一种以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法及在制备抗肿瘤药物中的应用技术

本发明专利技术涉及一种以异型南五味子为原料制备五内酯E(即血筒素)的方法，包括如下步骤：(1)取异型南五味子干燥的藤茎为原料，粉碎后，用乙醇水溶液回流提取，去除溶剂，得乙醇提取物；(2)采用液液萃取法用氯仿对所述乙醇提取物进行提取，去除溶剂，得氯仿提取物；(3)将所述氯仿提取物上样于硅胶柱，采用乙酸乙酯‑乙醚混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，去除溶剂，即得。本发明专利技术所述方法制备得到的五内酯E具有优异的抗癌活性，可用于制备抗肿瘤药物。

Preparation of five lactone E from Schisandra chinensis and its application in preparation of antineoplastic agents

The invention relates to a method for preparing five lactone E (blood canister) using heterotypic Schisandra chinensis as raw material. The following steps are as follows: (1) taking the dried rattan stem of ISO Schisandra as raw material, after comminution, reflux extraction with ethanol water solution, removal of solvent and ethanol extract; (2) using liquid liquid extraction method to extract the ethanol with chloroform. Extract the extract, remove the solvent, get the chloroform extract; (3) the chloroform extract is extracted from the silica gel column and eluted with ethyl acetate ether mixture solvent, and the eluate is collected and the solvent is removed. The five lactone E prepared by the method has excellent anticancer activity and can be used for preparing antitumor drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法及在制备抗肿瘤药物中的应用
本专利技术涉及天然产物化学领域，具体涉及一种五内酯E的制备方法及在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
异型南五味子Kadsuraheteroclita(Roxb)Craib，土家族药称“血筒”，隶属五味子科Schizandraceae南五味子属KadsuraJuss.主产我国西南部至南部。民间以藤茎入药有很长的历史。其性味甘，微辛，温。具有补血活血、祛风除湿、行气止痛的功效。常用于风湿痹痛、胃脘痛、经痛、骨痛、风湿性关节炎、腰肌劳损、感冒、产后风瘫等症。在云南，异型南五味子是传统中药“鸡血藤”的本草正品之一，主要用于治疗妇科疾病；在广东，称为“海风藤”，用于治疗各种风湿病；在广西，又名“地血香”，治疗痛症；在湖南民间俗称为“血筒”，有用于治疗病毒性肝炎。2005版中国药典收录为“黑老虎根”，为中华跌打丸的主要成分之一，用于治疗跌打损伤。众所周知，隶属五味子科Schizandraceae五味子属Schisandra.的五味子Schisandra.chinensis为著名中药，以果实入药。20世纪70年代，我国临床研究中发现五味子能明显降低肝炎患者血清谷丙转氨酶(SGPT)水平，引起了广泛研究的热潮，并由此开发出了治疗肝炎的药物联苯双酯。随着研究的不断深入，南五味子属的植物逐渐引起植物学家和化学家的兴趣，具有极强的开发利用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法，采用该方法提取得到的五内酯E具有良好的抗癌活性，极具应用价值。所述五内酯E(血筒素)的结构信息具体为：英文名：SchisanlactoneE性状：Colorlesscrystals红外吸收数据:3041,2932,2871,1712cm-1紫外吸收数据：λmax:207nm熔点:120-122℃ESI-MS:m/z467.3[M-H]+分子式：C30H44O4具体而言，本专利技术提供的以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法包括如下步骤：(1)取异型南五味子干燥的藤茎为原料，粉碎后，用乙醇水溶液回流提取，去除溶剂，得乙醇提取物；(2)采用液液萃取法用氯仿对所述乙醇提取物进行萃取，去除溶剂，得氯仿提取物；(3)将所述氯仿提取物上样于硅胶柱，采用乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，去除溶剂，即得。本专利技术对各步骤所用试剂的浓度进行优化，以减少杂质含量并提高收率。其中：所述步骤(1)中，乙醇水溶液的体积百分比浓度优选为75～85％。为了进一步提高所得产物的纯度，避免引入过多的杂质，本专利技术优选所述步骤(2)中，先用乙醚对所述乙醇提取物进行萃取，分别得乙醚层和乙醇层；再用氯仿对所述乙醇层进行萃取，得氯仿提取物。本专利技术还优选所述步骤(3)中，先用乙酸乙酯的体积百分比为20～45％的乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，弃洗脱液；再用乙酸乙酯的体积百分比为50～75％的乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液。本专利技术所述方法还可以包括对产物进行纯化，如采用重结晶方法进行纯化，以获得高纯度、高收率的五内酯E化合物。本专利技术同时保护所述方法制备而成的五内酯E在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术还提供一种抗肿瘤组合物，包括所述方法制备而成的五内酯E。