一种利用四膜虫监测水质毒性的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用四膜虫监测水质毒性的方法，涉及水质检测技术领域，包括以下步骤：S1、将四膜虫接入到全营养培养基中培育；S2、将接有四膜虫的全营养培养基离心，取沉淀物加入无机盐培养基，离心，取沉淀加入无机盐培养基，得虫液；S3、采用无机盐培养基将受试样品稀释成不同浓度作为干预液；S4、将虫液分别加入到干预液和空白无机盐培养基中，观察计数；S5、根据S4的结果判定LC50值，采用无机盐培养基稀释受试样品配制1％～100％LC50浓度的干预液，将虫液分别加入到干预液和空白无机盐培养基中，观察计数，进行显著性差异比较，判断受试样品生物毒性。本发明专利技术方法简便，成本低廉，能够有效评价受试样品的生物毒性，可用于水质或化学物质的毒性监测。

A method for monitoring the toxicity of water quality by using four membrane insects

The invention discloses a method of using four membrane insects to monitor the water quality toxicity, which includes the following steps: S1, the four membrane worms are connected to the whole nutrient medium, and S2, the whole nutrient medium with four membrane worms is centrifuged, the sediment is added to the salt free medium, centrifuge, and precipitate is added without S3, using inorganic salt medium to dilute the sample into different concentration as intervention solution; S4, add the insect liquid to the intervention solution and the blank inorganic salt medium, observe and count, S5, determine the LC50 value according to the result of S4, and use the inorganic salt culture medium to dilute the sample to prepare 1% to 100%L. The intervention solution of C50 concentration was added to the intervention solution and the blank inorganic salt medium respectively. The significant difference was compared and the biotoxicity of the sample was judged. The method is simple, low cost, and can effectively evaluate the biological toxicity of the sample, and can be used for monitoring the toxicity of water quality or chemical substances.

