抗CD95L抗体制造技术

本发明专利技术涉及特异性CD95L抗体，并且涉及其在治疗或诊断涉及CD95L诱导的信号转导的疾病，例如癌症疾病中的用途。

Anti CD95L antibody

The invention relates to specific CD95L antibodies and relates to their use in the treatment or diagnosis of diseases involving CD95L induced signal transduction, such as cancer diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD95L抗体本专利技术涉及特异性CD95L抗体，及其在治疗或诊断涉及CD95L诱导的信号转导的疾病(例如癌症疾病)的用途。本专利技术的领域尤其能够在改善癌症治疗和癌症诊断中看到。本专利技术提供了特异性结合CD95L的线性表位并且能够抑制CD95L诱导的信号转导的单克隆抗体。令人惊讶地发现，与以前已知的CD95/CD95L的拮抗剂相比，尤其是与其他抗CD95L抗体、可溶性CD95分子或融合蛋白，如APG101相比，本专利技术的抗体更高效地抑制由CD95/CD95L诱导的信号转导。由此，本专利技术的第一方面是与包括氨基酸序列NSKYP的人CD95L的表位特异性结合的单克隆抗CD95L抗体。结合表位包括氨基酸序列RNSKYP，优选地RNSKYPQ，其在许多不同物种的CD95L中被发现。优选地，该抗体结合包括氨基酸序列RNSKYPQD和/或RNSKYPED的CD95L的线性表位。人CD95L以及来自猴(例如食蟹猕猴(Macacafascicularis))的CD95L包括表位RNSKYPQD，而来自小家鼠(musmusculus)的小鼠CD95L包括表位RNSKYPED。根据本专利技术的优选的方面，该抗体能够特异性地结合来源于不同物种，如人、猴和小鼠的CD95L。优选地，该抗体特异性地结合人CD95L，以及猴(如食蟹猕猴(macacafascicularis))和小鼠(小家鼠(musmusculus))的CD95L中的至少一种，更优选地是结合人、猴和小鼠CD95L。术语“抗体”具体地指包括至少一个免疫球蛋白重链和至少一个免疫球蛋白轻链的分子。每个重链和轻链可以包括可变结构域和恒定结构域。抗原结合位点可以由重链和轻链的可变结构域形成。可变区(也被称为可变结构域)包括互补决定区(CDR)，例如CDR1、CDR2和CDR3区以及侧接CDR的框架区(FR)。技术人员容易理解术语“互补决定区”(参见，如，HarlowandLane(EDS.),Antibodies:ALaboratoryManual,CSHLPress,ColdSpringHarbour,N.Y.,1988)，并且指主要与抗原接触并且决定抗体特异性的抗体的可变结构域内的氨基酸段。该区也被称为高变区。本专利技术包括全长免疫球蛋白，以及如Fab、Fab’、F(ab’)2片段，Fv片段、双抗体、单链抗体分子和单结构域抗体的功能性免疫球蛋白片段两者。还包括其他片段，只要它们表现出期望的与表位结合的能力，该表位包括包含氨基酸序列“RNSKYP”的人CD95L的氨基酸214-219，优选地包括包含氨基酸序列“RNSKYPQ”的氨基酸214-220，并且最优选地包括包含氨基酸序列“RNSKYPQD”的氨基酸214-221。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人，Nat.Met.9:129-134(2003)。“双抗体”是带有可以是二价的或双特异性的两个抗原结合位点的抗体片段(参见如，Hudson等人，2003)。“单链抗体”是包括抗体的重链可变结构域的全部或一部分，或轻链可变结构域的全部或一部分的抗体片段。能够通过各种技术制备抗体片段，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化，以及通过如本文所述的重组宿主(例如，大肠杆菌或噬菌体)的制备。本专利技术还包括人抗体。术语“人抗体”意在包括任何完全地人或人源化的抗体。人抗体可以从基因工程动物，例如包括异种免疫系统的动物，或从根据已知技术的抗体展示文库来制备。人抗体在VanDijkandVanDeWinkel(Car.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001))andLonberg(Car.Opin.Immunol.20:450-459(2008))中做一般性的描述。根据已知技术，人源化抗体可以通过来源于其他物种(例如，小鼠、大鼠、兔)的单克隆抗体的人源化来制备。一般地，人源化非人抗体以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和性。人源化抗体及其制作方法的综述例如：在AlamagroandFransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中。本专利技术的抗体的特征在于，它们特异性的结合CD95L的表位，该CD95L的表位包括人CD95L的氨基酸序列RNSKYP，优选地是人CD95L的RNSKYPQ，并且更优选地是人CD95L的RNSKYPQD。这种结合表位已经显示出了其适合于抑制CD95L诱导信号转导的独特性。与这种表位结合的抗体直接与CD95L与CD95受体的结合相竞争。除了细胞凋亡之外，相应的受体CD95根据组织和状况介导非细胞凋亡信号(诸如，NF-kB、MAPK或PI3K)，该非细胞凋亡信号促进炎症，促成癌变并且调节免疫学参数(例如，肿瘤浸润T细胞群体)。所有这些活动都可能被本文所述的抗体所抑制。术语抗体的“结合(bind)”或“结合(binding)”意指与目标抗原至少暂时性的相互作用或缔合或缔合至目标抗原，该目标抗原即是包括包含本文所述表位的其片段的人CD95L。在某些实施方式中，本文提供的抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM(例如10-8M或更少、例如从10-8M至10-13M、例如从10-9M至1013M)。