mtDNA检测试剂在制备供肾损伤程度或移植肾功能的诊断试剂盒中的用途及诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了mtDNA检测试剂在制备供肾损伤程度或移植肾功能的诊断试剂盒中的用途及诊断试剂盒，涉及医疗卫生技术领域。其通过将血浆中线粒体DNA的检测试剂用在制备供肾损伤程度的诊断试剂盒及移植肾功能的诊断试剂盒中，能够使肾损伤程度和移植肾功能的诊断过程更加简便易行，无需切取肾组织进行检测，是一种无创伤的药物检测方法，检测成本显著降低。本发明专利技术中提供的一种供肾损伤程度的诊断试剂盒及移植肾功能的诊断试剂盒，均包括血浆中线粒体DNA的检测试剂，诊断效果可靠性强，且诊断成本低。

Application and diagnostic kit of mtDNA test reagent in preparation of diagnostic kit for donor kidney injury or graft function

The invention discloses the use and diagnostic kit of the mtDNA detection reagent in preparing the diagnostic kit for the degree of kidney damage or the function of kidney transplantation, and relates to the medical and health technology field. By using the detection reagents of the mitochondrial DNA in the plasma to prepare the diagnostic kit for the degree of renal injury and the diagnostic kit of renal transplantation, it can make the diagnosis of renal injury and renal function more convenient and easy, without the need for the detection of renal tissue, it is a noninvasive method for the detection of drugs. The cost of measurement is significantly reduced. A diagnostic kit for the degree of renal damage and a diagnostic kit for renal transplantation are provided in the present invention, including the detection reagents of mitochondrial DNA in plasma, and the diagnostic effect is reliable and the cost of diagnosis is low.

