对ASCT2具有特异性的结合分子及其用途制造技术

本披露提供了ASCT2‑结合分子，例如抗ASCT2抗体及其抗原结合片段。在某些方面中，将这些ASCT2‑结合分子轭合至细胞毒性药物，例如ASCT2抗体‑药物轭合物(ADC)。在某些方面中，这些抗ASCT2抗体及其片段可以是杂交瘤衍生的鼠单克隆抗体及其人源化形式。在某些方面中，这些ASCT2‑结合分子特异性结合至表达ASCT2的细胞，并且在一些情况下，在细胞中被内化。此外，本披露提供了用于诊断和治疗由ASCT2过表达表征的疾病或障碍(例如某些类型的癌症)的组合物和方法。在具体的实施例中，本披露提供了使用ASCT2 ADC用于治疗癌症的方法。

Specific binding molecules and their uses for ASCT2

The disclosure provides ASCT2 binding molecules, such as anti ASCT2 antibodies and their antigen binding fragments. In some respects, these ASCT2 conjugates are conjugated to cytotoxic drugs, such as ASCT2 antibody, drug conjugates (ADC). In some respects, these anti ASCT2 antibodies and their fragments can be hybridoma derived McAbs and their humanized forms. In some respects, these ASCT2 binding molecules bind specifically to cells expressing ASCT2 and are internalized in some cases. In addition, the disclosure provides compositions and methods for the diagnosis and treatment of diseases or disorders (such as certain types of cancer) characterized by over expression of ASCT2. In specific embodiments, the disclosure provides a method for treating cancer using ASCT2 ADC.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对ASCT2具有特异性的结合分子及其用途
技术介绍
溶质运载体(SLC)家族包括多于300个编码膜转运蛋白的基因，组织成数十个亚家族。SLC1A亚家族包括转运系统ASC，该系统介导脊椎动物细胞中钠依赖性中性氨基酸转运。丙氨酸；丝氨酸；和半胱氨酸是ASC系统的优选底物。已经鉴定出ASC系统的两种亚型，ASC转运蛋白1(ASCT1，又称为SLC1A4)和ASC转运蛋白2(ASCT2，又称为SLC1A5)。ASCT2是具有八种跨膜结构域的541个氨基酸的多通路膜蛋白。取决于各种糖基化特性，ASCT2的分子量在从55至75KD之间变化。除了转运L-丙氨酸、L-丝氨酸、和L-半胱氨酸，ASCT2还转运L-苏氨酸和L-谷氨酰胺。此外，ASCT2起细胞表面受体的作用，该细胞表面受体由D型猿逆转录病毒和C型病毒共享。已报道ASCT2在各种癌症中的过表达，这些癌症包括结肠直肠癌、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、以及血液癌(如骨髓瘤和淋巴瘤)。通过免疫组织化学分析(IHC)评估的ASCT2的过表达在各种癌症中显示出预后不良，这些癌症包括结肠直肠癌、前列腺癌、肺癌、和胰腺癌(KKaira等人，(2015)，Histopathology[组织病理学]；Shimizu等人，(2014)，BJC[英国癌症杂志]；DWitte等人，(2002)，AnticancerResearch[抗癌研究]；RLi等人，(2003)，AnticancerResearch[抗癌研究])。剧报道，ASCT2是雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)信号传导途径的一个驱动子，并且因此是肿瘤生长的一个驱动子(NicklinP.等人，(2009)Cell[细胞])。抗体-药物轭合物(ADC)代表了一种有希望的新治疗方法，通过将抗体的特异性与细胞毒素小分子或毒素的效力结合，更有效地治疗癌症，同时减少药物相关的毒性。ADC可以包含细胞毒素，该细胞毒素可以是经化学修饰以含有接头的小分子。然后使用该接头从而将细胞毒素与抗体或其抗原结合片段轭合。当ADC结合至靶阳性细胞的抗原表面时，诱导细胞毒性，被内化并被运送到溶酶体，在溶酶体中细胞毒素在可切割接头的蛋白质水解(例如通过在溶酶体中发现的组织蛋白酶B)或通过抗体的蛋白质降解(当非可切割接头用于将细胞毒素附接至抗体时)后释放。细胞毒素然后从溶酶体中转移出并且转移到细胞溶质中，在细胞溶质中然后它可以根据其作用机制结合到其靶标上。通常，这些细胞毒素诱导细胞周期停滞，这随后导致细胞凋亡。含有显像剂的对应轭合物还代表在体内或体外检测癌细胞的有希望的新方式。本披露提供了特异性结合ASCT2的分子，以及使用此类分子，例如，用于检测ASCT2、用于将异源试剂递送至细胞、或用于治疗由ASCT2过表达表征的疾病或障碍(例如，癌症)的方法。本披露提供了轭合至细胞毒性药物(如微管溶素(tubulysin)衍生物或吡咯并苯并二氮杂卓)的抗ASCT2抗体(抗ASCT2-ADC)。本专利技术的这些抗体对于治疗由ASCT2过表达表征的疾病或障碍(例如，癌症)是有用的。例如，诸位专利技术人已经示出在人结肠直肠癌和头颈部癌的异种小鼠模型中抗ASCT2ADC引起肿瘤消退。
技术实现思路
本专利技术的一些主要方面总结如下。另外的方面描述于此披露的具体实施方式、实例、附图、和权利要求书部分。此披露的每个部分中的描述旨在与其他部分一起阅读。此外，此披露的每个部分中所述的各种实施例能以各种不同的方式进行组合，并且所有此类组合旨在落入本专利技术的范围之内。本披露提供了ASCT2-结合分子，例如，抗ASCT2抗体或其抗原结合片段，例如能够结合ASCT2的单克隆抗体。在一些方面中，该结合分子轭合至试剂(如细胞毒素)。在一些情况下，特异性地结合至ASCT2表位的分离的结合分子或其抗原结合片段，作为包含17c10或1e8的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至相同的ASCT2表位。在一些情况下，17c10的VH包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:5，并且17c10的VL包含SEQIDNO:2或SEQIDNO:6。在一些情况下，1e8的VH包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:7，并且1e8的VL包含SEQIDNO:4或SEQIDNO:8。