CD8+CD45RC低TREG的新亚群及其用途制造技术

本发明专利技术涉及CD8+CD45RC低TREG的新亚群，即CD8+CD45RC低Treg细胞的分泌IFNγ+IL‑10+IL‑34+的群体，它们的分离和扩增方法，以及它们作为药物、更特别的是用于免疫疗法以及生物标志物的用途。

The new subgroup of CD8+CD45RC low TREG and its use

The present invention relates to a new subgroup of CD8+CD45RC low TREG, that is, the group of IFN gamma +IL 10+IL 34+ of the CD8+CD45RC low Treg cells, their isolation and amplification methods, and their use as drugs, especially for immunotherapy and biomarkers.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD8+CD45RC低TREG的新亚群及其用途专利
:本专利技术涉及鉴定高度抑制性的人CD8+CD45RC低Treg亚群的细胞治疗领域。专利技术背景:免疫抑制方案仍然是移植患者长期存活和移植患者福利的重要障碍，并且近年来，同种异体移植存活的改进已经停滞，主要是由于继发效应和非特异性免疫抑制(Feng2008)。在人中对供体抗原具有优异的抑制能力和特异性的调节性群体的鉴定对人类移植和许多具有调节性T细胞(Treg)/效应T细胞(Teff)失调的疾病具有极大的益处。实际上，包括Foxp3+Treg细胞和CD45RC低Treg的调节性T细胞或“Treg”在控制各种免疫应答方面是基础性的，因为Treg能够快速抑制其它免疫细胞的活性。具体而言，Treg对于通过下调对自体和非自体抗原的不期望的免疫应答而维持耐受性是关键的。例如，已经在患有多发性硬化症(MS)、I型糖尿病(TlD)、银屑病、重症肌无力(MG)和其它自身免疫性疾病的患者中发现了Treg缺陷。特应性疾病和变态反应性疾病也可能存在类似的联系。对于所有这些疾病，报道指出患者的Treg细胞的体外免疫抑制减少。这已经导致对在免疫疗法中使用Treg以治疗或预防自身免疫性疾病、变态反应、抗治疗性蛋白质免疫应答(即因子VIII)和移植相关并发症的可能性的兴趣增加。因此，特别需要具有高度抑制特性的Treg细胞亚群，其基本上不含CD4+和CD8+效应T细胞，以获得分离的Treg细胞群。事实上，高度抑制性的分离的Treg可随后被扩增并用有效诱导抗原特异性免疫耐受的感兴趣的或遗传修饰的(例如为了表达也被称为CAR的给定的嵌合抗体受体或表达嵌合T细胞受体(TCR))抗原或其它嵌合抗原受体类型进行脉冲刺激。这类扩增的Treg细胞群在慢性炎症、自身免疫、变态反应、移植、治疗性蛋白质治疗和基因治疗的领域具有特别的意义，以避免免疫系统对自身或治疗性分子/组织的降解。专利技术概述:在第一方面，本专利技术涉及分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低T调节(Treg)细胞的分离群体。在第二方面，本专利技术涉及从含有人外周血单核细胞(PBMC)或淋巴细胞的生物样品检测和/或分离分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(a)将所述人PBMC或淋巴细胞的群体与用于分离人CD8+CD45RC低Treg细胞的群体的物品(means)接触；(b)将在步骤(a)中获得的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体与用于分离分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的物品接触。在第三方面，本专利技术涉及扩增分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的方法，该方法包括将分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体与适用于扩增Treg细胞的培养基接触的步骤。本专利技术还涉及产生分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的方法，包括：(i)从含有人外周血单核细胞(PBMC)或淋巴细胞的生物样品分离CD8+CD45RC低Treg细胞，任选从含有人外周血单核细胞(PBMC)或淋巴细胞的生物样品分离CD8+CD45RC低GITR+Treg细胞，(ii)任选冷冻并随后解冻所分离的Treg细胞，和(iii)在培养中扩增所述细胞。在第四方面，本专利技术涉及经扩增的分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体。在第五方面，本专利技术涉及包含根据本专利技术的分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体(经或未经扩增)的药物组合物。在第六方面，本专利技术涉及根据本专利技术的分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体(经或未经扩增)，其用作药物。在第七方面，本专利技术涉及根据本专利技术的分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体(经或未经扩增)，其用于在有此需要的患者中预防或治疗移植排斥、GVHD(移植物抗宿主病)、慢性炎性疾病、自身免疫性疾病、针对治疗性蛋白质的不希望的免疫应答或变态反应的方法中。在最后一个方面，本专利技术涉及确定患者是否处于移植排斥、GVHD、慢性炎性疾病、自身免疫性疾病、针对治疗性蛋白质的不希望的免疫应答或变态反应的风险中的体外方法，其包括确定在通过根据本专利技术所述的方法从所述患者获得的生物样品中分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的存在的步骤，其中分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的存在指示移植排斥、GVHD、慢性炎性疾病、自身免疫性疾病、针对治疗性蛋白质的不希望的免疫应答或变态反应的风险下降。专利技术详述本专利技术由鉴定高度抑制性的CD8+Treg亚群而产生。