用于探测中性粒细胞胞外陷阱的方法技术

一种用于探测生物流体的样品(4)中的中性粒细胞胞外陷阱的方法，其中，对生物流体的样品(4)添加对于核酸具有选择性的染料，其中，在样品(4)中染色以后在染料的吸收区内确定多个光学的与颗粒相关的测量值分别作为由第一光学特征的和第二光学特征的测量值组成的元组，其中，在第一光学特征的所有所测量值的部分范围(6)内选择第一光学特征的测量值并且在第二光学特征的所有所测量的值的部分范围(7)内选择第二光学特征的测量值，并且其中，为了探测中性粒细胞胞外陷阱将所选择的测量值的数量与预定的界限值进行比较。

A method for detecting extracellular traps in neutrophils

A method for detecting the extracellular traps of neutrophils in a sample (4) of a biological fluid, in which the sample (4) of a biological fluid is added to a selective dye for the nucleic acid. In the sample (4), a number of measured values associated with the particles are determined in the absorption area of the dye (4) as the first of the particles. The tuple of the optical feature and the measured value of the second optical feature in which the measured values of the first optical feature are selected in a partial range (6) of all the measured values of the first optical feature and the measured values of the second optical characteristics are selected in the partial range (7) of all the measured values of the second optical features, and in this case, the measured values of the second optical features are selected and the measured values of the optical features are selected in the range (7) of the measured values of the optical features, and In order to detect the extracellular traps of neutrophils, the number of selected measurements is compared with the predetermined threshold values.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于探测中性粒细胞胞外陷阱的方法
本专利技术涉及一种用于尤其全自动地探测生物流体样品中、尤其是血样中的中性粒细胞胞外陷阱的方法。本专利技术此外还涉及一种用于尤其是全自动化地执行所述方法的分析系统。
技术介绍
中性粒细胞具有不同的机制，利用这些机制可以用来消灭外周血液中的细菌。其中包括吞噬，此时，中性粒细胞吸纳并吞噬细菌。此外中性粒细胞还可以释放杀菌毒素，从而杀死细菌。中性粒细胞用于消灭细菌的另一个机制是形成并且释放由具有蛋白质的DNA线构成的网，它们构成细胞胞外的、纤维状的基质，这种基质被称为中性粒细胞胞外陷阱或者也被称为胞中性粒细胞外网(NETs)并且用于捕获细菌。然后借助由中性粒细胞释放到中性粒细胞胞外陷阱中的杀菌毒素杀死这些捕获的细菌。中性粒细胞胞外陷阱在杀死细菌之后再次分解并被清除。中性粒细胞胞外陷阱的不完全清除与不同的自身免疫病症相关联。此外认为，中性粒细胞胞外陷阱也是血栓风险在传染时增高的一个原因，因为血小板也可被捕获到中性粒细胞胞外陷阱中从而可使血栓风险升高。