本发明专利技术公开了二氢杨梅素在制备抗流感病毒药物中的应用。所述流感病毒为甲型流感病毒，优选为H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2或H10N8。所述二氢杨梅素抗甲型流感病毒中的作用机制是通过与PB2cap蛋白的结合抑制核糖核蛋白复合物vRNP活性，制备用于预防和治疗流感的药物。其中，二氢杨梅素与流感病毒PB2cap蛋白结合的位点为432位的组氨酸(His432)，357位的组氨酸(His357)，404位的苯丙氨酸(Phe404)，323位的苯丙氨酸(Phe323)，361位的谷氨酸(Glu361)，376位的赖氨酸(Lys376)，363位的苯丙氨酸(Phe363)，429位的天冬酰胺(Asn429)。
Application of two myricetin in the preparation of anti influenza drugs
The invention discloses the application of two myricetin in the preparation of anti influenza virus drugs. The influenza viruses are influenza A viruses, preferably H1N1, H3N2, H5N1, H7N1, H7N2, H7N3, H7N7, H7N9, H9N2 or H10N8. The mechanism of the two HBV against influenza A virus is to prepare drugs for the prevention and treatment of influenza by binding to the PB2cap protein to inhibit the activity of the ribonucleoprotein complex vRNP. Among them, two hydrogen myricetin and influenza virus PB2cap protein binding sites are 432 - bit histidine (His432), 357 - bit histidine (His357), 404 - phenylalanine (Phe404), 323 - phenylalanine (Phe323), 361 - bit glutamic acid (Glu361), 376 - lysine (Lys376), 363 phenylalanine (Phe363), and 429 - bit asparagine Amines (Asn429).
【技术实现步骤摘要】
二氢杨梅素在制备抗流感病毒药物中的应用
本专利技术涉及二氢杨梅素在抗甲型流感病毒药物中的应用，属于医药
技术介绍
流感作为一种病毒性传染病严重威胁人类的健康和阻碍社会经济的发展。甲型流感病毒每年引起全球的感染病例多达上亿人次，具有高致病率和高致死率的特点。历史上共爆发了四次流感病毒引起的大流行，都是由动物源性流感病毒跨越了宿主屏障所致。1997年，香港发生人感染禽流感病毒H5N，1导致人类呼吸道疾病和死亡的疫情并蔓延至多个国家，致死率更是高达50％，加剧了人们对于高致病禽流感病毒的恐慌。在2013年3月，中国首次出现人感染H7N9病例，并快速进展为肺炎、呼吸衰竭、呼吸窘迫综合征，死亡、病死率约为40％。截止到2017年6月，全球报告感染H7N9共1538例，中国内地就报告732例，而且两例H7N9感染者病毒已发生变异。流感的防治，尤其是药物的防治已是迫在眉睫。迄今为止，临床上使用的抗流感病毒药物主要是：M2离子通道抑制剂(金刚烷胺、金刚烷乙胺)；NA抑制剂(奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦)；广谱的RNA聚合酶抑制剂(利巴韦林、法匹拉韦)，但在抗病毒药物使用过程中逐渐产生耐药株，还有考虑到这些药物产生的神经毒性，使得人们迫切的寻找新型的抗甲型流感病毒药物和策略。甲型流感病毒是由HA、NA、M、NS、PA、PB1、PB2、NP八个全基因组构成，其中PA、PB1、PB2构成了RNA聚合酶，介导着病毒的转录和复制。由于甲型流感病毒的表面抗原极易突变，科研工作者将重心转移至高度保守的RNA聚合酶上，设计和开发相应的抑制剂，成为抗流感药物研究的一个新方向。。流感病毒RNA聚合酶复合体是由PB1、PB2和PA三个亚基组成，其中PB2亚基多功能碱性蛋白，由759个氨基酸组成，具有一个特异的亲核序列区，其作用是在病毒基因组转录时，参与识别招募宿主mRNA的5’端帽子结构作为转录的引物，PB2cap的结合位点位于318～483位氨基酸残基区域。PB2与宿主细胞mRNAs的5’端帽状结构的结合是转录病毒mRNA的起始步骤，如果我们能找到一类能与PB2帽状结构结合位点更紧密结合的小分子，这类小分子能竞争性地占据PB2帽状结构结合位点，那么便能从源头阻断流感病毒在体内的复制。近年来，有不少研究发现，很多黄酮、鞣酸、生物碱及萜类化合物具有不同程度的抗流感作用，因此天然来源的单体化合物是抗流感药物的重要来源。我们前期研究发现黄酮多酚类的小分子中药单体能够有效的抗甲型流感病毒，如黄芩苷、槲皮素、木犀草素等。二氢杨梅素是一种藤茶类黄酮类化合物，广泛存在于葡萄科蛇葡萄属植物中，研究发现二氢杨梅素具有抗肿瘤、抗氧化、降血压、抑制体内血栓形成等多种药理活性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于从天然产物中发现一种新型的抗流感病毒抑制剂。