嗅觉介导素-4用作非小细胞肺癌标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了嗅觉介导素‑4作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。本发明专利技术研究发现，非小细胞肺癌患者嗅觉介导素‑4基因或蛋白的表达水平与健康人或者癌旁组织相比，表达水平显著升高，因此可作为非小细胞肺癌诊断标志物，用于制备非小细胞肺癌诊断制剂和试剂盒产品。本发明专利技术提供了一种新的特异性的非小细胞肺癌生物标志物嗅觉介导素‑4，并给出了具有参考价值的嗅觉介导素‑4的检测方法。该非小细胞肺癌生物标志物嗅觉介导素‑4用于非小细胞肺癌的筛查/诊断效果好，准确性高，具有很好的应用前景，值得大范围推广。

【技术实现步骤摘要】
嗅觉介导素-4用作非小细胞肺癌标志物的应用
本专利技术涉及非小细胞肺癌的筛查/检测
，更具体地，涉及一种嗅觉介导素-4用作非小细胞肺癌标志物的应用。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。而由于我国空气污染严重，导致肺癌发病持续升高。目前肺癌仍是最普遍和最致命的癌症，2012年约新增180万患者并导致159万人死亡。其中中国约占此类病例的1/3以上。如不及时采取有效的控制措施，预计到2025年，患者人数将达到100万，成为世界第一肺癌大国。肺癌可以分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中后者占大约80%。非小细胞肺癌又可以分为三类：（i）鳞状细胞癌，其在鳞状细胞中开始，所述鳞状细胞是看起来像鱼鳞的薄的、扁平细胞。鳞状细胞癌也称为表皮样癌；（ii）大细胞癌，其在几个类型的大肺细胞中开始；（iii）腺癌，其在内衬肺的肺泡并且制备物质例如粘液的细胞中开始。其他较不常见类型的NSCLC包括多形性癌、类癌瘤和未分类的癌。导致肺癌发生的因素有很多，吸烟、遗传因素，放射性氡气、石棉等都是风险因素。肺癌的死亡率高，五年生存率不足15%。一个重要的原因是早期诊断率低，不足2%，80%以上患者就诊时已在晚期。目前的诊断方法有X-射线检查、CT扫描、支气管镜检、痰细胞学检查以及肺癌生物标志物检测等。这些方法都存在各自的缺陷，如影像学技术难以发现瘤体较小的肿瘤，早期普查的漏检率较高。已有的肺癌标志物是广谱的，无法确诊肺癌，因此寻找特异性的肺癌生物标志物具有重要的意义。到目前为止，已有不下10种的基因异常表达被确定与肺癌的发生发展有关，但已确定的肺癌相关基因在肺癌中的异常表达率并不高，肺癌的发病机制至今仍未阐明，肺癌的早期诊断率仍有待提高。此外，在我国传统的肺癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因治疗方法仍没有明显提高肺癌患者的生存率，因而寻找新的肺癌相关基因，尤其是肺癌高表达基因对于探讨肺癌的发病机制和早期诊断具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性的非小细胞肺癌标志物。本专利技术的第一个目的是提供嗅觉介导素-4作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。本专利技术的第二个目的是提供嗅觉介导素-4蛋白片段在嗅觉介导素-4蛋白定量检测中的应用。本专利技术的第三个目的是提供嗅觉介导素-4蛋白在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用。本专利技术的第四个目的是提供嗅觉介导素-4蛋白在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂中的应用。本专利技术的第五个目的是提供嗅觉介导素-4蛋白片段在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用。本专利技术的第六个目的是提供嗅觉介导素-4蛋白抗体在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用。本专利技术的第七个目的是提供一种用于非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：嗅觉介导素-4（Olfactomedin-4），HGNC登录号为17190；EntrezGene登录号为10562；Ensembl登录号为ENSG00000102837；OMIM登录号为614061；UniProtKB登录号为Q6UX06，是一种新的分泌型糖蛋白，是嗅觉介导素家族的重要成员之一，主要表达于人类骨髓、胃、小肠、结肠、胰腺及前列腺等组织。对维护细胞多种生物学功能的稳定具有重要的作用，包括神经的发生、神经嵴形成和细胞间黏附、细胞周期的调节及细胞凋亡等。但截止目前，还没有嗅觉介导素-4与非小细胞肺癌的相关报道。本专利技术研究发现，非小细胞肺癌患者嗅觉介导素-4（Olfactomedin-4）基因或蛋白的表达水平与健康人或者癌旁组织相比，表达水平高，因此可用于非小细胞肺诊断。其中，嗅觉介导素-4基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，嗅觉介导素-4蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。因此，如下应用均应在本专利技术的保护范围之内：嗅觉介导素-4作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。嗅觉介导素-4蛋白片段在嗅觉介导素-4蛋白定量检测中的应用，所述嗅觉介导素-4蛋白片段的氨基酸序列如SEQIDNO.3～26任一所示。嗅觉介导素-4蛋白在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用。嗅觉介导素-4蛋白在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂中的应用。嗅觉介导素-4蛋白片段在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用，所述嗅觉介导素-4蛋白片段的氨基酸序列如SEQIDNO.3～26任一所示。嗅觉介导素-4蛋白抗体在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用。此外，一种用于非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒，所述试剂盒含有可以检测嗅觉介导素-4基因或蛋白质的表达水平的试剂，也属于本专利技术的保护范围。优选地，所述试剂包括SEQIDNO.3～26所示肽段中的一条或几条。优选地，所述试剂包括嗅觉介导素-4蛋白抗体。优选地，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：S1.获得个体的疑似癌症组织；S2.测定其中的嗅觉介导素-4的表达水平；S3.获得正常个体的同一组织或同一个体的正常组织；S4.测定其中的嗅觉介导素-4的表达水平作为对照表达水平；S5.将S2中获得的嗅觉介导素-4的表达水平与S4中获得的嗅觉介导素-4的对照表达水平进行比较，当S2中获得的嗅觉介导素-4的表达水平与S4中获得的嗅觉介导素-4的对照表达水平相比提高时，确定所述个体患有非小细胞肺癌。或者，所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：S1.获得个体的血清；S2.测定其中的嗅觉介导素-4的表达水平；S3.获得正常个体的血清；S4.测定其中的嗅觉介导素-4的表达水平作为对照表达水平；S5.将S2中获得的嗅觉介导素-4的表达水平与S4中获得的嗅觉介导素-4的对照表达水平进行比较，当S2中获得的嗅觉介导素-4的表达水平与S4中获得的嗅觉介导素-4的对照表达水平相比提高时，确定所述个体患有非小细胞肺癌。另外，本专利技术给出了具有参考价值的嗅觉介导素-4的检测方法。采用肽段如SEQIDNO.3～26任一所示嗅觉介导素-4蛋白的片段（表1），所述片段应当与样品中的蛋白或其经过酶解（如胰蛋白酶酶解）后得到的片段的序列完全一致。所述片段宜经过重同位素（例如13C，14N）标记，以便将其与未经标记的样品相区分，从而进行嗅觉介导素-4蛋白定量检测。此外，所述片段的最佳Transition应有较好的信噪比。将一定量的经过重同位素标记的片段（表1所示）加入经酶（如胰蛋白酶）消化的患者血清样品中，用定量蛋白质组学的技术检测患者血清中所述片段的水平，从而确定血清中嗅觉介导素-4水平；将所测得的水平与根据正常人的水平确定的临界值比较，如果所测得的水平高于临界值，则表示胃癌几率大。表1：所述临界值可以由本领域技术人员根据常规手段来确定。例如，本领域技术人员可以根据测得的正常人（组）的血清蛋白质含量数据来绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线），随后确定临界值（cut-off）。将定量蛋白质组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.嗅觉介导素‑4作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。

【技术特征摘要】
1.嗅觉介导素-4作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。2.嗅觉介导素-4蛋白片段在嗅觉介导素-4蛋白定量检测中的应用，其特征在于，所述嗅觉介导素-4蛋白片段的氨基酸序列如SEQIDNO.3～26任一所示。3.嗅觉介导素-4蛋白在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用。4.嗅觉介导素-4蛋白在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂中的应用。5.嗅觉介导素-4蛋白片段在制备非小细胞肺癌筛查/诊断的试剂盒中的应用，其特征在于，所述嗅觉介导素...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丹军，程佰选，陈凌枭，
申请(专利权)人：东莞理工学院，
类型：发明
国别省市：广东,44