This article describes a composition that can be used to induce expression of genes expressed under the control of an inducible promoter sequence, and a method for the preparation and use of the composition.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用高浓度糖混合物诱导基因表达相关申请的交叉引用本申请要求于2015年7月7日提交的美国临时专利申请序列号62/189,462的优先权,将其以全文通过引用特此结合。
本专利技术涉及用于改进从细胞培养物产生蛋白质的方法。本专利技术还涉及增加由在诱导型基因启动子控制下的基因产生的蛋白质的量的培养组分和条件。所述改进的方法可以用于产生由天然存在的纤维素酶基因以及从各种异源构建体编码的蛋白质。
技术介绍
丝状真菌和纤维素分解菌产生细胞外纤维素酶,所述细胞外纤维素酶赋予生物体水解纤维素的β-(1,4)-连接的糖苷键以产生葡萄糖的能力。这些酶为生物体提供了使用纤维素(最丰富的植物多糖)用于生长的能力。丝状真菌里氏木霉(Trichodermareesei)(里氏木霉(T.reesei);真菌红褐肉座菌(Hypocreajecorina)的无性型)是纤维素酶的有效生产者。因此,针对里氏木霉产生这些酶的能力已经对其进行了开发利用,这些酶在这样的商品如燃料乙醇、衣物、洗涤剂、纤维和其他产品的生产中是有价值的。木霉属中的主要纤维素酶基因cbh1、cbh2、egl1和egl2的表达和产生取决于可用于生长的碳源。纤维素酶基因被葡萄糖严格抑制,而被纤维素或二糖(例如,槐糖、乳糖或龙胆二糖)诱导数千倍。公开的美国专利7713725披露了将全纤维素酶制剂添加到浓葡萄糖溶液中并进行充分的孵育,所得复合混合物能够不经进一步纯化而诱导纤维素酶产生。蔗糖,通常被称为食用糖或糖,由甘蔗和甜菜制成。包括蔗糖糖蜜(制糖工业的重要残余物)的蔗糖来源可在世界一些地方,例如巴西、印度、欧盟、中国、泰国和美国 ...
【技术保护点】
1.一种产生诱导性饲料组合物的方法,所述方法包括以下步骤:a)通过将含蔗糖溶液与至少一种转化性酶混合来生成第一混合物;b)将所述第一混合物在第一温度处孵育第一时间段以产生转化的混合物;c)通过将由b)产生的转化的混合物与至少一种逆转性酶混合来生成第二混合物;并且d)将所述第二混合物在第二温度处孵育第二时间段以产生所述诱导性饲料组合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.07 US 62/189,4621.一种产生诱导性饲料组合物的方法,所述方法包括以下步骤:a)通过将含蔗糖溶液与至少一种转化性酶混合来生成第一混合物;b)将所述第一混合物在第一温度处孵育第一时间段以产生转化的混合物;c)通过将由b)产生的转化的混合物与至少一种逆转性酶混合来生成第二混合物;并且d)将所述第二混合物在第二温度处孵育第二时间段以产生所述诱导性饲料组合物。2.权利要求1所述的方法,其中所述含蔗糖溶液包含甘蔗汁糖浆(SJS)。3.权利要求1所述的方法,其中所述含蔗糖溶液包含极高纯度蔗糖(VHP)。4.权利要求1所述的方法,其中所述含蔗糖溶液包含糖蜜(Mol)。5.权利要求1所述的方法,其中所述转化性酶是转化酶。6.权利要求1所述的方法,其中所述第一温度在从约30℃至约100℃的范围内,并且所述第一时间段在1小时与60小时之间。7.权利要求1所述的方法,其中所述逆转性酶是包含β-葡糖苷酶的全纤维素酶组合物。8.权利要求7所述的方法,其中所述逆转性酶是富含β-葡糖苷酶的纤维素酶组合物。9.权利要求1所述的方法,其中所述第二温度在从约30℃至约100℃的范围内,并且所述第二时间段在2小时与72小时之间。10.一种通过应用权利要求1所述的方法产生的诱导性饲料组合物。11.权利要求10所述的诱导性饲料组合物,所述诱导性饲料组合物包含糖的混合物。12.权利要求11所述的诱导性饲料组合物,所述诱导性饲料组合物包含槐糖。13.一种用于从细胞培养物产生目的蛋白质的方法,所述方法包括以下步骤:(a)产生诱导性饲料组合物,其包括以下步骤:(i)通过将包含从约50%至约70%蔗糖的溶液与至少一种转化性酶混合来生成第一混合物;(ii)将所述第一混合物在第一温度处孵育第一时间段以产生转化的混合物;并且(iii)通过将由(ii)产生的转化性混合物与至少一种逆转性酶混合来生成...
【专利技术属性】
技术研发人员:T·C·道奇,I·I·克鲁斯,C·米奇森,T·T·维尔亚瓦,
申请(专利权)人:丹尼斯科美国公司,
类型:发明
国别省市:美国,US
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