This article reports a method for determining the binding interaction between the human IgG1 subclass antibody and the polymer antigen with at least two specific binding antigen binding sites, including the following steps: 1) determining the binding affinity of the antibody against the polymer antigen, and 2) in the condition and time sufficient to cut the antibody into the Fab and Fc regions. A mixture of antibodies and peptides derived from lysine, gum protease, derived from red and brown monomonas gingivalis, and determining the binding affinity of the antibody Fabs to the polymer, and thus the binding affinity of the antibody to the polymer antigen is driven by affinity, as the binding affinity of the antibody is determined in the two steps. And if the binding affinity determined by the two steps is different, the binding affinity of antibody to the polygenic antigen is driven by affinity.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】确定体内相互作用模式的方法本专利技术属于免疫测定领域。尤其是本文报道了一种用于选择结合测定的方法，该测定适当地反映了治疗性结合剂(药物)对其各靶标的相互作用模式(即亲和力或亲合力)。这与选择反映治疗性结合剂(药物)结合强度的结合测定相关。专利技术背景生物制药产品的质量除了其作用之外具有决定性的重要性。因此，除了对作用模式进行详细研究之外，确定基于蛋白质的药物的身份、纯度和活性以便将其安全地用作治疗剂是绝对必要的。单克隆抗体(mAb)可以借助各种分离和测试技术成功分析。木瓜蛋白酶，作为一种半胱氨酸蛋白酶，在精氨酸(R)、赖氨酸(K)、谷氨酸(E)、组氨酸(H)、甘氨酸(G)和酪氨酸(Y)之后相对非特异性地切割肽键。如果温育时间足够长，木瓜蛋白酶消化导致完全水解。然而，通过有限的蛋白水解，抗体可以在其铰链区中相对选择性地被切割(Lottspeich，F和Engels，J.W.，“BioanalytikSpektrumAkademischerVerlag”Munich第2版(2006)201-214)。切割发生在将两条重链连接在一起的二硫键的N端侧上。在该过程中保留二硫键，从而在消化后获得三个片段(2个Fab片段，1个Fc片段)。两个N-末端片段被称为抗原结合片段(Fab、抗原结合片段)，C-末端片段被称为结晶片段(Fc、结晶片段)。每个Fab片段由完整轻链和重链的氨基末端那半组成。Fc片段由仍然通过二硫桥连接在一起的重链的两个羧基末端部分组成。近年来，已经鉴定出不同的IgG特异性蛋白酶。在WO2015/40125中报道了链球菌红疹毒素B(SpeB)。它被描述为来...
【技术保护点】
1.一种确定人IgG1亚类的抗体与多聚体抗原的结合相互作用的方法，包括以下步骤：1)确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力，2)在还原剂存在下，在30℃至42℃的温度下，将包含抗体、抗原和牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸‑牙龈菌蛋白酶或其酶活性片段的混合物在7.5至8.5的pH下温育10min至240min时间以将抗体切割成Fab和Fc区，由此抗体的浓度高于抗原的浓度，并确定抗体的Fab对于多聚体抗原的结合亲和力，和如果在两个步骤中确定的结合亲和力相当，则确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力是亲和力驱动的，并且如果在两个步骤中确定的结合亲和力不同，则抗体对多聚体抗原的结合亲和力是是亲合力驱动的。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.09 EP 15198582.71.一种确定人IgG1亚类的抗体与多聚体抗原的结合相互作用的方法，包括以下步骤：1)确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力，2)在还原剂存在下，在30℃至42℃的温度下，将包含抗体、抗原和牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸-牙龈菌蛋白酶或其酶活性片段的混合物在7.5至8.5的pH下温育10min至240min时间以将抗体切割成Fab和Fc区，由此抗体的浓度高于抗原的浓度，并确定抗体的Fab对于多聚体抗原的结合亲和力，和如果在两个步骤中确定的结合亲和力相当，则确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力是亲和力驱动的，并且如果在两个步骤中确定的结合亲和力不同，则抗体对多聚体抗原的结合亲和力是是亲合力驱动的。2.一种选择用于确定人IgG1亚类的抗体与多聚体抗原的结合相互作用的测定形式的方法，包括以下步骤：1)使用表面等离振子共振方法确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力，2)在还原剂存在下，在30℃至42℃的温度下，将包含抗体、抗原和牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸-牙龈菌蛋白酶或其酶活性片段的混合物在7.5至8.5的pH下温育10min至240min时间以将抗体切割成Fab和Fc区，由此抗体的浓度高于抗原的浓度，并在表面等离振子共振方法中通过直接应用前一步骤中获得的温育的反应混合物，利用表面等离振子共振测定抗体的Fab对其抗原的结合亲和力，由此抗体对多聚体抗原的结合亲和力i)如果在两个步骤中确定的结合亲和力相当，则是亲和力驱动的，或ii)如果在两个步骤中确定的结合亲和力不同，则是亲合力驱动的，和选择i)在与可溶性多聚体抗原发生亲和力驱动的相互作用的情况下，进行溶液测定，ii)在与可溶性多聚体抗原发生亲合力驱动的相互作用的情况下，进行溶液或表面测定，iii)在与表面结合的抗原发生亲和力驱动的相互作用的情况下，进行溶液测定，或iv)在与表面结合抗原发生亲合力驱动的相互作用的情况下，进行表面测定用于确定人IgG1亚类抗体与多聚体抗原的结合相互作用。3.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·莫莱肯，M·莫尔霍伊，C·加斯纳，M·恩德斯费尔德，T·雷古拉，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH
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