用于脂质体制剂的对乙氧基核酸制造技术

本文提供包含至少一个对乙氧基主链键联但不超过80％对乙氧基主链键联的治疗性寡核苷酸。本文提供用于包含脂质体的治疗性寡核苷酸的改进的递送系统，所述脂质体包含中性磷脂和包埋在所述脂质体中的对乙氧基寡核苷酸。

Ethoxy nucleic acid used in liposome preparation

This article provides therapeutic oligonucleotides containing at least one bond to ethoxyl backbone but not more than 80% pairs of ethoxyl backbone. An improved delivery system for therapeutic oligonucleotides containing liposomes includes neutral phospholipids and ethoxy oligodeoxynucleotides embedded in the liposomes.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于脂质体制剂的对乙氧基核酸本申请要求2015年10月14日提交的美国临时申请号62/241,503的优先权权益，所述临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。专利技术背景1.专利
本专利技术总体上涉及医学领域。更具体地说，它涉及对乙氧基寡核苷酸的脂质体制剂以及在医学中制备和使用此类制剂的方法。2.相关技术说明与靶mRNA的特定区域互补的反义寡核苷酸(寡核苷酸(oligos))已被用于抑制内源基因的表达。当反义寡核苷酸结合至靶mRNA时，形成DNA-RNA杂合体。所述杂合体形成抑制mRNA的翻译并因此抑制编码的蛋白质的表达。如果蛋白质对细胞的存活至关重要，则其表达的抑制可导致细胞死亡。因此，反义寡核苷酸可以是抗癌和抗病毒治疗中的有用工具。使用反义寡核苷酸来抑制基因表达的主要障碍是细胞不稳定性、低细胞摄取和不良细胞间递送。天然磷酸二酯不耐核酸酶水解；因此在观察到任何抑制作用之前需要高浓度的反义寡核苷酸。已经制备了修饰的磷酸二酯类似物如对乙氧基来克服这种核酸酶水解问题，但是它们没有提供对所述问题的令人满意的解决方案。反义寡核苷酸的细胞摄取较低。为了解决这个问题，已经使用物理技术如磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖介导或电穿孔来增加寡核苷酸的细胞摄取。这些技术难以再现并且不适用于体内。阳离子脂质如Lipofectin也已用于递送寡核苷酸。静电相互作用在阳离子脂质与带负电荷的寡核苷酸之间形成，这产生然后被靶细胞吸收的复合物。因为这些阳离子脂质不保护寡核苷酸免受核酸酶消化，所以对细胞膜有害，并且它们仅适用于递送耐核酸酶的硫代磷酸酯，而不适用于递送核酸酶可裂解的磷酸二酯。已经制备的另一种修饰的磷酸二酯(PD)类似物是对乙氧基(pE)寡核苷酸。pE寡核苷酸的修饰在磷酸酯主链中进行，以使得所述修饰不会干扰这些寡核苷酸与靶mRNA的结合。pE寡核苷酸通过向磷酸酯主链的非桥氧原子添加乙基来制备，从而使这些寡核苷酸成为不带电的化合物。尽管它们对核酸酶具有抗性，但pE寡核苷酸的细胞摄取和细胞内递送较差，因为在内化后，这些寡核苷酸保持在内体/溶酶体液泡内部螯合，从而阻碍它们接近靶mRNA。需要用于治疗疾病的改进的反义组合物，并且还需要用于制备此类改进的组合物的方法。专利技术概述在一个实施方案中，提供了包含寡核苷酸群体的组合物。在一些方面，所述群体的寡核苷酸由通过磷酸酯主链键联连接在一起的核苷分子组成，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯主链键联中的至少一个是对乙氧基主链键联，并且其中每个寡核苷酸中不超过80％的磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。在一些方面，每个寡核苷酸中的磷酸酯主链键联中的至少一个是磷酸二酯主链键联。在一些方面，10％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联；20％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联；30％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联；40％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联；50％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联；或60％至70％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联，或其中可推论出的任何范围。在一些方面，20％至90％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联；20％至80％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联；20％至70％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联；20％至60％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联；20％至50％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联；或30％至40％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联，或其中可推论出的任何范围。在各个方面，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或其中任何值的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。在各个方面，至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或其中任何值的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。在一些方面，所述组合物是冻干的。在一些方面，所述群体的寡核苷酸具有在7至30个核苷酸范围内的大小。在某些方面，所述群体的寡核苷酸具有在12至25个核苷酸范围内的大小。在各个方面，所述群体的寡核苷酸具有至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的大小。所述大小范围可以是群体中的寡核苷酸的平均大小。在一些方面，所述群体的寡核苷酸具有7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯主链键联中各自不超过5、6、7、8、8、9、10、11、11、12、13、14、15、15、16、17、18、19、20、20、21、22、23或24个是对乙氧基主链键联。在一些方面，所述群体的寡核苷酸具有7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的平均大小，并且每个寡核苷酸中的磷酸酯主链键联中各自至少2、2、2、2、3、3、3、3、4、4、4、4、4、5、5、5、5、5、5、6、6、6、6或6个是磷酸二酯主链键联。