此外，中性粒细胞胞外陷阱还与传染性的、炎症性的、自身免疫的和血栓疾病相关联，像例如败血症、妊娠毒血症、疟疾和红斑狼疮。可以借助电子显微镜或者光学显微镜的分析方法探测中性粒细胞胞外陷阱。此外还可以借助基于抗体的探测方法探测它的存在，例如利用酵素免疫分析法(ELISA)或者借助荧光流式细胞计数法，参见例如2015年出版的《美国血液学杂志》中Gavillet、Mathilde等人发表的文章《用于血样中的中性粒细胞胞外陷阱的直接定量的流式细胞计数法》。然而后者的缺点是，为此需要特殊的抗体。对中性粒细胞胞外陷阱的探测例如可以帮助在伴随着中性粒细胞胞外陷阱的浓度变化例如升高的自身免疫病症中做出相应的诊断。此外，对中性粒细胞胞外陷阱的探测尤其可以帮助实现例如在存在传染时改进的对血栓风险的评估。另外，在肺部疾病和肿瘤转移的癌症中，中性粒细胞胞外陷阱也可有着重要的作用。应该尽可能全自动化地实现对生物流体中、尤其是血样中的中性粒细胞胞外陷阱的探测。目前只有利用高耗费的、基于抗体的探测方法才有可能。
技术实现思路
本专利技术的任务是，提供一种简化的用于探测生物流体样品中的中性粒细胞胞外陷阱的方法，这种方法同样也可以自动地利用光学分析系统进行并且为此不需要抗体。所述目的根据本专利技术通过以下方式得以实现，即，为生物流体的样品添加对于核酸具有选择性的染料，其在此为DNA(脱氧核酸)染色，其中，在为样品染色以后在染料的吸收范围内将多个光学的颗粒有关的测量值分别确定为由折射率和吸收度组成的元组，其中，选择具有在所有的所测量的吸收度值的一个部分范围内的吸收度以及具有在所有所测量的折射率的值的一个部分范围内的测量值，并且其中，将所选择的测量值的数量被用于探测中性粒细胞胞外陷阱。本专利技术在此从以下考虑出发，即，利用例如以流量几何来执行细胞计数法，此时在细胞表中对比由吸收度和相应的折射率构成的二维测量值时，中性粒细胞胞外陷阱能够比较简单地与网织血小板、成熟的血小板和其他的微粒、例如红细胞和红细胞碎片，在相应的折射率范围内分开。因为中性粒细胞胞外陷阱包含非常多的核酸，所以在选择性染色以后，其吸收度与包含少量核酸的成熟血小板不同。就此而言，可以在由吸收度和折射率构成的细胞表中为具有较高吸收度的部分范围分配源自于中性粒细胞胞外陷阱的测量值。中性粒细胞胞外陷阱中包含的核酸是DNA。在成熟的血小板中包含的核酸是RNA。另一方面，红细胞和红细胞碎片由于其血红细胞微粒而显示出相对于中性粒细胞胞外陷阱的更高的折射率，从而可以给较低折射率的部分范围分配源自于中性粒细胞胞外陷阱的测量值。此外，仍然包含比较多的核酸的网织血小板同样也显示出相比中性粒细胞胞外陷阱更高的折射率。包含在网织血小板中的核酸是RNA。就此而言，通过用细胞计数法获取吸收度和折射率，可以将测量值的部分范围分配给中性粒细胞胞外陷阱。相应选择的测量值的数量被用于确定中性粒细胞胞外陷阱的浓度。在此已经显示，这种相对于小的血细胞、像例如较小的红细胞和细胞碎片的测量，基本上不受干扰。尤其地，对光学的、颗粒相关的特征的二维细胞计数测量属于对生物流体的自动化光学分析系统的标准方法。然而，借助染料对核酸进行染色迄今主要是用于确定网织红细胞的数量或者比例。然而本专利技术与之不同。本专利技术的主题据此尤其是一种用于探测生物流体样品中的、尤其是血样中的中性粒细胞胞外陷阱的方法，其中，为生物流体的样品添加对于核酸选择性的染料，其中，在染色以后，在样品中染料的吸收范围内将多个光学的、颗粒有关的测量值分别确定为由第一光学特征的测量值组成的元组和第二光学特征的测量值组成的元组，其中，在所有的所测量的第一光学特征的值的部分范围内选择第一光学特征的测量值并且在所有所测量的的第二光学特征的部分范围内选择第二光学特征的测量值，并且其中，将所选择的测量值的数量与一个预设的界限值进行比较从而探测中性粒细胞胞外陷阱。如果所选择的测量值的数量大于或者等于预设的界限值，那么就在生物流体的样品中探测出了中性粒细胞胞外陷阱。如果所选择的测量值的数量小于预设的界限值，那么就没有在样品中探测出中性粒细胞胞外陷阱。预设的界限值例如通过相应地测量多个包含不同的已知的浓度的中性粒细胞胞外陷阱的样品来测定。有利地，这些浓度在此处于对于中性粒细胞胞外陷阱与医疗相关的浓度范围中。大部分的样品在此有利的还包括不包含中性粒细胞胞外陷阱和/或仅包含非常少量的中性粒细胞胞外陷阱的样品。优选地，根据本专利技术的方法是一种流式细胞计数法。第一光学特征和第二光学特征例如是颗粒相关的散射光强度、折射率、光强度衰退、吸收度、透射度、荧光度或者反射度。