一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，所述试剂盒有一个盒体，盒体内设有抗原包被反应板存放槽、样品稀释板存放槽、猪伪狂犬病毒gD蛋白抗体阳性对照液孔槽、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性对照液孔槽、猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性对照液孔槽、猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体阴性对照液孔槽、样品稀释液孔槽、酶结合物孔槽、浓缩洗涤液孔槽、TMB显色液、终止液孔槽和操作说明书存放槽；抗原包被反应板分为检测区I、检测区II和检测区III，检测区I、检测区II和检测区III分别包被猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗原。本试剂盒可用于鉴别诊断和评估亚单位疫苗的免疫效果，具有灵敏度高、特异性好、快速检测大批量样品等优点。

A test kit for detection of swine pseudorabies virus antibody

The utility model discloses a porcine pseudorabies virus antibody detection kit. The kit has a box body. The box has an antigen coated plate storage tank, a sample dilution plate storage tank, a porcine pseudorabies virus gD protein antibody positive control liquid hole slot, the porcine pseudorabies virus gB protein antibody positive control liquid hole slot, and the pig counterfeit. The rabies virus gE protein antibody positive control liquid pore slot, porcine pseudorabies virus gD protein, gB protein and gE protein antibody negative control liquid pore slot, sample diluent slot, enzyme conjugate pore slot, concentrated washing liquid hole slot, TMB color solution, terminating solution slot and operation manual storage tank; antigen coated reaction plate is divided into detection area I, The detection area II and III were detected. I in the detection area, II in the detection area and III in the detection area were coated with PCR gD protein, gB protein and gE protein antigen respectively. The kit can be used for differential diagnosis and evaluation of the immune effect of subunit vaccine. It has the advantages of high sensitivity, specificity and rapid detection of large quantities of samples.