对于本领域的技术人员来说确定Kd值的方法是已知的。在一个实施方式中，通过用感兴趣的抗体的Fab形式(version)和其抗原进行放射性标记的抗原结合测定(放射免疫测定分析，RIA)来测量Kd。根据另一实施方式，使用利用固定化抗原的表面等离子体共振测定来测量Kd。根据另一实施方式，通过利用固定化抗原的石英晶体微量天平(QCM)来测量Kd。根据本专利技术的优选的实施方式，该抗体是针对如本文所述的人CD95L的表位的人单克隆抗体。本专利技术的抗体可以是各种免疫球蛋白(Ig)型的，例如IgA型的、IgD型的、IgE型的、IgG型的或IgM型的，优选地是IgG型的或IgM型的，其包括但不限于IgG1型、IgG2型、IgG3型、IgG4型、IgM1和IgM2型。在一个优选的实施方式中，该抗体是IgG1型的。优选地，本专利技术的抗体是单克隆抗体。在本专利技术的某些实施方式中，该抗体可以包括特异性重链互补决定区CDRH1、CDRH2和/或CDRH3。本文所述的CDR序列使用Kabat方案编号。在一个实施方式中，该抗体包括重链，该重链包括：重链互补决定区1(CDRH1)，其具有如在SEQIDNO：1或11中所示的氨基酸序列，重链互补决定区2(CDRH2)，其具有如在SEQIDNO：2或12中所示的氨基酸序列，和/或重链互补决定区3(CDRH3)，其具有如在SEQIDNO：3或13中所示的氨基酸序列。根据本专利技术的抗体也可以包括特异性轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和/或CDRL3。因此，在一个实施方式中，该抗体包括轻链，该轻链包括：轻链互补决定区1(CDRL1)，其具有如在SEQIDNO：4或14中所示的氨基酸序列，轻链互补决定区2(CDRL2)，其具有如在SEQIDNO：5或15中所示的氨基酸序列，和/或轻链互补决定区3(CDRL3)，其具有如在SEQIDNO：6或16中所示的氨基酸序列。在优选的实施方式中，该抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单克隆抗CD95L抗体，特征在于所述抗体特异性地结合人CD95L的表位，并且抑制CD95L诱导的信号转导，所述表位包括氨基酸序列RNSKYP，优选RNSKYPQ或RNSKYPQD。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.23 EP 15186468.31.一种单克隆抗CD95L抗体，特征在于所述抗体特异性地结合人CD95L的表位，并且抑制CD95L诱导的信号转导，所述表位包括氨基酸序列RNSKYP，优选RNSKYPQ或RNSKYPQD。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特异性地结合来源于不同的物种的CD95L，特别地是人CD95L，以及猴和小鼠CD95L中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特异性地与CD95L(细胞表面上的和可溶性CD95L)的受体结合结构域相互作用。4.根据前述权利要求中的任一项所述的单克隆抗体，其是全长免疫球蛋白，或选自由以下组成的组的功能性免疫球蛋白片段：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单链抗体(scFv)和单结构域抗体。5.根据前述权利要求中的任一项所述的单克隆抗体，包括重链氨基酸序列，包括如SEQIDNO：1或11中所示的CDRH1，如SEQIDNO：2或12中所示的CDRH2，和如SEQIDNO：3或13中所示的CDRH3，以及轻链氨基酸序列，包括如SEQIDNO：4或14中所示的CDRL1，如SEQIDNO：5或15中所示的CDRL2，和如SEQIDNO：6或16中所示的CDRL3。6.根据权利要求5所述的单克隆抗体，包括(i)重链氨基酸序列，其包括如SEQIDNO：1中所示的CDRH1，如SEQIDNO：2中所示的CDRH2，和如SEQIDNO：3中所示的CDRH3；以及轻链氨基酸序列，其包括如SEQIDNO：4中所示的CDRL1，如SEQIDNO：5中所示的CDRL2，和如SEQIDNO：6中所示的CDRL3，或(ii)重链氨基酸序列，其包括如SEQIDNO：11中所示的CDRH1，如SEQIDNO：12中所示的CDRH2，和如SEQIDNO：13中所示的CDRH3；以及轻链氨基酸序列，其包括如SEQIDNO：14中所示的CDRL1，如SEQIDNO：15中所示的CDRL2，和如SEQIDNO：16中所示的CDRL3。7.根据前述权利要求中的任一项所述的单克隆抗体，至少包括具有SEQIDNO：7或17的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQIDNO：8或18的氨基酸序列的轻链可变区，或者，具有与其至少90％的序列同一性的氨基酸序列。8.根据前述权利要求中的任一项所述的单克隆抗体，包括SEQIDNO：9或19的重链氨基酸序列，和SEQIDNO：10或20的轻链氨基酸序列，或者，具有与其至少90％序列同一性的氨基酸序列。9.根据前述权利要求中的任一项所述的单克隆抗体，其是人源化的或人抗体。10.根据权利要求9所述的单克隆抗体，至少包括具有SEQIDNO：30或31或32的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQIDNO：33的氨基酸序列的轻链可变区，或者，具有与其至少90％...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯汀·吉费斯，奥利弗·希尔，迈诺尔夫·蒂曼，亚罗米尔·希科劳，克里斯汀·默茨，蒂姆·施尼德，哈拉尔德·弗里克，
申请(专利权)人：阿珀吉科吉尼科斯股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE