The invention discloses a PCR detection method and a detection kit for shrimp infected with Enteroblastoma hepatica. The detection method comprises: (1) designing a primer (2) PCR reaction system (3) PCR reaction. The detection kit includes a box body, a box cover, a support plate frame with a PCR buffer tube with 2 x PCR buffer, a primer tube with positive and negative primers for the prawns and the positive primer sequence: 5 'ATT AGA CAC CGC TGT AGT TC 3', and the reverse primer sequence: 5 '. The deionized water pipe of the ionic water; the SPF (no specific pathogen) was negative to the nucleic acid of the shrimp; the positive clones of the 106 copy cDNA of the inner loaded shrimps were taken care of. The invention has high sensitivity and specificity, and is simple and rapid in operation.
【技术实现步骤摘要】
对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测方法及检测试剂盒
:本专利技术涉及对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测方法及检测试剂盒,属于海洋生物病原检测
技术介绍
:虾肝肠胞虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)于2009年在泰国养殖的生长缓慢的斑节对虾(Penaeusmonodon)中首次报道,主要感染斑节对虾和凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei),现已在泰国、越南、中国、印度尼西亚、马来西亚等国家广泛流行。EHP是一种胞内寄生虫,属于微孢子虫科、肠胞虫属,主要寄生于对虾肝胰脏中,导致对虾生长阻滞,给对虾养殖业造成巨大经济损失。对虾感染EHP后并无明显外观症状,灵敏、特异、快速的检测方法是EHP早期预防的重要有效手段。PCR技术因其灵敏度高、特异性强、简便快速等特点,在对虾病原的检测和诊断方面得以广泛应用,建立EHP高灵敏度的PCR检测方法,以及配合该检测方法使用的检测试剂盒极为重要。
技术实现思路
:本专利技术的目的在于解决现有PCR检测方法灵敏度不高的问题,提供对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测试剂盒,同时还提供利用该试剂盒进行检测的检测方法,该检测方法灵敏度高、特异性好,操作简单、快速。本专利技术的目的可以提供如下措施来达到:对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测方法,其特征在于其包括:(1)设计引物:根据虾肝肠胞虫SSUrDNA(KF362129)基因序列,设计了特异性强、合成率高的引物,正向引物序列:5’-ATTAGACACCGCTGTAGTTC-3’;反向引物序列:5’-GTTATTGCCTTCTCCCTCT-3’;(2)PCR反应 ...
【技术保护点】
1.对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测方法,其特征在于其包括:(1)设计引物:根据虾肝肠胞虫SSU rDNA(KF362129)基因序列,设计了特异性强、合成率高的引物,正向引物序列:5’‑ ATT AGA CAC CGC TGT AGT TC ‑3’ ;反向引物序列:5’‑ GTT ATT GCC TTC TCC CTC T ‑3’ ;(2) PCR反应体系:
【技术特征摘要】
1.对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测方法,其特征在于其包括:(1)设计引物:根据虾肝肠胞虫SSUrDNA(KF362129)基因序列,设计了特异性强、合成率高的引物,正向引物序列:5’-ATTAGACACCGCTGTAGTTC-3’;反向引物序列:5’-GTTATTGCCTTCTCCCTCT-3’;(2)PCR反应体系:(3)PCR反应:94℃变性5min,1个循环;PCR扩增:94℃变性30s,50℃退火40s,72℃合成40s,35个循环;终延伸:72℃延伸10min,1个循环;4℃保存。2.实现权利要求1所述的对虾感染虾肝肠胞虫PCR检测方法的试剂盒,其包括盒体(1)、设在盒体(1)开口处的盒盖(2),其特征在于盒体(1)内设有支撑板架(3),支撑板架(3)上设有PCRbuffer管孔、引物管孔、去离子水管孔、阴性对照管孔、阳性对照管孔,PC...
【专利技术属性】
技术研发人员:闫冬春,庞能源,粘艳莺,陈博堃,刘云浩,王佳翠,
申请(专利权)人:鲁东大学,
类型:发明
国别省市:山东,37
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