改进的血清白蛋白结合免疫球蛋白可变结构域制造技术

本发明专利技术涉及与血清白蛋白结合的氨基酸序列。特别地，本发明专利技术涉及改进的免疫球蛋白单可变结构域(在本文中也被称为“ISV”或“ISVD”)，并且更尤其是与血清白蛋白结合的改进的重链免疫球蛋白单可变结构域，并且涉及包含这样的改进的血清白蛋白结合物的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体。

Improved serum albumin binding variable domain of immunoglobulin

The invention relates to amino acid sequences binding to serum albumin. In particular, the invention relates to an improved single variable domain of immunoglobulin (in this article is also known as \ISV\ or \ISVD\), and is more particularly an improved single variable domain of heavy chain immunoglobulin, which combines with serum albumin, and involves proteins and peptides containing such improved serum albumin binding. And other building blocks, compounds, molecules, or chemical entities.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进的血清白蛋白结合免疫球蛋白可变结构域本专利技术涉及与血清白蛋白结合的氨基酸序列。尤其是，本专利技术涉及改进的免疫球蛋白单可变结构域(在本文中也被称为“ISV”或“ISVD”)，并且更尤其是与血清白蛋白结合的改进的重链免疫球蛋白单可变结构域，并且涉及包含这样的改进的血清白蛋白结合物的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体。基于在本文中的公开内容，本专利技术的其他方面、实施方案、特征、用途和优点对技术人员来说将会是清楚的。本专利技术提供的改进的血清白蛋白结合ISVD在本文中也被称为“本专利技术的血清白蛋白结合物”、“本专利技术的白蛋白结合物”或“血清白蛋白结合物”或“白蛋白结合物”。此外，包含至少一种本专利技术的血清白蛋白结合物的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体在本文中也被称为“本专利技术的化合物”或“本专利技术的多肽”。优选地，本专利技术的多肽是融合蛋白。在本申请中，在免疫球蛋白重链可变结构域中的氨基酸残基/位置将会使用根据Kabat的编号表示。为了方便，图1提供了列出将会在本文中具体提及的一些氨基酸位置和它们根据一些备选编号系统(如Aho和IMGT。注意：除非明确地另外指出，对于本说明书和权利要求来说，Kabat编号是决定性的；提供其他编号系统仅用于参考)的编号的表格。就CDR而言，如在本领域中公知的，存在多种定义并且描述VH或VHH片段的CDR的习惯，如Kabat定义(其基于序列可变性并且是最常用的)和Chothia定义(其基于结构环区域的位置)。例如，参考网站http://www.bioinf.org.uk/abs/。对于本说明书和权利要求的目的来说，即使也可以提及根据Kabat的CDR，最优选基于Abm定义(其基于OxfordMolecular的AbM抗体建模软件)来定义CDR，因为认为这是在Kabat和Chothia定义之间的最佳折衷。再次参考网站http://www.bioinf.org.uk/abs/)。可以与血清白蛋白结合的ISVD以及它们的用途是在本领域中公知的，例如根据WO2004/041865、WO2006/122787、EP2139918、WO2011/006915、WO2012/175400和WO2014/111550，它们描述了血清白蛋白结合ISVD以及它们用于延长治疗性化合物、部分和实体的血清半衰期(如在这些申请中定义的)的用途。本专利技术旨在提供改进的血清白蛋白结合物，尤其是与在WO2011/006915和WO2014/111550中公开的血清白蛋白结合物相比。根据这两个PCT申请已知的血清白蛋白结合物的代表性的实例在以下表A中分别作为“参照A”至“参照D”给出。这些参照序列的比对在图2中给出。这些参照化合物的CDR(的组合)(分别根据Kabat和Abm习惯)在表B中列出。更具体地，本专利技术旨在提供作为在表A中提及的血清白蛋白结合ISVD的变体并且具有降低的借助可能存在于来自健康人受试者以及来自患者的血清中的干扰因子(通常被称为“事先存在的抗体”)的结合的改进的血清白蛋白结合ISVD。参考WO12/175741、WO2013/024059，并且还例如参考Holland等(J.Clin.Immunol.2013,33(7):1192-203)，以及参考于2015年5月13日由受让人提交的题目为“改进的免疫球蛋白可变结构域(Improvedimmunoglobulinvariabledomains)”的共同待审非预公布PCT申请PCT/EP2015/060643(于2015年11月19日作为WO2015/173325公布)。