具体而言，本专利技术人鉴定出高度抑制性的CD8+CD45RC低Treg的分泌IFN+IL-10+IL-34+的亚群。本专利技术人证明了其与经典的CD4+CD25高CD127低Treg对抗供体CD4+CD25-效应T细胞应答以及IFNγ、IL-10和IL-34在其抑制活性中的作用相比的优越潜力。此外，本专利技术人通过使用人源化小鼠描述了分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的CD8+CD45RC低Treg的特异性扩增及其在移植中作为基于细胞的疗法以抑制人皮肤移植排斥和GVHD的的潜力。本专利技术的Treg细胞群在第一方面，本专利技术涉及CD8+Treg的分离群体，特别是涉及分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低T调节(Treg)细胞的分离群体。本专利技术还涉及分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低T调节(Treg)细胞的分离群体，其中所述Treg细胞是GITR+和/或Foxp3+。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+CD45RC低Treg的分离群体。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+GITR+Treg的分离群体。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+Foxp3+Treg的分离群体。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+CD45RC低GITR+Treg的分离群体。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+CD45RC低Foxp3+Treg的分离群体。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+GITR+Foxp3+Treg的分离群体。在一个实施方案中，本专利技术涉及CD8+CD45RC低GITR+Foxp3+Treg的分离群体。在一个实施方案中，根据本专利技术的CD8+Treg的分离群体分泌IFNγ、IL-10和IL-34中的至少一种细胞因子。因此，在一个实施方案中，根据本专利技术的CD8+Treg的分离群体分泌IFNγ、或IL-10、或IL-34。在另一个实施方案中，根据本专利技术的CD8+Treg的分离群体分泌IFNγ、IL-10和IL-34中的至少两种细胞因子。因此，在一个实施方案中，根据本专利技术的CD8+Treg的分离群体分泌IFNγ和IL-10、或IFNγ和IL-34、或IL-10和IL-34。在又一个实施方案中，根据本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分泌IFNγ+IL‑10+IL‑34+的人CD8+CD45RC低T调节(Treg)细胞的分离群体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.07 EP 15306366.41.一种分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低T调节(Treg)细胞的分离群体。2.根据权利要求1所述的分离群体，其中所述Treg细胞是GITR+和/或Foxp3+。3.根据权利要求1或2所述的分离群体，其中所述Treg细胞是经遗传修饰的Treg细胞，其包含嵌合抗原受体(CAR)。4.一种从含有人外周血单核细胞(PBMC)或淋巴细胞的生物样品检测和/或分离分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的方法，其中所述Treg细胞任选为GITR+和/或Foxp3+，所述方法包括以下步骤：(a)将所述人PBMC或淋巴细胞的群体与用于分离人CD8+CD45RC低Treg细胞的群体的物品、任选与用于分离GITR+和/或Foxp3+CD8+CD45RC低Treg细胞的群体的物品接触；(b)将在步骤(a)中获得的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体与用于分离分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的物品接触。5.根据权利要求4所述的方法，其中用于分离人CD8+CD45RC低Treg细胞的群体的物品是由单克隆抗人CD3的抗体、单克隆抗人CD8的抗体和单克隆抗人CD45RC的抗体组成，任选进一步包含抗人GITR的抗体的至少三种抗体的组合。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中用于分离分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的物品是选自由以下组成的组的至少两种双特异性抗体的组合：结合IFNγ并且结合T细胞特异性细胞表面分子(例如CD3、CD8、CD45)的双特异性抗体、结合IL-10并且结合T细胞特异性细胞表面分子(例如CD3、CD8、CD45)的双特异性抗体和结合IL-34并且结合T细胞特异性细胞表面分子(例如CD3、CD8、CD45)的双特异性抗体。7.一种扩增分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的方法，所述Treg细胞任选为GITR+和/或Foxp3+，该方法包括将分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体与适用于扩增Treg细胞的培养基接触的步骤。8.根据权利要求7所述的方法，其中将分泌IFNγ+IL-10+IL-34+的人CD8+CD45RC低Treg细胞的分离群体冷冻并且随后解冻，然后将细胞与适用于扩增Treg细胞的培养基接触。9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述适用于扩增Treg细胞的培养基包含选自由抗原、细胞、MHC聚合物和抗体组成的组的至少一种抗原特异性刺激剂。10.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·吉永瑙，I·阿内贡，S·贝齐，
申请(专利权)人：国家健康科学研究所，南特大学，南特大学医疗中心，
类型：发明
国别省市：法国,FR