神经前体细胞群体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了富集特定神经前体标志物的细胞群体和使用此类细胞群体用于治疗与抑制性神经元功能失调和/或兴奋性/抑制性神经元活性不平衡相关的紊乱的方法。具体地，本发明专利技术提供了用作基于细胞的治疗剂的细胞群体，和用于纯化并在移植中使用这些神经前体细胞以改善与异常神经功能相关的神经紊乱的方法。

Neural precursor cell population and its use

The present invention provides a cell population enriched with a specific nerve precursor marker and a method for the use of such cell populations for the treatment of disorders associated with the dysfunction of inhibitory neurons and / or the imbalance of activity of excitatory / inhibitory neurons. Specifically, the present invention provides a cell population used as a cell based therapeutic agent, and a method for purifying and using these neural precursor cells in a transplant to improve neurologic disorders associated with abnormal neural function.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】神经前体细胞群体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2015年10月8日提交的题为“NeuralPrecursorCellPopulationsandUsesThereof”的美国临时申请62/239,042的优先权，其为了所有目的特此通过引用全文并入。专利
本专利技术一般涉及细胞生物学、多能干细胞(pluripotentstemcells)和细胞分化的领域。本专利技术公开了神经前体细胞群体及其治疗用途。专利技术背景在以下讨论中，将出于背景和介绍的目的描述某些文章和方法。本文包含的任何内容不得被解释为对现有技术的“承认”。申请人明确地保留在适当的情况下证明，根据可适用的法定条文本文引用的文章和方法不构成现有技术的权利。中枢和外周神经系统的状况、疾病和损伤的临床管理仍然是显著未满足的临床需求的领域。目前用于包括癫痫病(seizuredisorders)、帕金森病、创伤性脑损伤、疼痛和痉挛的各种紊乱的治疗通常集中于症状的管理，而不是解决该疾病或紊乱的根本原因。因此，仍然对能够修复或替换损害或受损的神经组织的中枢和外周神经系统的改进和有效的治疗存在迫切需要。本专利技术通过提供具有在体内迁移并分化成功能性神经元的能力的新型神经前体细胞群体来解决这一需求。专利技术概述提供该概述是为了以简化的形式介绍概念的选择，所述概念在下文的详述中进一步描述。该概述既不意图确定所要求保护的主题的关键或基本特征，也不意图用于限制所要求保护的主题的范围。所要求保护的主题的其他特征、细节、效用和优势将是从下面撰写的详述，包括附图中阐明的和所附的权利要求中限定的那些方面明显的。本专利技术提供了富集特定神经前体标志物的细胞群体和使用此类细胞群体用于治疗与抑制性神经元功能失调和/或兴奋性/抑制性神经元活性不平衡相关的紊乱的方法。具体地，本专利技术提供了用作基于细胞的治疗剂的细胞群体，和用于纯化并在移植中使用这些神经前体细胞以改善与异常神经功能相关的神经紊乱的方法。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了神经前体细胞的富集群体，其表达关键因子，这些关键因子指示这些细胞在移植到哺乳动物中后有效地分化成抑制性中间神经元的能力。优选地，神经前体细胞富集表达由皮层中间神经元表达的标志物，皮层中间神经元是主要起源于MGE的细胞。本专利技术的细胞群体可使用包括但不限于以下的方法富集：使用细胞表面标志物分离；使用神经前体中下调的细胞表面标志物消耗细胞群体；和使多能细胞分化以表达神经前体标志物等。该群体中富集的示例性神经前体细胞标志物包括但不限于：AS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2-1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11-384F7.2、RP4-791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B或WI2-1896O14.1。在一些实施方案中，本专利技术提供了包括能够分化为GABA表达细胞的细胞的神经前体细胞群体，其中该细胞群体包括表达以下一种或更多种神经前体标志物的大多数细胞(50％或更多)：AS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2-1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11-384F7.2、RP4-791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B或WI2-1896O14.1。在一些方面，神经前体细胞可分化以形成能够在体外产生GABA的神经元。在其他方面，神经前体细胞可分化以形成能够在移植到哺乳动物神经系统(例如，中枢神经系统或CNS)后产生GABA的神经元。本专利技术的神经前体细胞群体可以从人组织(例如，人胎儿皮层或人神经节隆起(ganglioniceminences))分离，或可以从干细胞或其他多潜能细胞(multipotentcells)分化。因此，在一些实施方案中，神经前体细胞群体从多能干细胞的来源分离。在一些实施方案中，神经前体细胞从人干细胞(例如人胚胎干细胞)分化。在其他实施方案中，神经前体细胞从诱导的多能干细胞分化。在又其他实施方案中，神经前体细胞从神经干细胞分化。在又其他实施方案中，神经前体细胞群体通过细胞的重编程创建，所述细胞例如，从MGE、皮层、亚皮层、脑的其他区域获得的神经细胞、或非神经细胞。因此，在特定的实施方案中，本专利技术提供了产生神经前体细胞群体的方法，包括在允许细胞增加在神经前体细胞中上调的一种或更多种细胞表面标志物表达的条件下从哺乳动物脑组织分离细胞，并富集表达神经细胞表面标志物的细胞以产生细胞表面标志物富集细胞的群体，其中富集的细胞群体包括在体外和/或在移植入哺乳动物神经系统(例如，CNS)后能够形成产生GABA的神经元的神经前体细胞。在优选的实施方案中，细胞表面标志物是ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2或TMEM2。在其他具体实施方案中，本专利技术提供了产生神经前体细胞群体的方法，包括提供多能哺乳动物干细胞的群体；在允许细胞增加在感兴趣的神经前体细胞中上调的一种或更多种细胞表面标志物表达的条件下使该干细胞分化；并富集该细胞群体的表达一种或更多种所述细胞表面标志物的细胞；其中富集的细胞群体包括在体外和/或在移植入哺乳动物脑后能够形成产生GABA的神经元的神经前体细胞。优选地，神经前体细胞表面标志物是ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生神经前体细胞群体的方法，包括：从哺乳动物脑组织分离具有在神经前体细胞中上调的一种或更多种细胞表面标志物的增加表达的细胞；和富集表达神经细胞表面标志物的细胞以产生细胞表面标志物富集细胞的群体；其中富集的细胞群体包括能够形成产生GABA的神经元的神经前体细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.08 US 62/239,0421.一种产生神经前体细胞群体的方法，包括：从哺乳动物脑组织分离具有在神经前体细胞中上调的一种或更多种细胞表面标志物的增加表达的细胞；和富集表达神经细胞表面标志物的细胞以产生细胞表面标志物富集细胞的群体；其中富集的细胞群体包括能够形成产生GABA的神经元的神经前体细胞。2.如权利要求1所述的方法，其中从所述神经前体细胞形成的神经元能够在体外产生GABA。3.如权利要求1所述的方法，其中从所述神经前体细胞形成的神经元能够在移植入哺乳动物神经系统后产生GABA。4.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞表面标志物是ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2或TMEM2。5.如权利要求1所述的方法，其中所述富集的细胞还被富集表达以下一种或更多种：AS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2-1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11-384F7.2、RP4-791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B或WI2-1896O14.1。6.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞使用针对细胞表面标志物的结合剂富集。7.如权利要求6所述的方法，其中所述表达细胞表面标志物的细胞使用与权利要求4所述的细胞表面标志物选择性结合的剂富集。8.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞群体使用荧光激活细胞分选(FACS)富集。9.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞群体使用磁激活细胞分选(MACS)富集。10.如权利要求1所述的方法，其中所述脑组织是人胎儿脑组织。11.如权利要求1所述的方法，其中所述脑组织包括来自人皮层的细胞。12.如权利要求1所述的方法，其中所述脑组织包括来自人神经节隆起的细胞。13.如权利要求1所述的方法，还包括使所述富集的细胞的群体分化为能够产生GABA的抑制性中间神经元前体细胞。14.一种产生神经前体细胞群体的方法，包括：提供多能哺乳动物干细胞的群体；和使所述干细胞在允许细胞增加在感兴趣的神经前体细胞中上调的一种或更多种细胞表面标志物表达的条件下分化；和富集所述细胞群体的表达一种或更多种所述细胞表面标志物的细胞；其中富集的细胞群体包括能够形成产生GABA的神经元的神经前体细胞。15.如权利要求14所述的方法，其中从所述神经前体细胞形成的神经元能够在体外产生GABA。16.如权利要求14所述的方法，其中从所述神经前体细胞形成的神经元能够在移植入哺乳动物神经系统后产生GABA。17.如权利要求14所述的方法，其中所述富集的细胞表面标志物是ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2或TMEM2。18.如权利要求14所述的方法，其中所述富集的细胞还被富集以下一种或更多种的表达：AS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2-1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11-384F7.2、RP4-791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B、WI2-1896O14.1。19.如权利要求14所述的方法，其中所述细胞使用针对感兴趣的神经前体细胞中上调的细胞表面标志物的结合剂富集。20.如权利要求19所述的方法，其中所述细胞使用与权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：科里·尼古拉斯，路易斯·富恩蒂尔巴，童卓卡，玛丽娜·伯施泰恩，索尼娅·克里克斯，斯图尔特·钱伯斯，
申请(专利权)人：神经元治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US