抗PCSK9抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗PCSK9抗体或其抗原结合片段。本发明专利技术还提供了编码该抗体的核酸，包含该抗体的组合物，以及制备该抗体并使用该抗体治疗或预防诸如血脂异常、代谢性疾病、高胆固醇血症、炎症性疾病和感染性疾病的疾病的方法。

Anti PCSK9 antibody and its application

The invention provides an anti PCSK9 antibody or an antigen binding fragment thereof. The invention also provides a nucleic acid encoding the antibody, a composition containing the antibody, and a method for preparing the antibody and using the antibody to treat or prevent diseases such as dyslipidemia, metabolic disease, hypercholesterolemia, inflammatory disease and infectious diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PCSK9抗体及其应用相关申请的交叉引用本申请要求2015年10月16日提交的中国专利申请号为201510673316.1的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。引用电子提交的序列表本申请包含一个序列表，它通过EFS-Web以电子方式提交，作为ASCII格式的序列表，文件名为“序列表文件”，创建日期为2016年9月19日，大小约为76.7kB。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，并且其全部内容通过引用整体并入本文。
本专利技术涉及单克隆抗PCSK9抗体，编码所述抗体的核酸和表达载体，含有所述载体的重组细胞，以及包含所述抗体的组合物。还提供了制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗包括血脂异常、代谢性疾病、高胆固醇血症、炎症性疾病和感染性疾病在内的疾病的方法。
技术介绍
2008年，约有1700万人死于心血管疾病，约占全球死亡人数的三分之一。预计到2030年这一数字将增加到2360万(Mozaffarian等，2015，循环.131(4):e29-322).各种研究表明，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平与心血管疾病的发展之间存在强相关性，这主要是由于LDL-C在动脉粥样硬化中起关键作用(Rallidis和Lekakis，2016，HellenicJCardiol.57(2):86-91).因此认为降低血浆LDL-C水平可能是预防心血管疾病的有效方法。他汀类药物多年来一直是高胆固醇血症的主要治疗药物，并且在很大程度上是有效的。然而，在相当数量的高危患者中，他汀类药物治疗未能成功靶向降低LDL-C水平，因此需要新的降低LDL-C水平的治疗方法。大部分LDL-C由肝细胞上的LDL受体(LDLR)清除。2003年，发现前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9a型(PCSK9)是LDL-C清除途径中的关键因子。PCSK9主要在肝细胞中产生，是一种分泌型丝氨酸蛋白酶，其与LDLR结合并导致LDLR的内化和溶酶体降解。由此导致的肝细胞表面LDLR蛋白浓度的降低，引起从血浆中清除的LDL-C的减少。因此，PCSK9的存在可以抑制血浆LDL-C的肝脏代谢。除LDLR和ApoB外，PCSK9是第三个与常染色体显性家族性高脂血症相关的基因(Rallidis和Lekakis，2016，HellenicJCardiol.57(2):86-91).PCSK9的功能丧失型突变与LDL-C水平和心血管疾病的降低有关，而PCSK9高水平的人群LDL-C水平升高并且心血管疾病风险显著增加。PCSK9的功能获得型突变与家族性高胆固醇血症有因果关系(Gencer等，2015，SwissMedWkly.145:w14094)。体外实验表明，PCSK9可以降低HepG2细胞上的LDLR的表达水平。类似地，小鼠中PCSK9水平的增加降低了肝脏中的LDLR表达，而PCSK9敲除小鼠具有升高的LDLR表达。综上所述，数据表明PCSK9是治疗脂质紊乱的有希望的治疗靶点。自他汀类药物以来，针对PCSK9的抗体被认为是预防心血管疾病的最大进步，并且认为它们可以用作治疗例如高胆固醇，高脂血症，冠心病，代谢综合征和急性冠状动脉综合征的治疗剂。来自例如安进和赛诺菲/再生元的全人PCSK9单克隆抗体(mAb)的I期和II期临床试验已经完成，并且给出了一系列有希望的结果。例如，阿利库单抗(赛诺菲/再生元)的研究发现LDL-C水平从39.2％降至67.9％(Gencer等，2015，SwissMedWkly.145:w14094)。目前正在进行III期临床试验，其目的是评估PCSK9的抑制对急性冠脉综合征患者心血管事件发生的影响。尽管取得了进展，但本领域需要更有效的治疗剂，包含有效抑制PCSK9与LDLR结合，同时引起人体最小不良副作用的抗PCSK9抗体。专利技术概述本专利技术通过提供以高亲和力特异性结合PCSK9，诱导肝细胞摄取LDL并防止体内LDLR降解的单克隆抗体，满足了这一需求。具体而言，本专利技术的全人抗PCSK9抗体具有比阿利库单抗(再生元)更高的对PCSK9的亲和力。在一个一般方面，本专利技术涉及结合PCSK9的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。根据一具体方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3：(1)分别为SEQIDNOs:38、39、40、34、35、和36；(2)分别为SEQIDNOs:6、7、8、2、3、和4；(3)分别为SEQIDNOs:14、15、16、10、11、和12；(4)分别为SEQIDNOs:22、23、24、18、19、和20；(5)分别为SEQIDNOs:30、31、32、26、27、和28；或(6)分别为SEQIDNOs:46、47、48、42、43、和44；其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合PCSK9，优选地特异性结合人PCSK9。