在一些方面，所述寡核苷酸群体包含单一种类的寡核苷酸。在其他方面，所述寡核苷酸群体包含至少两种种类的寡核苷酸。单一种类的寡核苷酸可具有相同的核苷酸序列，但在分子内的不同位置中具有或缺乏对乙氧基键。在一些方面，所述寡核苷酸群体包含反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)或piwiRNA(piRNA)。在某些方面，所述群体的寡核苷酸抑制至少一种致癌蛋白、感染因子蛋白或自身抗原的表达。在一些方面，所述群体的寡核苷酸与至少一种致癌寡核苷酸、感染因子寡核苷酸或自身抗原寡核苷酸杂交。在各个方面，所述组合物还包含磷脂。在一些方面，所述磷脂在生理pH下不带电或带有中性电荷。在一些方面，所述磷脂是中性磷脂。在某些方面，所述中性磷脂是磷脂酰胆碱。在某些方面，所述中性磷脂是二油酰基磷脂酰胆碱。在一些方面，所述磷脂基本上不含胆固醇。在一些方面，所述磷脂和寡核苷酸以约5:1至约100:1或其中可推论出的任何比率的摩尔比存在。在各个方面，所述磷脂和寡核苷酸以约5:1、10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1、95:1或100:1的摩尔比存在。在一些方面，所述寡核苷酸与磷脂形成寡核苷酸-脂质复合物，例如像脂质体复合物。在一些方面，至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的所述脂质体的直径小于5微米。在各个方面，所述组合物还包含至少一种表面活性剂，例如像聚山梨醇酯20。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含寡核苷酸群体的组合物，其中所述群体的寡核苷酸由通过磷酸酯主链键联连接在一起的核苷分子组成，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中的至少一个是对乙氧基主链键联，并且其中每个寡核苷酸中不超过80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.14 US 62/241,5031.一种包含寡核苷酸群体的组合物，其中所述群体的寡核苷酸由通过磷酸酯主链键联连接在一起的核苷分子组成，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中的至少一个是对乙氧基主链键联，并且其中每个寡核苷酸中不超过80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。2.如权利要求1所述的组合物，其中10％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。3.如权利要求2所述的组合物，其中20％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。4.如权利要求3所述的组合物，其中30％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。5.如权利要求4所述的组合物，其中40％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。6.如权利要求5所述的组合物，其中50％至80％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。7.如权利要求6所述的组合物，其中60％至70％的所述磷酸酯主链键联是对乙氧基主链键联。8.如权利要求1所述的组合物，其中20％至90％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。9.如权利要求8所述的组合物，其中20％至80％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。10.如权利要求9所述的组合物，其中20％至70％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。11.如权利要求10所述的组合物，其中20％至60％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。12.如权利要求11所述的组合物，其中20％至50％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。13.如权利要求12所述的组合物，其中30％至40％的所述磷酸酯主链键联是磷酸二酯主链键联。14.如权利要求1所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有在7至30个核苷酸范围内的大小。15.如权利要求14所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有7个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中不超过5个是对乙氧基主链键联。16.如权利要求14所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有10个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中不超过8个是对乙氧基主链键联。17.如权利要求14所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有30个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中不超过24个是对乙氧基主链键联。18.如权利要求14所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有在12至25个核苷酸范围内的大小。19.如权利要求18所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有15个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中不超过12个是对乙氧基主链键联。20.如权利要求18所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有18个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中不超过14个是对乙氧基主链键联。21.如权利要求18所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有20个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联中不超过16个是对乙氧基主链键联。22.如权利要求18所述的组合物，其中所述群体的所述寡核苷酸具有25个核苷酸的平均大小，其中每个寡核苷酸中的所述磷酸酯主链键联...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·尼尔森，
申请(专利权)人：拜奥帕斯控股股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US