本发还提供一种抗肿瘤药物制剂，包括所述方法制备而成的五内酯E或所述抗肿瘤组合物，还包括药学上可接受的辅料。本专利技术以异型南五味子——土家族药“血筒”为原料，通过简单的提取方法即可获得具有良好抗肿瘤活性的提取物。且本专利技术首次从异型南五味子中提取得到五内酯E(血筒素)，为该化合物的提取、制备开拓了新的途径。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1本实施例提供了一种以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法，具体为：(1)取异型南五味子干燥的藤茎为原料，粉碎后，用体积百分比80％的乙醇水溶液回流提取三次，每次3小时，滤液合并，去除溶剂后，得乙醇提取物；(2)先用乙醚对所述乙醇提取物进行萃取，分别得乙醚层和乙醇层；再用氯仿对所述乙醇层进行萃取，得氯仿提取物；(3)将所述氯仿提取物上样于硅胶柱，先用乙酸乙酯的体积百分比为45％的乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，弃洗脱液；再用乙酸乙酯的体积百分比为65％的乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，去除溶剂，即得。本实施例制备得到的五内酯E(血筒素)为无色晶体，其结构为：其结构表征据包括：m.p.120-122℃；[α]:+98.3°(c0.30,MeOH)；UV(MeOH):λmax(logε)＝207(4.01)nm；IR(KBr):νmax＝3041,2932,2871,1712,1453,1384,1303,1223,1127,1030,892,850cm-1；EI-MS(70eV):468,453,435,417,369,329,313,233,159,119,111,95,83,55；ESI-MS(neg.mode):m/z＝935(100)[2M-H]-实验例：抗肿瘤活性研究癌症是一种危机生命导致全球死亡率很高的流行性疾病，由恶性肿瘤细胞的形成及入侵身体器官和部位引起。直到现在，美国食品和药物管理局)批准临床使用的抗癌药物超过了50种，其中1/3是天然药物。故急需高通量筛选具有抗癌作用的天然药物，以减小或避免癌症治疗带来的不良反应和毒副作用。如紫杉醇，用于治疗乳腺癌和卵巢癌，是一种具有生物活性的天然药物，从红豆杉树皮中提取分离得到，即是一个很好的例子。1、实验材料DMEM细胞培养基和磷酸盐缓冲液购于美国GE公司，小牛血清和盘尼西林购于美国赛默飞世尔科技有限公司，DMSO和MTT购于Sigma公司。考察的肿瘤细胞系来源于中南大学湘雅三医院，考察的细胞系包括：BGC-823(人胃癌细胞)，HCT-116(人结肠癌细胞)，HeLa(人宫颈癌细胞)，SMMC-7721(人肝癌细胞)。2、实验方法采用MTT法(甲基噻唑基二苯基-四唑基溴化)测定纯化天然产物对癌细胞增殖的影响。每个化合物组测定5个浓度梯度，最终浓度分别为5、7.5、10、15、20μm。MTT法实验原理：活细胞的线粒体内膜上存在琥珀酸脱氢酶，该酶可将黄绿色的噻唑蓝(简称为MTT，为一种接受氢离子的染料)降解成蓝紫色的甲臜，活细胞越多，生成的蓝紫色的甲臜就越多，而死细胞因其线粒体内膜上的琥珀酸脱氢酶活性消失，无此功能。使用二甲基亚砜(DMSO)溶解蓝紫色的甲臜，并用酶标仪于490nm波长处测定吸光度值，可以定量反应出活细胞数量。天然提取产物抑制细胞增殖的实验具体为：2.1实验分组：将不同的天然提取产物分为编号为4～12，化合物4～12均是从异型南五味子中提取得到，其中，化合物4为实施例2提供的五内酯E。每一种天然产物均设置5个浓度梯度，按终浓度为2.5、5、10、20、30uM加药，对照组不加药。以上每组均设3个复孔。所述天然产物4～12结构如下所示：其中，化合物8、9均是由提取物A进一步纯化得到，所述提取物A的制备方法与本专利技术实施例1提供的提取物相比，区别仅在于：步骤(3)采用乙酸乙酯的体积百分比为35％的乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱并收集洗脱液；化合物5、7、10、11均是由提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取异型南五味子干燥的藤茎为原料，粉碎后，用乙醇水溶液回流提取，去除溶剂，得乙醇提取物；(2)采用液液萃取法用氯仿对所述乙醇提取物进行萃取，去除溶剂，得氯仿提取物；(3)将所述氯仿提取物上样于硅胶柱，采用乙酸乙酯‑乙醚混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，去除溶剂，即得。

【技术特征摘要】
1.一种以异型南五味子为原料制备五内酯E的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取异型南五味子干燥的藤茎为原料，粉碎后，用乙醇水溶液回流提取，去除溶剂，得乙醇提取物；(2)采用液液萃取法用氯仿对所述乙醇提取物进行萃取，去除溶剂，得氯仿提取物；(3)将所述氯仿提取物上样于硅胶柱，采用乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，去除溶剂，即得。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述乙醇水溶液的体积百分比浓度为75～95％。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，先用乙醚对所述乙醇提取物进行萃取，分别得乙醚层和乙醇层；再用氯仿对所述乙醇层进行萃取，得氯仿提取物。4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述乙酸乙酯-乙醚混合溶剂中，乙酸乙酯体积百分比为25～75％。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，先用乙酸乙酯的体积百分比为25～45％的乙酸乙酯-乙醚混合溶剂进行洗脱，弃洗脱液；再用乙酸乙酯的体积百分比为50～75％的乙酸乙酯-乙醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：王炜，刘斌，曹亮，覃艳，李斌，翦雨青，江星明，
申请(专利权)人：湖南中医药大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43