一种金线莲苷的提取方法技术

本发明专利技术涉及植物有效成分提取领域，具体涉及一种金线莲苷的提取方法。本发明专利技术采用超声波辅助法进行提取，超高效液相色谱方法测定含量，并利用响应面法对提取工艺进行优化。本发明专利技术得出最佳提取工艺条件为：温度为35.00℃，甲醇浓度为16.33%，料液比为1:10.83，在此条件下，金线莲苷提取率达到33%DW。

A method for extraction of oin

The invention relates to the field of extracting effective components from plants, and in particular relates to an extraction method of oenoside. The invention adopts ultrasonic assisted method to extract, and the content is determined by ultra high performance liquid chromatography, and the extraction process is optimized by response surface method. The optimum extraction conditions are as follows: the temperature is 35, the concentration of methanol is 16.33%, and the ratio of material to liquid is 1:10.83. Under this condition, the extraction rate of oenoside is up to 33%DW.

【技术实现步骤摘要】
一种金线莲苷的提取方法
本专利技术涉及植物有效成分提取领域，具体涉及一种金线莲苷的提取方法。
技术介绍
金线莲为兰科植物花叶开唇兰Anoectochilusroxburghii(Wall)Lindl，味甘，性寒，归肺、肝、肾、膀胱经，具有清热凉血，祛风利湿，解毒的功效，主治肺热咳嗽，咯血，尿血，小儿急惊风，黄疸，水肿，淋证，消渴，风湿痹痛，跌打损伤，毒蛇咬伤，现代用于肝炎，肾炎，膀胱炎，糖尿病，支气管炎，风湿性关节炎等病。金线莲主要分布在我国的福建、台湾、云南等省，在印度、日本、尼泊尔和斯里兰卡等国也有分布。金线莲其主要成分为糖苷、生物碱、甾体、黄酮、牛磺酸、氨基酸、微量元素等。具相关文献表明金线莲能直接作用于肝细胞膜，保护肝细胞膜的完整，防止有害物质破坏肝细胞膜，并防止肝细胞之病变性坏死。而起到这种作用的物质主要为金线莲苷，同时金线莲苷也为花叶开唇兰的特有化合物。张超等(《HPLC-ELSD法测定三种植物基原金线莲的金线莲苷含量》)研究33批次金线莲的金线莲苷含量在6.37％～22.66％之间，平均含量为15.00％。张锦文等(《高效液相色谱法测定金线莲中金线莲苷的含量》中公开了提取获得的野生金线莲中金线莲苷含量为16.57％，目前来看关于金线莲苷的具体提取工艺的报道，提取率都比较低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种金线莲苷的提取方法。本专利技术采用超声波辅助法进行提取，超高效液相色谱方法测定含量，并利用响应面法对提取工艺进行优化。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：所述金线莲苷的提取方法，具体为：(1)将金线莲冻干粉末0.5g按1:20料液比用2mL甲醇溶解，在功率为420W，温度为30℃条件下超声波辅助提取45min，离心(10000rpm/min,10min)后吸取上清液，重复2次，合并上清液，用甲醇定容至2ml。过0.22μm滤膜，放入棕色色谱瓶中待用。(2)金线莲植株冻干粉末分别对提取液甲醇浓度、料液比、超声功率、时间、温度和提取次数等单因素进行优化，各因素水平设计见表1。表1单因素试验设计(3)通过响应面法设计试验最终确定金线莲苷的提取工艺参数。本专利技术的显著优点在于：本专利技术采用超声波辅助法进行提取，超高效液相色谱方法测定含量，并利用响应面法对提取工艺进行优化。结果表明，甲醇浓度为20％，超声波功率360W，料液比为1:15，在40℃下超声20min并提取2次，是单因素试验的最佳结果。为研究各工艺参数之间的交互作用对金线莲苷得率的影响，选用中心复合模型，采用3因素3水平共17个试验点(5个中心点用以估计试验误差)的响应面分析试验，将所得的数据用Design-Expert8.0软件进行分析，以超声温度(A)、甲醇浓度(B)和料液比(C)为自变量，以金线莲苷的得率(％)为响应值，经回归拟合得到二次回归方程Y＝30.31-3.11A-1.69B-2.26C-0.082AB+1.95AC+0.94BC-7.64A2-3.80B2-0.038C2。方程中各项系数绝对值的大小直接反映了各因素对指标值的影响程度，系数的正负反映了影响的方向。由此得出最佳提取工艺条件为：温度为35.00℃，甲醇浓度为16.33％，料液比为1:10.83，在此条件下，金线莲苷提取率达到33％DW。