一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法，本发明专利技术以银杏叶为原料，提取得到的银杏叶提取物通过有机溶剂萃取，再经过RP‑18柱色谱分离纯化得到。所述银杏内酯化合物命名为银杏内酯HK，其结构式为：

Ginkgolide compound extracted from Ginkgo leaves and preparation method thereof

The invention relates to a ginkgolide compound extracted from the leaves of Ginkgo biloba and a preparation method. The extraction of ginkgo leaf extract from Ginkgo biloba leaves is extracted by organic solvent and then separated and purified by RP 18 column chromatography. The ginkgolide compound is named ginkgolide HK, and its structural formula is:

【技术实现步骤摘要】
一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法
本专利技术涉及中药，具体涉及中药的化学成分单体和提取分离纯化方法，尤其涉及一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法。
技术介绍
银杏叶提取物作为制药的有效成分已被广泛应用。目前从银杏中分离得到的有效成分主要是二萜内酯及倍半萜内酯，即银杏内酯A、B、C、J、M和白果内酯。20世纪80年代以来，研究发现银杏内酯是血小板活化因子(PAF)的强拮抗剂，被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，对于缺血损伤和中枢神经系统具有保护作用，对于心脑血管疾病具有显著疗效。本专利技术人在进一步研究银杏叶提取物时惊喜地发现，在制备银杏总内酯的过程中，提取分离到一个未知成分，其含量在0.1～0.8％之间，因此，本专利技术对该未知成分进行了提取分离纯化，并进行结构鉴定，鉴定结果与参考文献(WeingesK,RummlerM,SchickH.Herstellungvon1,10-Dihydroxy-und1,7,10-Trihydroxyginkgolidaus1,3,7,10-Tetrahydroxyginkgolid.LiebigsAnnChem.1993,1023-1027.)进行对比分析，最终确定该化合物为1,10-dihydroxyginkgolid(1,10-二羟基银杏内酯)。现有文献仅报道了从银杏叶中提取和鉴定主要內酯成分，如银杏内酯A、B、C及白果内酯等，而未见有文献报道从银杏叶中提取和鉴定该未知成分的研究，因而进一步研究具有积极意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于从银杏叶中提取和鉴定所述银杏叶提取物中的未知成分。本专利技术提供了一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物。所述银杏内酯化合物通过波谱和质谱等对其结构进行了鉴定归属，确定其化学结构为1,10-二羟基银杏内酯(1,10-Dihydroxyginkgolid)，本专利技术将其命名为银杏内酯HK(GinkgolideHK，简称GHK)，其结构式为：银杏内酯HK化合物的质谱(MS)检测：仪器为AgilentLCMSD液质联用仪；测试条件为：ESI:0.4ml/min；SCAN:m/z100～1000，Positivemode；银杏内酯HK质谱(MS)结果显示分子量为408。银杏内酯HK确证与化合物1,10-二羟基银杏内酯一致。银杏内酯HK化合物的旋光色谱(ORD))检测：仪器为RUDOLPHAutopolIV旋光仪；测试条件：样品浓度为1mg/mL的乙腈溶液，25℃；测试结果为[ɑ]D25:-68°(c,0.1,Acetonitril)。银杏内酯HK确证与化合物1,10-二羟基银杏内酯一致。银杏内酯HK化合物的1H-核磁共振和13C-核磁共振检测：仪器为Bruker600MHz核磁共振仪，溶剂为DMSO-d6，其碳氢核磁共振数据见表一。表一.本专利技术的银杏内酯化合物(银杏内酯HK化合物)和化合物1,10-二羟基银杏内酯(1,10-dihydroxyginkgolid)碳氢核磁共振数据比较(DMSO-d6in600MHz)上述检测确证本专利技术的银杏内酯化合物(银杏内酯HK化合物)即为化合物1,10-二羟基银杏内酯。所述银杏内酯化合物(银杏内酯HK)中不含白果内酯(如附图1)。所述银杏内酯化合物含量≥99％，优选银杏内酯化合物含量≥99.5％。本专利技术的另一目的是提供了一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物(银杏内酯HK)的制备方法。本专利技术方法包括以下步骤：(1)用乙醇水溶液回流提取银杏叶三次，乙醇水溶液用量为5～8倍药材重量，减压浓缩提取液至无乙醇味，加水静置澄清后，过滤，滤液上大孔吸附树脂，洗脱减压浓缩得到银杏叶提取物；(2)取银杏叶提取物加水溶解，加入乙酸乙酯或乙酸甲酯或二者的混合溶液进行萃取，合并萃取液，减压浓缩溶剂至干，即得银杏总内酯提取物；(3)银杏总内酯提取物用溶剂加热溶解，再冷却静置析晶，抽滤，滤饼用溶剂洗涤后，烘干得银杏总内酯粗品；(4)银杏总内酯粗品用乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶液，加热回流至完全溶解，减压浓缩至有结晶析出，静置析晶，抽滤，滤液浓缩至干得到银杏内酯化合物(银杏内酯HK)粗品；(5)将银杏内酯化合物(银杏内酯HK)粗品进行反相柱色谱柱纯化1～2次，流动相为甲醇和水混合溶液，甲醇比例范围为10％～90％，等度洗脱或梯度洗脱，使用紫外检测波长为220nm，收集银杏内酯化合物(银杏内酯HK)流出液，减压浓缩至无溶剂，干燥，得到银杏内酯化合物(银杏内酯HK)。