【技术实现步骤摘要】
一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒
本技术属于兽用疫病检测
，具体涉及一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒。
技术介绍
猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的猪的急性传染病。该病在猪呈暴发性流行。可引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。目前该病的预防主要通过疫苗免疫，目前市场上流行的主要是第二代基因工程基因缺失疫苗。该疫苗除了在TK基因引入了一个缺失外，在非编码必需糖蛋白的基因内引入了一个新的缺失，或插入一个报告基因，这样得到的突变株就不能产生被缺失的糖蛋白，因而免疫动物就不能产生相应的抗体，因此可以通过血清学方法将免疫接种猪与自然感染野毒的猪相区别。目前，市场上使用最多的是gB抗体检测和gE抗体检测结合来区别弱毒疫苗免疫和野毒感染，这是因为现在的弱毒疫苗一般都是缺少TK基因和gE基因，而含有gB基因。但是，弱毒疫苗是一种活疫苗，在免疫后，会在猪体内增殖，这不利于猪场对PRV的净化。伪狂犬病毒属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、猪疱疹病毒属，病毒粒子为圆形，直径150～180nm，核衣壳直径为105～110nm。病毒粒子的最外层是病毒囊膜，它是由宿主细胞衍生而来的脂质双层结构。囊膜表面有长约8～10nm呈放射状排列的纤突。伪狂犬病毒基因组是线状双链DNA分子，大小约150kb，平均G+C含量高达74％，具有典型的疱疹病毒基因组结构特征，由独特长区段、独特短区段及位于US两侧的末端重复序列(TR)和内部重复序列(IR)组成。目前已发现11种PRV糖蛋白，其中，gB、gC、gD均为刺激机体产生中和抗体的蛋白，所产生的抗体无论是在体内、体外，还是在有无补体存在的情况下都有中和PRV的能力，因此，gB、gC、gD是研制PRV亚单位疫苗的首选糖蛋白。亚单位疫苗的优点：不含有核酸物质因此比较安全；接种后不会产生持续感染或潜伏感染；产生的免疫应答可以与野毒感染相区分，有利于疫病的控制和消灭。鉴于亚单位疫苗的这些优点，本专利技术人研发了gD蛋白亚单位疫苗，该亚单位疫苗具有良好的免疫原性且生产成本低。具体见本专利技术人申请的申请号为201710551363.8的中国专利技术专利申请。为了区别本专利技术人的亚单位疫苗免疫和野毒感染以及弱毒疫苗免疫(在没有野毒感染的情况下，可区分是否有弱毒疫苗免疫)，本专利技术人开发了一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒。该试剂盒能够同时检测gD蛋白抗体、gB蛋白抗体和gE蛋白抗体，克服现有技术不能同时检测的不足，也能够减少分开检测所带来的误差。
技术实现思路
本技术的目的是为了提供一种快速、有效、同时检测猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体的间接ELISA检测试剂盒，为实验动物筛选、猪场PRV净化提供新的快捷高效的工具；同时能够区别gD蛋白制备的亚单位疫苗免疫、市场上的弱毒疫苗免疫(在没有野毒感染的情况下，能够区分gD蛋白亚单位疫苗免疫和弱毒疫苗免疫)或野毒感染；还能进一步减少分开检测时带来的误差。本技术提供了一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，所述试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被反应板存放槽(2)、样品稀释板存放槽(3)、猪伪狂犬病毒gD蛋白抗体阳性对照液孔槽(4)、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性对照液孔槽(5)、猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性对照液孔槽(6)、猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体阴性对照液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、酶结合物孔槽(9)、浓缩洗涤液孔槽(10)、TMB显色液(11)、终止液孔槽(12)和操作说明书存放槽(13)；抗原包被反应板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，样品稀释板存放槽(3)内放置样品稀释板，各孔槽中(4-12)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(13)内放置操作说明书；所述的抗原包被反应板分为检测区I、检测区II和检测区III，检测区I、检测区II和检测区III分别包被猪伪狂犬病毒gD蛋白抗原、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗原和猪伪狂犬病毒gE蛋白抗原。本技术的技术方案中，优选地，所述的抗原包被反应板的规格为96孔，每个试剂盒共有5块包被板，每块包被板从左至右平均分为检测区I、检测区II和检测区III。本技术的技术方案中，优选地，所述的样品稀释板的规格为96孔，每个试剂盒共有5块样品稀释板。本技术的技术方案中，优选地，所述的抗原包被反应板和样品稀释板都是可以拆卸的96孔板，每块板都可以拆卸为12排，每排8孔。本技术的技术方案中，优选地，所述的猪伪狂犬病毒gD蛋白抗体阳性对照液、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性对照液和猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性对照液分别为用样品稀释液100倍稀释的猪伪狂犬病毒gD蛋白、猪伪狂犬病毒gB蛋白和猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体的猪阳性血清，分别按2ml/瓶分装。本技术的技术方案中，优选地，所述的猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体阴性对照液为用样品稀释液100倍稀释的不含有猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体的猪阴性血清，按4ml/瓶分装。本技术的技术方案中，优选地，所述的样品稀释液为1％BSA溶液，按照250ml/瓶分装。本技术的技术方案中，优选地，所述的酶结合物为用样品稀释液5,000倍稀释的商品化羊抗猪IgG酶标二抗，按60ml/瓶分装。本技术的技术方案中，优选地，所述的浓缩洗涤液为25×PBST溶液，按照150ml/瓶分装。本技术的技术方案中，优选地，所述的TMB显色液为商品化的显示液，按60mL/瓶分装，所述的终止液为2MH2SO4溶液，按60ml/瓶分装。本技术采用酶联免疫间接法，将猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗原分别包被在抗原包被板的三个检测区内，可分别与待检样品中的特异性抗体反应，形成抗原抗体复合物，再加入羊抗猪IgG二抗的酶结合物，形成“抗原-抗体-二抗-酶”复合物，最后通过加入TMB显示液进行显色，并读取光吸收值(OD450)。实验有效性判定：只有当满足以下条件时检测才能有效：阳性对照OD450值-阴性对照OD450值＞0.5；阴性对照OD450值＜0.15。结果计算与判定：临界值＝阴性对照孔OD450平均值+0.2；样品OD450平均值＞临界值判为阳性；样品OD450平均值≤临界值判定为阴性。本技术的检测试剂盒具有如下优点：(1)本技术使用基因表达的重组蛋白为检测抗原，安全性好、无杂蛋白污染，且具有特异性好、灵敏度高、可大批量检测等优点。(2)本技术的试剂盒可以在同一块板子上同时检测猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体，在检测gD蛋白制备的亚单位疫苗免疫产生的抗体同时可进一步区别是否有野毒感染或弱毒疫苗免疫(在没有野毒感染的情况下，可区分gD蛋白亚单位疫苗免疫和弱毒疫苗免疫)，因此本试剂盒可应用于PRV野毒感染及亚单位疫苗免疫的鉴别诊断或者应用于弱毒疫苗免疫和亚单位疫苗免疫的鉴别诊断(在没有野毒感染的情况下，可区分gD蛋白亚单位疫苗免疫和弱毒疫苗免疫)、评估PRV-gD蛋白亚单位疫苗的免疫效果以及指导猪场进行PRV的净化。(3)本试剂盒的抗原包被板是可以拆卸的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被反应板存放槽(2)、样品稀释板存放槽(3)、猪伪狂犬病毒gD蛋白抗体阳性对照液孔槽(4)、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性对照液孔槽(5)、猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性对照液孔槽(6)、猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体阴性对照液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、酶结合物孔槽(9)、浓缩洗涤液孔槽(10)、TMB显色液(11)、终止液孔槽(12)和操作说明书存放槽(13)；抗原包被反应板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，样品稀释板存放槽(3)内放置样品稀释板，各孔槽中(4‑12)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(13)内放置操作说明书；所述的抗原包被反应板分为检测区I、检测区II和检测区III，检测区I、检测区II和检测区III分别包被猪伪狂犬病毒gD蛋白抗原、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗原和猪伪狂犬病毒gE蛋白抗原。

【技术特征摘要】
1.一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被反应板存放槽(2)、样品稀释板存放槽(3)、猪伪狂犬病毒gD蛋白抗体阳性对照液孔槽(4)、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性对照液孔槽(5)、猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性对照液孔槽(6)、猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体阴性对照液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、酶结合物孔槽(9)、浓缩洗涤液孔槽(10)、TMB显色液(11)、终止液孔槽(12)和操作说明书存放槽(13)；抗原包被反应板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，样品稀释板存放槽(3)内放置样品稀释板，各孔槽中(4-12)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(13)内放置操作说明书；所述的抗原包被反应板分为检测区I、检测区II和检测区III，检测区I、检测区II和检测区III分别包被猪伪狂犬病毒gD蛋白抗原、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗原和猪伪狂犬病毒gE蛋白抗原。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的抗原包被反应板的规格为96孔，每个试剂盒共有5块包被板，每块包被板从左至右平均分为检测区I、检测区II和检测区III。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的样品稀释板的规格为96孔，每个试剂盒共有5块样品稀释板。4.根据权利要求1-3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱泓，吴有强，查银河，贾宝琴，
申请(专利权)人：浙江海隆生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：浙江,33