所述的二氢杨梅素，具有显著的抗甲型流感病毒的活性，可以作为新的抗流感病毒药物和先导化合物进行开发，具有广泛的应用前景。具体地，本专利技术发现二氢杨梅素能够抑制甲型流感病毒，能特异性地破坏PB2cap和宿主细胞帽状结构的相互结合，影响病毒的复制，可作为新型抗甲型流感先导化合物进行研发。在本专利技术的技术方案中所述的二氢杨梅素的结构如式I所示，所述二氢杨梅素可抑制甲型流感病毒H1N1和H3N2在宿主细胞中的复制。所述二氢杨梅素能靶向流感病毒的PB2cap蛋白，从而抑制其与宿主细胞帽状结构的结合及vRNP的活性，可用于制备成抗甲型流感病毒的药物。所述二氢杨梅素与流感病毒PB2cap蛋白结合的位点为432位的组氨酸(His432)，357位的组氨酸(His357)，404位的苯丙氨酸(Phe404)，323位的苯丙氨酸(Phe323)，361位的谷氨酸(Glu361)，376位的赖氨酸(Lys376)，363位的苯丙氨酸(Phe363)，429位的天冬酰胺(Asn429)，可抑制vRNP活性与流感病毒复制，从而发挥抗流感病毒作用。所述二氢杨梅素可制成多种药学上可接受的剂型，如片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊、口服液、注射液等，用于流感的治疗。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。综上所述，本专利技术与现有技术相比具有以下优点和效果：1.二氢杨梅素均能抑制甲型流感病毒H1N1和H3N2对细胞的感染，具有广谱的抗病毒活性。2.二氢杨梅素对细胞的毒性较小，对MDCK细胞和A549细胞的CC50分别是505.1±12.8、328.5±4.315μM。二氢杨梅素对甲型流感病毒H1N1和H3N2的IC50分为15.18±0.92，23.33±4.83μM，安全指数分别是33.3和21.7，可作为安全有效的抗流感病毒药物进行开发。3.二氢杨梅素作用于流感病毒PB2蛋白的帽子结合区域，能竞争性抑制PB2蛋白与宿主mRNA5’端帽状结构的结合，阻止流感病毒的转录复制。附图说明图1二氢杨梅素细胞毒性检测。A.二氢杨梅素对MDCK细胞的毒性；B.二氢杨梅素对A549细胞的毒性。图2二氢杨梅素抗甲型流感病毒的活性。A.二氢杨梅素对不同甲型流感病毒株的抑制活性；B.二氢杨梅素抑制甲型流感病毒引起的细胞病变；C.二氢杨梅素抑制甲型流感病毒引起的空斑形成。图3二氢杨梅素抑制流感病毒在细胞中的复制。A.二氢杨梅素抑制流感病毒在MDCK细胞中NP蛋白的表达；B.二氢杨梅素抑制流感病毒在MDCK细胞中NP蛋白的表达；C.二氢杨梅素降低病毒在MDCK细胞中NPmRNA的表达水平。图4二氢杨梅素对流感病毒进入靶细胞的影响。图5二氢杨梅素作用于流感病毒感染后阶段。图6二氢杨梅素抑制流感病毒的前期复制。图7二氢杨梅素能与PB2cap蛋白浓度依赖性结合。A.FP实验证明二氢杨梅素能够与PB2cap蛋白浓度依赖性结合；C.SPR实验证明二氢杨梅素与PB2cap蛋白有结合作用。图8二氢杨梅素对流感病毒vRNP的活性的影响。图9二氢杨梅素与PB2cap蛋白的分子对接。具体实施方式为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合实验和结果对二氢杨梅素在抗甲型流感病毒中的应用进一步说明。本专利技术所用的材料细胞与病毒犬肾上皮细胞(MDCK细胞)、人肺癌上皮细胞(A549)和293T细胞在含10％胎牛血清，100U/L青霉素、链霉素的DMEM或1640培养基进行培养。甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)、H1N1FM-1和A/Aichi/2/68(H3N2)选择8-9天的鸡胚传代扩增，-80℃保存。质粒A/Thailand/Kan353/2004-HA、A/Thailand/Kan353/2004-NA和pNL4-3R-E-Luc用于H5N1假病毒的制备。其中pNL4-3R-E-Luc是在pNL4-3进行移码突变使其不表达Env蛋白和Vpr蛋白，并插入荧光素酶报告基因的一个重组质粒。pHW2K-PB1、pHW2K-PB2、pHW2K-PA、pHW2K-NP和pPolI-Flu以及hRluc-TK用于mini-replicon试验，其中pHW2K-PB1、pHW2K-PB2、pHW2K-PA、pHW2K-NP在细胞转染后形成RNP复合物。其中所有与活病毒相关试验是在生物安全2级或3级设施中进行。实施例1二氢杨梅素的细胞毒性检测二氢杨梅素对细胞毒性的检测采用MTT法，从而确定药物的作本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种式I所示化合物在制备抗流感病毒药物中的应用
【技术特征摘要】
1.一种式I所示化合物在制备抗流感病毒药物中的应用2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述流感病毒为甲型流感病毒。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述甲型流感病毒为H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨洁，刘叔文，田元新，刘淼淼，陈飞敏，陈芳昭，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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