在一种优选的设计方案中，第一光学特征是散射光强度并且/或者第二光学特征是光强度衰减、优选地是吸收度。在另一种优选的设计方案中，散射光强度是以从5度到15度、优选地从5度到8度的夹角范围内的角度偏转穿过样品的光的强度。在另一种优选的设计方案中，借助散射光强度测定折射率，或者将散射光强度用作折射率的度量，其中，所述折射率是第一光学特征。如果在本专利技术的设计方案中参考一种散射光强度或者多种散射光强度，那么由此得到本专利技术的更多如下的实施方式，即，以一个折射率取代一种散射光强度或者以多个折射率取代多种散射光强度。在另一种有利的设计方案中，散射光强度的部分范围的上限尤其在吸收度上变化地以如下方式选择，即，使得中性粒细胞胞外陷阱的散射光强度与网织血小板和红细胞及红细胞碎片的散射光强度分开，从而排除或者至少最小化干扰。通常一方面红细胞和网织血小板的散射光强度与另一方面中性粒细胞胞外陷阱的散射光强度相互之间差别足够大，以至于能够轻松地通过观察相应的散射光强度来确定相应的界限。这种散射光强度在自动化的分析系统中可以从相应的输出通道提取。在另一有利的设计方案中，散射光强度的部分范围的下限尤其是在吸收度上变化地以如下方式选择，即，使得中性粒细胞胞外陷阱的光强度衰减与血小板的光强度衰减分开，从而排除或者至少最小化干扰。通常，一方面成熟血小板的光强度衰减与另一方面的中性粒细胞胞外陷阱的光强度衰减相互之间区别足够大，以至于能够轻松地通过观察相应的光强度衰减来确定相应的界限。这种光强度衰减可以在自动化的分析系统中从本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于探测生物流体的样品(4)中的中性粒细胞胞外陷阱的方法，其中，对所述生物流体的所述样品(4)添加对于核酸具有选择性的染料，其中，在染色以后在所述样品(4)中在所述染料的吸收区内确定多个光学的颗粒有关的测量值分别作为由第一光学特征的测量值和第二光学特征的测量值组成的元组，其中，在所述第一光学特征的所有所测量的值的部分范围(6)内选择第一光学特征的测量值并且在所述第二光学特征的所有所测量的值的部分范围(7)内选择所述第二光学特征的测量值，并且其中，将所选择的测量值的数量与预定的界限值进行比较来探测所述中性粒细胞胞外陷阱。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.04 EP 15192865.21.一种用于探测生物流体的样品(4)中的中性粒细胞胞外陷阱的方法，其中，对所述生物流体的所述样品(4)添加对于核酸具有选择性的染料，其中，在染色以后在所述样品(4)中在所述染料的吸收区内确定多个光学的颗粒有关的测量值分别作为由第一光学特征的测量值和第二光学特征的测量值组成的元组，其中，在所述第一光学特征的所有所测量的值的部分范围(6)内选择第一光学特征的测量值并且在所述第二光学特征的所有所测量的值的部分范围(7)内选择所述第二光学特征的测量值，并且其中，将所选择的测量值的数量与预定的界限值进行比较来探测所述中性粒细胞胞外陷阱。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一光学特征是散射光强度，并且/或者所述第二光学特征是光强度衰减、优选地是吸收度。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述散射光强度是以从5度到15度、优选地从5度到8度的夹角范围内的角度偏转穿过所述样品的光的强度。4.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中，借助所述散射光强度来测定折射率，或者将所述散射光强度用作折射率的度量，并且其中，所述折射率是所述第一光学特征。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，为了对生物流体的所述样品(4)进行光学分析而在所述分析系统(1)中尤其全自动地执行所述方法。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述分析系统(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：戈特弗里德·普雷希特尔，
申请(专利权)人：西门子医学诊断产品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE