皮肤可渗透肽及其使用方法技术

本发明专利技术的目的是提供新的皮肤可渗透肽、使用它与生物活性物质结合的融合产物，包含它的化妆品组合物和用于对皮肤外用的药物组合物。与常规皮肤可渗透肽相比，本公开内容的皮肤可渗透肽引起免疫应答的可能性较低，并且表现出显著改善的皮肤渗透性，因此，可通过皮肤、特别是通过角质层有效递送生物活性物质。

Skin permeable peptide and its use

The aim of the present invention is to provide a new skin permeable peptide, a fusion product that combines it with a bioactive substance, including its cosmetic composition and a pharmaceutical composition for external use of the skin. Compared with the conventional skin permeable peptide, the skin permeable peptide in the present disclosure is less likely to induce immune response and shows a significant improvement in skin permeability, so that bioactive substances can be effectively delivered through the skin, especially through the cuticle.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】皮肤可渗透肽及其使用方法
本公开内容涉及能够通过皮肤递送生物活性物质的皮肤穿透肽、其衍生物、用于对皮肤外用的包含所述肽或其衍生物的药物组合物以及包含所述肽或其衍生物的化妆品组合物。
技术介绍
皮肤是不断地与外部环境接触的组织。其充当防止体液渗漏、感染和水分损失的保护性屏障。特别地，作为皮肤的最外层的表皮角质层通过防止水分损失和电解质离开皮肤来防止皮肤干燥，并且通过提供用于皮肤的正常生化代谢的环境来保护人体免受来自外部的物理伤害和化学物质。此外，其在阻止细菌、真菌、病毒等侵入皮肤中起重要作用(BouwstraJ.A，Honeywell-NguyenP.L.GoorisG.S.和PonecM.ProgLipidRes.42：1-36(2003))。通过皮肤的吸收途径包括通过角质层的吸收、通过毛囊和皮脂腺的吸收以及通过汗腺的吸收(PrausnitzM.R.和LangerR.NatBiotech.26：1261-1268(2008))。通过皮肤递送生理活性分子受到皮肤的结构和物理特性的限制。目前，通过角质层的吸收是已知最重要的吸收途径。特别地，在角质形成细胞(keratinocyte)转变成无生命的角质细胞时形成的皮肤角质层是具有致密结构的最外层。其阻止水分蒸发和外来物质的侵入，并且由于汗液和各种脂质成分而表现出PH5左右的酸性。物质要穿透角质层的屏障，其应该具有500Da或更小的分子量以及亲脂性(MethaR.C.和FitzpatrickR.E.Dermatol.Ther.20：350-359(2007))。尽管已知通常用作化妆品成分的分子量为500Da或更小的低分子量合成化合物或天然化合物可容易地递送到细胞中，但由于构成皮肤屏障的角质层的固有性质，低分子量物质的穿透效率很低。具有500Da或更大的分子量的大分子，例如蛋白质、肽或核酸，由于其大的分子量，更加难以穿透由脂双层结构组成的细胞膜。作为提高低分子量物质和大分子穿过细胞质膜的穿透效率的方法，近来对透皮药物递送(transdermaldrugdelivery，TDD)的兴趣越来越大(PrausnitzM.R.和LangerR.NatBiotech.26：1261-1268(2008))。然而，透皮药物递送的最大障碍是角质层中的角质形成细胞和角质细胞间脂质。由于皮肤的角质层对大多数表现出对皮肤的生理活性的分子(在下文中是指生理活性分子)有抵抗力，因此它们的透皮渗透性很低。已经研究了多种用于提高这些生理活性分子的透皮渗透性的方法。最近，使用细胞穿透肽的递送系统吸引了很多注意。使用细胞穿透肽具有若干优点，这些优点主要来源于可对肽的序列进行的多种修饰。这允许指定其他的细胞子域以及操纵能运载多种形式货物分子(cargomolecule)的载体。TAT(膜穿透肽的代表性实例)是在HIV-1(humanimmunodeficiencyvirus-1，人免疫缺陷病毒-1)感染机制中发现的第一种穿透细胞膜的蛋白质。由此衍生的TAT肽“YGRKKRRQRRR”是最常用的并且正得到积极的研究(Mann，D.A.等，EmboJ10：1733-1739，1991)。TAT肽已用于将β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶、RNA酶A、假单胞菌(Pseudomonas)外毒素A(PE)的结构域等递送到细胞内以研究它们在细胞中的功能和定位(Fawell，S.等，PNAS91：664-668，1994)。已经发现TAT肽通过与细胞膜上的硫酸乙酰肝素相互作用然后内吞而进入细胞，其中涉及脂质筏(JehangirS.W.