【技术实现步骤摘要】
mtDNA检测试剂在制备供肾损伤程度或移植肾功能的诊断试剂盒中的用途及诊断试剂盒
本专利技术涉及一种医疗卫生
，且特别涉及mtDNA检测试剂在制备供肾损伤程度或移植肾功能的诊断试剂盒中的用途及诊断试剂盒。
技术介绍
肾移植是一种治疗终末期肾脏病患者最有效的办法，供肾质量的好坏不仅在肾脏分配中起着重要的作用，而且在预测患者术后移植肾功能恢复的快慢及受者长期的肌酐水平中起着重要的作用。目前在供肾质量的评估中，供肾零点穿刺是判断供肾质量好坏的常用方法，零点穿刺即在获取完供肾后，切取部分肾脏组织行冰冻病理组织学检查，经病理学专家阅读病理切片后，根据损伤的肾小球及肾小管程度判断供肾质量的等级。但是，现有的检测方法存在着以下几点不足：(1)有创性:切取部分的供肾组织会损伤肾脏，并增加肾移植手术的风险；(2)费用高：行移植肾穿刺活检，需要行病理实验；(3)等待时间延长：在行供体穿刺活检的行病理检查的过程中，增加了手术的等待时间；(4)技术要求高：需要专业的病理学专家阅片。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备供肾损伤程度的诊断试剂中的用途，旨在克服现有肾损伤程度检测方法的不足，降低损伤和检测成本。本专利技术的另一目的在于提供血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备移植肾功能的诊断试剂盒中的用途，旨在降低检测移植肾功能的损伤和检测成本。本专利技术的第三目的在于提供一种供肾损伤程度的诊断试剂盒，其包括血浆中线粒体DNA的检测试剂，检测方法简便易行，适于广泛推广应用。本专利技术的第四目的在于提供一种移植肾功能的诊断试剂盒，其同样检测方法易行，能够降低检测过程中的损伤及检测成本。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出了血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备供肾损伤程度的诊断试剂盒中的用途。本专利技术还提出了血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备移植肾功能的诊断试剂盒中的用途。本专利技术还提出一种供肾损伤程度的诊断试剂盒，包括血浆中线粒体DNA的检测试剂。本专利技术还提出一种移植肾功能的诊断试剂盒，包括血浆中线粒体DNA的检测试剂。本专利技术实施例提供的mtDNA检测试剂在制备供肾损伤程度或移植肾功能的诊断试剂盒中的用途及诊断试剂盒有益效果是：其通过将血浆中线粒体DNA的检测试剂用在制备供肾损伤程度的诊断试剂盒及移植肾功能的诊断试剂盒中，能够使肾损伤程度和移植肾功能的诊断过程更加简便易行，无需切取肾组织进行检测，是一种无创伤的药物检测方法，检测成本显著降低。本专利技术中提供的一种供肾损伤程度的诊断试剂盒及移植肾功能的诊断试剂盒，均包括血浆中线粒体DNA的检测试剂，试剂盒的制备成本低，诊断效果可靠性强。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为血浆线粒体DNA含量对肾脏损伤程度预测作用的测试结果图；图2为供体血浆线粒体DNA含量对移植肾功能的恢复情况预测作用的测试结果图；图3为供体血浆线粒体DNA含量预测术后受者恢复情况的可靠性研究结果图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例提供的mtDNA检测试剂在制备供肾损伤程度或移植肾功能的诊断试剂盒中的用途及诊断试剂盒进行具体说明。本专利技术实施例提供了血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备供肾损伤程度的诊断试剂盒中的用途。其通过将血浆中线粒体DNA的检测试剂用在供肾损伤程度的诊断试剂盒中，使供肾损伤程度的检测过程克服了现有技术中的诸多缺点。具体地，通过血浆中线粒体DNA的检测试剂检测血浆线粒体DNA的含量水平，评估供肾质量的好坏，成功的解决了通过病理穿刺所带来的弊端。具有以下几点优点：(1)此检测技术无创性，只需留取少量供体血液标本，进行定量的检测，即可得到结果，不损伤供肾组织；(2)费用低，采用定量PCR技术，可以减少医疗费用；(3)减少等待时间：在明确供体是否捐献后，可以早起对供肾进行评估，并且可以多次留取样本，多次进行评估供肾质量。(4)技术要求及人力成本低：通过检测血浆线粒体DNA的含量，得到一个具体的数值，通过和检测标准进行对比，得出供肾质量的结果；(5)对于移植受者长期的移植肾功能具有预测作用。由于专利技术人发现，血浆中线粒体DNA的检测试剂检测血浆线粒体DNA的含量水平，能够对移植受者长期的移植肾功能具有预测作用。因此，本专利技术实施例还提供了血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备移植肾功能的诊断试剂盒中的用途，该药物用于移植肾功能的诊断过程中，同样具备上述的几个优点。具体地，血浆为获取肾脏时留取的外周血，获取的血液标本在2小时内进行离心得到血浆标本，取100ul血浆标本进行检测线粒体DNA的含量水平，检测方法目前已相对成熟，文献有相关报道。参考文献1：WangC,HannHW,HannRS,etal.CirculatingmitochondrialDNAcontentassociatedwiththeriskoflivercirrhosis:Anestedcase-controlstudy[J].Digestivediseasesandsciences,2015,60(6):1707-1715。参考文献2：LiL,HannHW,WanS,etal.Cell-freecirculatingmitochondrialDNAcontentandriskofhepatocellularcarcinomainpatientswithchronichbvinfection[J].Scientificreports,2016,6。具体地，检测试剂包括第一引物对和第二引物对，第一引物对的碱基序列如SEQNO.1-2所示，第二引物对的碱基序列如SEQNO.3-4所示。第一引物对的序列如下：正向引物SEQNO.1：5'-CCCTAAAACCCGCCACATCT-3'；反向引物SEQNO.2：5'-GAGCGATGGTGAGAGCTAAGGT-3'；第二引物对的序列如下：正向引物SEQNO.3：5'-CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC-3'；反向引物SEQNO.4：5'-CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA-3'。进一步地，检测试剂还包括核酸提取试剂盒和qPCR试剂，核酸提取试剂盒优选为QIAamp试剂盒，用于将mtDNA提取出来，qPCR试剂提供反应体系。具体地，qPCR试剂包括PCR反应缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg2+中的至少一种。以上为几种常用的qPCR试剂，可以根据需要进行选择。本专利技术实施例还提供了一种供肾损伤程度的诊断试剂盒，包括血浆中线粒体DNA的检测试剂。可以将血浆中线粒体DNA的检测试剂制成试剂盒用于供肾损伤程度诊断过程中。具体地，血浆中线粒体DNA的检测试剂包括检测引物、核酸提取试剂盒和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备供肾损伤程度的诊断试剂盒中的用途。

【技术特征摘要】
1.血浆中线粒体DNA的检测试剂在制备供肾损伤程度的诊断试剂盒中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述血浆为获取肾脏时留取的外周血。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对的碱基序列如SEQNO.1-2所示，所述第二引物对的碱基序列如SEQNO.3-4所示。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述检测试剂还包括核酸提取试剂盒和qPCR试剂。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述qPCR试剂包括PCR反应缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg2+中的至少一种。6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙启全，韩飞，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院中山大学肝脏病医院，
类型：发明
国别省市：广东,44