附图说明图1为料液比对金线莲苷提取得率的影响(图中不同字母表示差异显著(P<0.05))；图2为超声温度对金线莲苷提取得率的影响(图中不同字母表示差异显著(P<0.05))；图3为超声时间对金线莲苷提取得率的影响(图中不同字母表示差异显著(P<0.05))；图4为超声功率对金线莲苷提取得率的影响(图中不同字母表示差异显著(P<0.05))；图5为甲醇浓度对金线莲苷提取得率的影响(图中不同字母表示差异显著(P<0.05))；图6为超声温度和甲醇浓度交互影响的响应面图；图7为超声温度和甲醇浓度交互影响的等高线图；图8为料液比和超声温度交互影响的响应面图；图9为料液比和超声温度交互影响的等高线图；图10为料液比和甲醇浓度交互影响的响应面图；图11为料液比和甲醇浓度交互影响的等高线图。具体实施方式为进一步公开而不是限制本专利技术，以下结合实例对本专利技术作进一步的详细说明。实施例11材料和方法1.1材料金线莲材料(品种为贡享2号)由福建贡享生态农业科技有限公司提供，经福建农林大学园艺学院鉴定，鲜样于2016年11月份采摘，经冷冻干燥机干燥后，用粉碎机粉碎，过40目筛得金线莲药材粉末，保存于-40℃冰箱内备用。金线莲苷对照品98％，购自美国Amresco公司。1.2试剂及仪器乙腈和甲醇均为色谱级溶剂、超纯水、WatersAcquity超高效液相色谱(色谱柱为C18，17μm，2.1*100mm)、FW200型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)、低温离心机(Eppendorf5430R，德国)、KQ-600DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、AKWL-IV-50艾柯超纯水系统(成都康氏康宁科技发展有限公司)、BS214D电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)、LGJ-S24型冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂有限公司)。1.3金线莲苷的提取制备将金线莲冻干粉末0.5g按1:20料液比用2mL甲醇溶解，在功率为420W，温度为30℃条件下超声波辅助提取45min，离心(10000rpm/min,10min)后吸取上清液，重复2次，合并上清液，用甲醇定容至2ml。过0.22μm滤膜，放入棕色色谱瓶中待用。1.4测定方法1.4.1色谱条件的选择测定金线莲苷的色谱条件：采用超高效液相色谱进行优化，以C18(17μm，2.1*100mm)为色谱柱；流动相为水：乙腈：甲醇为90:5:5；流速为0.2mL/min；检测波长为215nm；柱温为30℃；进样为5μL。1.4.2标准曲线及线性范围配制不同含量的标准溶液，按选定的色谱条件进样，以标样浓度为横坐标，以对应的相对峰面积为纵坐标，得出金线莲苷标样的线性回归方程为Y＝84911X+192050；相关系数为0.995；线性范围在5μg～500μg，能满足金线莲苷定量分析的需要。1.5提取工艺单因素优化试验金线莲植株冻干粉末分别对提取液甲醇浓度、料液比、超声功率、时间、温度和提取次数等单因素进行优化，各因素水平设计见表1。表1单因素试验设计Table1Designofsinglefactorexperiment1.6响应面法设计试验在单因素试验的基础上，利用响应面法确定影响水平，根据Box-Behnken的中心组合试验设计，固定浸提溶剂，设计3因素3水平的响应面分析试验(表2)。试验数据使用Design-Expert8.0软件进行分析[3]，得到响应面分析图和方差分析表，确定金线莲苷提取的最佳条件。采用响应面试验确定的优化条件对金线莲金线莲苷提取工艺进行验证。表2响应面试验因素水平Table2FactorsinRSMexperiment1.7数据处理采用Excel2007、Design-Expert8.0和Origin9.0软件进行数据分析及作图，并用DPS15.10进行单因素方差分析，Tukey检验法进行多重比较，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金线莲苷的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：将金线莲冻干粉末用甲醇溶解，在功率为240~540 W，温度为10~60℃条件下超声波辅助提取10~50min，以10000rpm/min离心10min，后吸取上清液，重复1~4次，合并上清液，用甲醇定容至2ml；过0.22µm滤膜；采用超高效液相色谱进行分析，以C18为色谱柱；流动相为水：乙腈：甲醇为90:5:5；流速为0.2 mL/min；检测波长为215nm；柱温为30℃；进样为5µL。

【技术特征摘要】
1.一种金线莲苷的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：将金线莲冻干粉末用甲醇溶解，在功率为240~540W，温度为10~60℃条件下超声波辅助提取10~50min，以10000rpm/min离心10min，后吸取上清液，重复1~4次，合并上清液，用甲醇定容至2ml；过0.22µm滤膜；采用超高效液相色谱进行分析，以C18为色谱柱；流动相为水：乙腈：甲醇为90:5:5；流速为0.2mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨碧云，曾黎辉，张跃华，张梦媛，马星，
申请(专利权)人：福建农林大学，福建贡享生态农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35