进行酸化后，再测量665nm和750nm波长处的吸光度值；最后，利用上述数据计算湖泊沉积物内的叶绿素a的含量。其中，湖泊沉积物经真空冷冻干燥机进行冻干处理，然后经研磨处理后呈粉末状；低温浸提的温度为4℃；浸提过程中摇晃2-3次使样品充分混合；离心条件：转速4500r/min，时间15min，离心温度为4℃；使用1cm光程的玻璃比色皿，无水乙醇作参比溶液进行吸光度值测量；叶绿素a的含量的计算公式为：Chl-a＝A*K*[(D665b-D750b)-(D665a-D750a)]*V/(M*L)上式中，：Chl-a为沉积物叶绿素a的含量，单位：μg/g；A为叶绿素a的消光系数，取12.0；K为因子系数，取2.43；D665b为酸化前665nm波长下的吸光度值；D665a为酸化后665nm波长下的吸光度值；D750b为酸化前750nm波长下的吸光度值；D750a为酸化后750nm波长下的吸光度值；V为提取液体积，单位mL；M为沉积物用量，g；L为比色皿光程，cm。实施例选取南京某富营养化湖泊作沉积物样品采集地，采集湖泊0-2cm表层沉积物若干，装于无菌自封袋，封好后于冰柜-20℃冷藏，冷藏48h以后取出，并用真空冷冻干燥机处理72h进行完全冻干，取够用冻干完全的沉积物于研钵中快速充分研磨近粉末状。使用电子天平称取0.25g置于10mL连盖塑料离心管中，每种处理称量3个实验重复，向上述离心管中加入9mL分析纯无水乙醇，扣紧盖子，上下摇晃数次以充分混合均匀，放置4℃冰箱避光浸提24h，浸提期间，对样品再次混合2-3次以充分提取叶绿素a，24h后取出样品并再次上下混合，使用医用离心机以4500r/min，4℃离心温度离心15min，离心完成后用移液枪吸取2.50mL上清液于1cm光程的玻璃比色皿中，无水乙醇作参比溶液，用可见分光光度计在665nm和750nm波长处测定吸光度，移液枪吸取200μL体积分数为10％的盐酸于比色皿中，混合，静置等候2-3min后再次测定665nm和750nm波长处的吸光度，最后计算沉积物叶绿素a的含量。计算沉积物叶绿素a含量的计算公式为：Chl-a＝A*K*[(D665b-D750b)-(D665a-D750a)]*V/(M*L)。其中：Chl-a：沉积物叶绿素a的含量，单位：μg/g；A：叶绿素a的消光系数，取12.0；K：因子系数，取2.43；D665b：酸化前665nm波长下的吸光度；D665a：酸化后665nm波长下的吸光度；D750b：酸化前750nm波长下的吸光度；D750a：酸化后750nm波长下的吸光度；V：提取液体积，mL；M：沉积物用量，g；L：比色皿光程，cm。为验证本专利技术方法的重现性和优越性，用同一湖泊沉积物样品，与无水乙醇浸提沉积物样品过程相类似，选取了90％丙酮、90％乙醇、100％丙酮作为试验浸提液进行沉积物叶绿素a提取，并将它们所测得的结果与100％乙醇的测定结果进行比较，结果如表1所示。表1不同提取溶剂浸提下的沉积物叶绿素a含量结果比较(单位：μg/g)对比试验中，(1)表中所有沉积物样品预处理条件(冻干研磨)、浸提温度、离心条件、酸化条件等完全一样；(2)表中黑体字部分为本专利技术方法所测数据；(3)所有浸提液提取均采用本专利技术所述计算公式形式，但是，对于乙醇提取使用本专利技术所述计算公式时的A(叶绿素a的消光系数)取值12.0；对于丙酮提取时A取值11.0，因子系数K取值均一致。由表1我们可以看出，提取效果最好的是100％乙醇和100％丙酮，在12-24h浸提时长范围内，100％丙酮提取沉积物叶绿素a的效果是最完全的，但我们也可以看到，100％乙醇提取效果也是非常接近100％丙酮的提取效果，两种浸提液所提取出来的叶绿素a含量相差比较小。此外，丙酮是有毒的，长期接触会对人体产生不利影响，而且100％丙酮虽然提取出来的叶绿素a含量最高，但是其标准偏差是远高于100％乙醇，说明100％丙酮提取的稳定性没有100％乙醇好。综上所述，选用100％乙醇作为沉积物叶绿素a的提取溶剂，进行24h浸提还是有利于沉积物中叶绿素a比较完全的提取，且对人体无毒害，提取效果本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，其特征在于：首先，称取湖泊沉积物于离心管中，加入无水乙醇浸提液摇晃均匀，在低温避光处浸提24h，离心获取上清液；然后，采用分光光度法测取665nm和750nm波长处的吸光度值，加入10%的盐酸进行酸化后，再测量665nm和750nm波长处的吸光度值；最后，利用上述数据计算湖泊沉积物内的叶绿素a的含量。

【技术特征摘要】
1.一种湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，其特征在于：首先，称取湖泊沉积物于离心管中，加入无水乙醇浸提液摇晃均匀，在低温避光处浸提24h，离心获取上清液；然后，采用分光光度法测取665nm和750nm波长处的吸光度值，加入10%的盐酸进行酸化后，再测量665nm和750nm波长处的吸光度值；最后，利用上述数据计算湖泊沉积物内的叶绿素a的含量。2.根据权利要求1所述的湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，其特征在于：湖泊沉积物经真空冷冻干燥机进行冻干处理，然后经研磨处理后呈粉末状。3.根据权利要求1所述的湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，其特征在于：低温浸提的温度为4℃。4.根据权利要求1所述的湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，其特征在于：浸提过程中摇晃2-3次使样品充分混合。5.根据权利要求1所述的湖泊沉积物叶绿素a含量的计算方法，其特征在于：离心条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦聪聪，赵大勇，林玉清，余钟波，
申请(专利权)人：河海大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32