在一些情况下，特异性结合至ASCT2的分离的结合分子或其抗原结合片段包含抗体VL，其中该VL包含与选自下组的参考氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、或100％同一性的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6和SEQIDNO:8。在一些情况下，特异性结合至ASCT2的分离的结合分子或其抗原结合片段包含抗体VH，其中该VH包含与选自下组的参考氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、或100％同一性的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、和SEQIDNO:7。在一些情况下，将特异性结合至ASCT2的分离的结合分子或其抗原结合片段轭合至选自下组的试剂，该组由以下各项组成：抗微生物剂、治疗剂、前药、肽、蛋白质、酶、脂质、生物应答调节剂、药物试剂(pharmaceuticalagent)、淋巴因子、异源抗体或其片段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)、以及任何所述试剂中的两种或更多种的组合。在一些情况下，将特异性结合至ASCT2的分离的结合分子或其抗原结合片段轭合至细胞毒素。在某些实施例中，该细胞毒素选自下组，该组由以下各项组成：AZ1508、SG3249、和SG3315。在一些情况下，该结合分子或其片段包含抗体或其抗原结合片段。在一些情况下，特异性结合至ASCT2的分离的抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH和VL分别包含与选自下组的参考氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、或100％同一性的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQIDNO:1和SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6、以及SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。在一些情况下，该VH包含氨基酸序列SEQIDNO:5，并且该VL包含氨基酸序列SEQIDNO:6。在一些情况下，该VH包含氨基酸序列SEQIDNO:7，并且该VL包含氨基酸序列SEQIDNO:8。在一些情况下，该抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区或其片段。在一些情况下，该重链恒定区或其片段是IgG恒定区。在一些情况下，该IgG恒定区包含氨基酸序列SEQIDNO:9。在一些情况下，该IgG恒定区是人IgG1恒定结构域。在一些情况下，该抗体或其抗原结合片段包含选自下组的轻链恒定区，该组由以下各项组成：人κ恒定区和人λ恒定区。在一些情况下，该抗体或其抗原结合片段是鼠类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、多特异性抗体、或其抗原结合片段。在一些情况下，该抗原结合片段是Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、scFv、和sc(Fv)2。在一些情况下，该抗体或其抗原结合片段可以结合至人ASCT2和食蟹猴(cyno)ASCT2。在一些情况下，该抗体或其抗原结合片段不特异性结合至人A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段特异性结合至中性氨基酸转运蛋白2(ASCT2)的表位，其中该抗体或抗原结合片段包含重链可变区(VH)的三个重链互补决定区(HCDR)和轻链可变区(VL)的三个轻链互补决定区(LCDR)，其中该抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HCDR1；SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HCDR2；SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR3；SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:19的氨基酸序列的LCDR1；SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR2；以及SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.10 US 62/253371;2015.11.11 US 62/2537741.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段特异性结合至中性氨基酸转运蛋白2(ASCT2)的表位，其中该抗体或抗原结合片段包含重链可变区(VH)的三个重链互补决定区(HCDR)和轻链可变区(VL)的三个轻链互补决定区(LCDR)，其中该抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:16的氨基酸序列的HCDR1；SEQIDNO:11或SEQIDNO:17的氨基酸序列的HCDR2；SEQIDNO:12或SEQIDNO:18的氨基酸序列的HCDR3；SEQIDNO:13或SEQIDNO:19的氨基酸序列的LCDR1；SEQIDNO:14或SEQIDNO:20的氨基酸序列的LCDR2；以及SEQIDNO:15或SEQIDNO:21的氨基酸序列的LCDR3。2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中该VH包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、和SEQIDNO:7的氨基酸序列，并且其中该VL包含选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、和SEQIDNO:8的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该VH包含SEQIDNO:5的氨基酸序列，并且该VL包含SEQIDNO:6的氨基酸序列。4.根据权利要求1或2中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该VH包含SEQIDNO:7的氨基酸序列，并且该VL包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含IgG恒定区，该IgG恒定区包含在位置239处的丝氨酸(S)和位置240处的缬氨酸(V)之间的半胱氨酸(C)插入。6.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的重链。7.根据权利要求1至6中任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：N波尔，MJ博罗克三世，P乔扈里，EF米切洛蒂，DA泰斯，RE霍林斯沃尔思，张建瑛，
申请(专利权)人：免疫医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US