等，NatureMed10：310-315，2004)。此外，衍生自触角足同源异型蛋白(Antennapediahomeoprotein)并且是果蝇的发育过程中的重要转录因子的由16个氨基酸序列组成的细胞穿透肽penetratin(Antp)、衍生自由HSV-1(herpessimplexvirustype1，单纯疱疹病毒1型)表达的VP22蛋白的细胞穿透肽VP22、由27个氨基酸序列组成的人工合成的转运素(transportan)、通过人工重复预期在细胞穿透肽中起到最重要的作用的精氨酸残基得到的多聚精氨酸(Poly-Arginine)等是公知的细胞穿透肽。由于这些现有细胞穿透肽衍生自病毒(如HIV-1)的蛋白质、衍生自由其他物种(如果蝇)表达的蛋白质、或基于对先前已知的细胞穿透肽的氨基酸序列的分析人工合成，所述当将其用于人体时，可能引起副作用，如免疫应答等。此外，由于它们由相对长的氨基酸链组成，所以其更有可能引起不需要的免疫应答，并且由于它们可能影响待递送的蛋白质的结构和功能，所以与将生物活性物质递送到细胞内相关的效率通常很低。本公开内容的专利技术人已经证明衍生自人ASTN1(星形肌动蛋白1(astrotactin1)，一种参与小脑发育和神经元迁移的神经蛋白)蛋白的肽序列与细胞穿透肽TAT或以前已知的皮肤穿透肽相比表现出非常卓越的进入表皮细胞或皮肤组织的渗透效率，并且完成了本公开内容。公开内容技术问题本公开内容旨在提供用于将由于其分子量或皮肤的角质层的固有性质而不能容易地通过皮肤递送的生理活性分子有效引入皮肤细胞内的皮肤穿透肽，该皮肤穿透肽与现有皮肤穿透肽相比引起免疫应答的可能性较低，并且表现出显著改善的皮肤渗透性。本公开内容还旨在提供肽融合产物，其解决了在预防或治疗炎性皮肤病中由于分子量或皮肤的角质层的固有性质在通过在皮肤表面直接施用的困难，并且同时与现有皮肤穿透肽相比引起免疫应答的可能性较低，并且表现出显著改善的皮肤渗透性。本公开内容还旨在提供用于通过皮肤、特别是通过经角质层施用来有效地预防或治疗皮肤病的化妆品组合物，或用于皮肤外用来预防或治疗炎性皮肤病的药物组合物。技术方案本公开内容提供了具有序列(X1)n-X2-(半胱氨酸)-(X3)m的皮肤穿透肽，其中n是3至14的整数，m是4至14的整数，X1和X3各自独立地是精氨酸、赖氨酸或组氨酸，以及X2是丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸。本公开内容还提供了其中所述皮肤穿透肽与生物活性物质融合的融合产物。本公开内容还提供了包含编码所述融合产物的基因的重组表达载体。本公开内容还提供了包含所述融合产物作为活性成分的化妆品组合物。本公开内容还提供了用于皮肤外用的包含所述融合产物作为活性成分的药物组合物。本公开内容还提供了用于预防或治疗炎性皮肤病的方法，其包括向对象的皮肤施用有效量的用于皮肤外用的药物组合物的步骤。有益效果本公开内容的皮肤穿透肽可有效地将蛋白递送到表皮细胞、真皮细胞和皮肤组织中。其能够比现有TAT肽或皮肤穿透肽更有效地递送蛋白质，并且还能够有效地用于递送生物活性物质，例如蛋白质、遗传物质、化合物等，它们通过皮肤递送并且用于治疗目的。根据本公开内容的融合产物可被有效地递送到表皮细胞、真皮细胞和皮肤组织中，并且不仅能够抑制引起皮肤病的多种炎性细胞因子信号转导，而且能够同时抑制T细胞的激活和增殖。因此，其在治疗、预防或改善炎性皮肤病或病症方面表现出了非常优异的效果。此外，本公开内容的肽融合产物表现出了非常优异的稳定性和皮肤渗透性，因此可非常有利地应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有序列(X1)n‑X2‑(半胱氨酸)‑(X3)m的皮肤穿透肽，其中n是3至14的整数，m是4至14的整数，X1和X3各自独立地是精氨酸、赖氨酸或组氨酸，以及X2是丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.10 KR 10-2015-01282751.具有序列(X1)n-X2-(半胱氨酸)-(X3)m的皮肤穿透肽，其中n是3至14的整数，m是4至14的整数，X1和X3各自独立地是精氨酸、赖氨酸或组氨酸，以及X2是丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸。2.根据权利要求1所述的皮肤穿透肽，其中所述皮肤穿透肽包含9至14个氨基酸。3.根据权利要求2所述的皮肤穿透肽，其中X1和X3各自独立地是精氨酸或赖氨酸。4.根据权利要求2所述的皮肤穿透肽，其中X2是丙氨酸、色氨酸或精氨酸。5.根据权利要求3所述的皮肤穿透肽，其包含SEQIDNO1、SEQIDNO5、SEQIDNO8或SEQIDNO12的氨基酸序列。6.融合产物，其中根据权利要求1至5中任一项所述的皮肤穿透肽与生物活性物质融合。7.根据权利要求6所述的融合产物，其中所述生物活性物质是选自蛋白质、遗传物质、脂肪、碳水化合物和化学化合物的一种或多种。8.根据权利要求6所述的融合产物，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔济民，金沅柱，具滋贤，金智允，
申请(专利权)人：汉阳大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：韩国,KR