本专利技术所述步骤(1)乙醇水溶液浓度为50％～80％(V/V)。所述步骤(2)水溶解银杏叶提取物的量为3～5倍银杏叶提取物重量,萃取所用有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶液，萃取体积为0.5～1.5倍药液体积(V/V)，优选0.8～1.2倍药液体积(V/V)，萃取次数为1～4次，优选3次。所述步骤(3)中溶解银杏总内酯提取物所用的溶剂为30％～60％含水甲醇或含水乙醇，用量为总内酯提取物0.5～1.5倍重量，优选0.8～1.2倍重量，加热至60℃溶解，静置析晶时间为8～16h，静置析晶温度为0～10℃，优选3～5℃，所用洗晶溶剂为30％～60％的含水甲醇或乙醇，洗晶次数为0～4次，优选1～2次；烘干温度55-65℃。所述步骤(4)中溶解银杏总内酯粗品所用的溶剂为乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶液，减压浓缩至药液重量与银杏总内酯粗品重量比为10：1～15：1，反复操作次数为1～2次。所述步骤(5)中运用柱色谱法进行银杏内酯化合物(银杏内酯HK)纯化，所用柱色谱填料为RP-18，流动相为甲醇和水混合溶液，甲醇比例范围为10％～90％，等度洗脱或梯度洗脱，80℃下减压真空干燥时间为2～4小时。本专利技术方法所述步骤(1)、(2)、(4)(5)减压浓缩的压力为-0.08～-0.1MPa。本专利技术方法得到的银杏内酯化合物即为银杏内酯HK。本专利技术为首次从银杏叶中提取分离纯化得到银杏内酯化合物(银杏内酯HK(GHK))，并经质谱(MS)检测、旋光色谱(ORD)检测和碳氢核磁共振检测，确证为化合物1,10-二羟基银杏内酯，本专利技术产品可以作为制药的有效成分或制备保健品广泛应用，对于开发新型银杏内酯制剂具有较大应用价值。本专利技术提供的制备方法操作简单，经济实用，适于工业化生产。附图说明图1：本专利技术实施例4银杏内酯化合物(银杏内酯HK)的HPLC-ELSD检测谱图图2：本专利技术实施例4银杏内酯化合物(银杏内酯HK)的氢谱图3：本专利技术实施例4银杏内酯化合物(银杏内酯HK)的碳谱具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。参考下列实施例将更易于理解本专利技术，给出实施例是为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。本专利技术实施例使用的银杏叶以及试剂除特别说明外，均为市售得到。实施例1取干银杏叶(市售)500kg，粉碎，80％乙醇回流提取三次，溶剂用量依次为4000L、2500L和2500L，每次提取2h,合并提取液，60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无乙醇味，加入纯化水1000L，静置，过滤，滤液上大孔吸附树脂柱(D101)，纯化水(1500L)洗柱去杂，70％乙醇(2000L)洗脱至洗脱液颜色变淡，洗脱液于60℃减压(-0.09MPa)浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物，其特征在于，所述银杏内酯化合物从银杏叶中提取得到，所述银杏内酯化合物含量≥99％，所述银杏内酯化合物命名为银杏内酯HK，其结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物，其特征在于，所述银杏内酯化合物从银杏叶中提取得到，所述银杏内酯化合物含量≥99％，所述银杏内酯化合物命名为银杏内酯HK，其结构式为：2.根据权利要求1所述一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物，其特征在于，所述银杏内酯化合物含量≥99％。3.根据权利要求2所述一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物，其特征在于，所述银杏内酯化合物含量≥99.5％。4.根据权利要求1所述一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物，其特征在于，所述银杏内酯化合物中不含白果内酯。5.根据权利要求1所述一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)用乙醇水溶液回流提取银杏叶三次，乙醇水溶液用量为5～8倍药材重量，减压浓缩提取液至无乙醇味，加水静置澄清后，过滤，滤液上大孔吸附树脂，洗脱浓缩得到银杏叶提取物；(2)取银杏叶提取物加水溶解，加入乙酸乙酯或乙酸甲酯或二者的混合溶液进行萃取，合并萃取液，减压回收溶剂至干，即得银杏总内酯提取物；(3)银杏总内酯提取物用溶剂加热溶解，再冷却静置析晶，抽滤，滤饼用溶剂洗涤后，烘干得银杏总内酯粗品；(4)银杏总内酯粗品用有机溶剂乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶液，加热回流至完全溶解，减压浓缩至有结晶析出，静置析晶，抽滤，滤液浓缩至干得到银杏内酯化合物，即银杏内酯化合物粗品；(5)将银杏内酯化合物粗品进行反相柱色谱柱纯化1～2次，流动相为甲醇和水混合溶液，甲醇比例范围为10％～90％，等度洗脱或梯度洗脱，使用紫外检测波长为220nm，收集银杏内酯化合物流出液，减压浓缩至无溶剂，干燥，得到银杏内酯化合物；所述步骤(1)、(2)、(...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖志勇，吕署一，李玉杰，刘斐，李丁，
申请(专利权)人：上海信谊百路达药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31