根据另一具体方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：(1)具有SEQIDNO：38的多肽序列的LCDR1；(2)具有SEQIDNO：39的多肽序列的LCDR2；(3)具有SEQIDNO：40的多肽序列的LCDR3；(4)具有SEQIDNO：34的多肽序列的HCDR1；(5)具有SEQIDNO：35的多肽序列的HCDR2；和(6)具有SEQIDNOs：36和73-90之一的多肽序列的HCDR3。其中，所述抗体或其抗原结合片段结合PCSK9，优选地特异性结合人PCSK9。根据另一具体方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有与SEQIDNO：1、9、17、25、33、或91-108或41之一至少85％，较佳的至少90％，更佳的至少95％同源性的多肽序列的重链可变区，或具有与SEQIDNO：5、13、21、29、37或45之一至少85％，较佳的至少90％，更佳的至少95％同源性的多肽序列的轻链可变区。根据一种实施方式，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人/大鼠嵌合的。根据另一种实施方式，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人的。根据另一种实施方式，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，还包含一恒定区，优选人重链IgG1恒定区，和人抗体轻链κ恒定区。在另一个一般方面，本专利技术涉及一种分离的编码本专利技术单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸。在另一个一般方面，本专利技术涉及一种载体，其包含分离的编码本专利技术单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸。在另一个一般方面，本专利技术涉及一种宿主细胞，其包含分离的编码本专利技术单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸。在另一个一般方面，本专利技术涉及一种药物组合物，其包含分离的本专利技术单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。在另一个一般方面，本专利技术涉及在有需要的受试者中阻断PCSK9与LDLR结合的方法，或增加LDL摄取的方法，包括向受试者施用本专利技术的药物组合物。在另一个一般方面，本专利技术涉及一种治疗有需要的受试者的疾病、障碍或病症(优选血脂异常、代谢性疾病、炎症性疾病、感染性疾病)的方法，包括向受试者施用本专利技术的药物组合物。在另一个一般方面，本专利技术涉及制备本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括在一定条件下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：具有SEQ ID NO：38的多肽序列的LCDR1；具有SEQ ID NO：39的多肽序列的LCDR2；具有SEQ ID NO：40的多肽序列的LCDR3；具有SEQ ID NO：34的多肽序列的HCDR1；具有SEQ ID NO：35的多肽序列的HCDR2；和具有选自下组的多肽序列的HCDR3：SEQ ID NOs：36和73‑90。其中，所述的抗体或其抗原结合片段结合PCSK9。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.16 CN 20151067331611.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：具有SEQIDNO：38的多肽序列的LCDR1；具有SEQIDNO：39的多肽序列的LCDR2；具有SEQIDNO：40的多肽序列的LCDR3；具有SEQIDNO：34的多肽序列的HCDR1；具有SEQIDNO：35的多肽序列的HCDR2；和具有选自下组的多肽序列的HCDR3：SEQIDNOs：36和73-90。其中，所述的抗体或其抗原结合片段结合PCSK9。2.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3：分别为SEQIDNOs:6、7、8、2、3、和4；分别为SEQIDNOs:14、15、16、10、11、和12；分别为SEQIDNOs:22、23、24、18、19、和20；分别为SEQIDNOs:30、31、32、26、27、和28；或分别为SEQIDNOs:46、47、48、42、43、和44；其中，所述的抗体或其抗原结合片段结合PCSK9。3.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有与SEQIDNO：33至少85％同源的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQIDNO：37至少85％同源的多肽序列的轻链可变区。4.如权利要求1-3中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含一重链可变区，所述的重链可变区具有与选自下组的序列至少95％同源的多肽序列：SEQIDNOs：1、9、17、25、33、41和91-108；和一轻链可变区，所述的轻链可变区具有分别与选自下组的序列至少95％同源的多肽序列：SEQIDNOs：5、13、21、29、37和45。5.如权利要求1-4中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其包含：a.具有选自下组的多肽序列的重链可变区：SEQIDNOs：33和91-108，和具有SEQIDNo：37的多肽序列的轻链可变区；b.具有SEQIDNO：1的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：5的多肽序列的轻链可变区；c.具有SEQIDNO：9的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：13的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘礼乐，高婧，杨欣秀，许志强，胡少平，黄丽妮，顾红专，张瑜，翟杨杨，杨达志，
申请(专利权)人：钜川生物医药，
类型：发明
国别省市：维尔京群岛,VG