【技术实现步骤摘要】
一种利用四膜虫监测水质毒性的方法
本专利技术涉及水质监测
，尤其涉及一种利用四膜虫监测水质毒性的方法。
技术介绍
现今社会的水污染问题越来越严重，影响到了人类生活与生态平衡，饮用水安全也成为人们越来越关注的问题之一，因此，很多学者致力于水质监测方法的研究。目前，现存的方法包括理化分析法和生物监测法。生物监测法通过分析水生生物的行为及生理特征变化判断水质状况，利用生物的富集作用可以检测出水体中微量的毒性元素，比传统的理化分析法更加快速灵敏、实时有效。四膜虫是一种单细胞真核生物，分布在全球的淡水水域中，属于原生动物亚界中的纤毛门寡毛纲膜口目膜口科四膜虫属。四膜虫具有个体小、繁殖周期短、普遍易得、在食物链中处于重要的位置等优点，其作为一种先进的分子遗传学工具，将其用来评价水质或化学物质的毒性具有广泛的应用前景。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种利用四膜虫监测水质毒性的方法。本专利技术提出的一种利用四膜虫监测水质毒性的方法，包括以下步骤：S1、将四膜虫接入到全营养培养基中培育至稳定期；S2、将接有四膜虫的全营养培养基离心，弃去上清液，取沉淀物加入无机盐培养基，清洗，离心，取沉淀加入无机盐培养基，得虫液；S3、采用无机盐培养基将受试样品稀释成不同浓度作为干预液作用于四膜虫；S4、将虫液分别加入到不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数；S5、根据S4的结果判定72h半数致死浓度LC50值，采用无机盐培养基稀释受试样品配制1％～100％LC50浓度的干预液，将虫液分别加入到本步骤配制的不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中进行暴露试验，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数，进行显著性差异比较，判断受试样品生物毒性。采用上述技术方案产生的有益效果在于：本专利技术选用四膜虫进行急性毒性试验和慢性毒性试验来快速监测水质，方法简便，成本低廉，能够有效评价受试样品的生物毒性，可用于水质或化学物质的毒性监测。优选地，所述S1中，以总体积4％的比例将对数生长期的嗜热四膜虫悬液接入到全营养培养基中进行培育，全营养培养基中四膜虫为10000～15000个/mL，在生化培养箱28℃培育48h后四膜虫进入稳定期。优选地，所述全营养培养基的配制方法如下：取20％蛋白胨溶液10mL、1％酵母浸出液溶液10mL，加入90mL蒸馏水，搅拌均匀，取20mL分装于250mL锥形瓶中，于121℃灭菌20min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。采用该全营养培养基用于四膜虫的培育，能够满足四膜虫的生长所需的养料，促使四膜虫进行稳定期。优选地，所述S2中，无机盐培养基的制备方法如下：取1％硫酸铵溶液10mL、1％硫酸钠溶液10mL、1.5％磷酸氢钠溶液10mL、0.5％磷酸氢钠溶液10mL、0.2％硫酸镁溶液10mL，加入90mL蒸馏水，搅拌均匀，分装于50mL锥形瓶中，121℃灭菌20min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。采用该无机盐培养基筛选四膜虫。优选地，所述S2中，虫液中四膜虫的数量为10000～15000个/mL。优选地，所述对照组四膜虫数量降低率≤20％。可以排除可能由于无机盐培养基所引起的试验误差，从而能够更好的反应比较试验组中不同浓度的受试样品对生物的毒性危害监测结果。优选地，所述S5中，暴露试验条件为在恒温振荡器上于28℃振荡培养，培养转速为100r/min，暴露时间为72h。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例本专利技术提出的一种利用四膜虫监测水质毒性的方法，包括以下步骤：S1、以总体积4％的比例将对数生长期的嗜热四膜虫悬液接入到全营养培养基中进行培育，全营养培养基中四膜虫为10000～15000个/mL，在生化培养箱28℃培育48h后四膜虫进入稳定期；全营养培养基的配制方法如下：取20％蛋白胨溶液10mL、1％酵母浸出液溶液10mL，加入90mL蒸馏水，搅拌均匀，取20mL分装于250mL锥形瓶中，于121℃灭菌20min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存；S2、将接有四膜虫的全营养培养基离心，弃去上清液，取沉淀物加入无机盐培养基，清洗，离心，取沉淀加入无机盐培养基，得虫液，虫液中四膜虫的数量为10000～15000个/mL；无机盐培养基的制备方法如下：取1％硫酸铵溶液10mL、1％硫酸钠溶液10mL、1.5％磷酸氢钠溶液10mL、0.5％磷酸氢钠溶液10mL、0.2％硫酸镁溶液10mL，加入90mL蒸馏水，搅拌均匀，分装于50mL锥形瓶中，121℃灭菌20min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存；S3、采用无机盐培养基将受试样品稀释成不同浓度作为干预液作用于四膜虫；S4、将虫液分别加入到不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数；S5、根据S4的结果判定72h半数致死浓度LC50值，采用无机盐培养基稀释受试样品配制1％～100％LC50浓度的干预液，将虫液分别加入到本步骤配制的不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中进行暴露试验，暴露试验条件为在恒温振荡器上于28℃振荡培养，培养转速为100r/min，暴露时间为72h，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数，进行显著性差异比较，对照组四膜虫数量降低率应≤20％，判断受试样品生物毒性。此外，整个试验期间应测定所有试验容器中的溶解氧、pH值和水温，使其在合理误差范围呢，还需要测定对照组和最高浓度组中一个试验容器的总硬度和盐度；所有试验容器中溶解氧浓度应在空气饱和度的60％～100％之间。本专利技术的检测方法用于水质或化学物质的毒性监测，其中水质分析指标包括：重金属(如Cu、Pb、Zn、Hg、Cd、Ni)，主要阴、阳离子(如Ca、Mg、Na、K、Cl、SO4)，农药，总有机碳和悬浮物。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用四膜虫监测水质毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将四膜虫接入到全营养培养基中培育至稳定期；S2、将接有四膜虫的全营养培养基离心，弃去上清液，取沉淀物加入无机盐培养基，清洗，离心，取沉淀加入无机盐培养基，得虫液；S3、采用无机盐培养基将受试样品稀释成不同浓度作为干预液作用于四膜虫；S4、将虫液分别加入到不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数；S5、根据S4的结果判定72h半数致死浓度LC50值，采用无机盐培养基稀释受试样品配制1％～100％LC50浓度的干预液，将虫液分别加入到本步骤配制的不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中进行暴露试验，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数，进行显著性差异比较，判断受试样品生物毒性。

【技术特征摘要】
1.一种利用四膜虫监测水质毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将四膜虫接入到全营养培养基中培育至稳定期；S2、将接有四膜虫的全营养培养基离心，弃去上清液，取沉淀物加入无机盐培养基，清洗，离心，取沉淀加入无机盐培养基，得虫液；S3、采用无机盐培养基将受试样品稀释成不同浓度作为干预液作用于四膜虫；S4、将虫液分别加入到不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数；S5、根据S4的结果判定72h半数致死浓度LC50值，采用无机盐培养基稀释受试样品配制1％～100％LC50浓度的干预液，将虫液分别加入到本步骤配制的不同浓度的干预液和空白无机盐培养基中进行暴露试验，干预液作为试验组，空白无机盐培养基作为对照组，采用显微镜观察对四膜虫进行计数，进行显著性差异比较，判断受试样品生物毒性。2.根据权利要求1所述的利用四膜虫监测水质毒性的方法，其特征在于，所述S1中，以总体积4％的比例将对数生长期的嗜热四膜虫悬液接入到全营养培养基中进行培育，全营养培养基中四膜虫为10000～15000个/mL，在生化培养箱28℃培育48h后四膜虫进入稳定期。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芸，许宜平，侯丽萍，
申请(专利权)人：环境保护部华南环境科学研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44