表B：参照化合物A至D的CDR(根据Kabat和Abm)如在本文中进一步描述的，本专利技术的血清白蛋白结合物优选具有与在参照A、B、C或D中的一种中存在的相同的CDR的组合(即CDR1、CDR2和CDR3)，并且最优选具有与在参照C或参照D(其具有相同的CDR)中存在的相同的CDR的组合。在表A中列出的血清白蛋白结合物中，与通常的C端序列VTVSS(SEQIDNO:113，存在于SEQIDNO:1至3的结合物中)相比，SEQIDNO:4的结合物具有C端丙氨酸延伸，即在ISVD序列的C端末端的丙氨酸残基(有时也被称为“位置114”)。如在WO12/175741中(而且还例如在WO2013/024059中)描述的，这种C端丙氨酸延伸可以防止所谓的“事先存在的抗体”(推测为IgG)与位于ISV的C端区域的推定的表位结合。推测这种表位尤其包括C端序列VTVSS的表面暴露的氨基酸残基以及在位置14的氨基酸残基(和在氨基酸序列中与所述氨基酸残基紧邻/靠近的氨基酸残基，如位置11、13和15)，并且也可以包括在位置83的氨基酸残基(和在氨基酸序列中与所述氨基酸残基紧邻/靠近的氨基酸残基，如位置82、82a、82b和84)和/或这些位置108的氨基酸残基(和在氨基酸序列中与所述氨基酸残基紧邻/靠近的氨基酸残基，如位置107)。然而，尽管这样的C端丙氨酸(或概括地，C端延伸)的存在可以大幅降低(并且在许多情况中甚至基本上完全防止)可以在来自一系列受试者(健康受试者和患者)的血清中发现的“事先存在的抗体”的结合，已经发现来自一些受试者的血清(如来自患有一些免疫疾病如SLE的患者的血清)可以含有可以与ISV的C端区域结合(当这样的区域被暴露时)的事先存在的抗体，即使ISV含有这样的C端丙氨酸(或者更概括地，这样的C端延伸)。再次参考于2015年5月13日由受让人提交的题目为“改进的免疫球蛋白可变结构域(Improvedimmunoglobulinvariabledomains)”的共同待审非预公布PCT申请PCT/EP2015/060643。因此，本专利技术的一个具体目的是提供作为在表A中列出的血清白蛋白结合ISVD的改进的变体并且具有降低的借助所谓的“事先存在的抗体”的结合的血清白蛋白结合物，并且具体属于在PCT/EP2015/060643中描述的种类(即，即使在C端延伸的存在下也可以与ISV的暴露的C端区域结合的那些事先存在的抗体)。通常，通过提供作为包含以下氨基酸残基(即与SEQIDNO:1至4的序列相比的突变)的SEQIDNO:1至4的序列的变体(并且尤其是SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的序列的变体)的血清白蛋白结合ISV，本专利技术达到了这个目的：-89T；或-与11V组合的89L；或-与110K或110Q组合的89L；或-与112K或112Q组合的89L；或-与11V和110K或110Q组合的89L；或-与11V和112K或112Q组合的89L；或-与110K或110Q组合的11V；或-与112K或112Q组合的11V。在具体的方面中，在本专利技术的血清白蛋白结合物中：-在位置11的氨基酸残基优选地选自L、V或K；并且-在位置89的氨基酸残基优选适宜地选自T、V或L；并且-在位置110的氨基酸残基优选适宜地选自T、K或Q；并且-在位置112的氨基酸残基优选适宜地选自S、K或Q；以使得(i)位置89是T；或(ii)位置110是K或Q；或(iii)位置112是K或Q；或(iv)位置89是L并且位置11是V；或(v)位置89是L并且位置110是K或Q；或(vi)位置89是L并且位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.免疫球蛋白单可变结构域，所述免疫球蛋白单可变结构域具有：‑CDR1(根据Abm)，所述CDR1选自以下序列：GFTFSTGEMA(SEQ ID NO:8)和GFTFDTSSML(SEQ ID NO:13)，并且所述CDR1优选为GFTFDTSSML(SEQ ID NO:13)；和‑CDR2(根据Abm)，所述CDR2选自以下序列：SISSSGATTY(SEQ ID NO:9)和VIHQSGTPTY(SEQ ID NO:14)，并且所述CDR2优选为VIHQSGTPTY(SEQ ID NO:14)；和‑CDR3(根据Abm)，所述CDR3选自以下序列：PRHPQGGVTFDY(SEQ ID NO:7)、FPSTHGKFDY(SEQ ID NO:12)和FPSSRMKFDY(SEQ ID NO:15)，并且所述CDR3优选为FPSTHGKFDY(SEQ ID NO:12)或FPSSRMKFDY(SEQ ID NO:15)，并且所述CDR3最优选为FPSSRMKFDY(SEQ ID NO:15)；并且具有：‑至少85％、优选至少90％、更优选至少95％的与SEQ ID NO:1的氨基酸序列的序列同一性程度(其中对于确定序列同一性程度来说不考虑可能存在的任何C端延伸以及所述CDR)；和/或‑不多于7、如不多于5、优选不多于3、如仅3、2或1个与SEQ ID NO:1的氨基酸序列的“氨基酸差异”(如在本文中定义的，并且不考虑可能存在的在位置11、89、110或112的任何以上列出的突变并且不考虑可能存在的任何C端延伸)(其中如果存在的话，所述氨基酸差异可以存在于框架和/或CDR中，但是优选仅存在于框架中而不存在于CDR中)；并且任选具有(尤其是，当所述ISVD存在于和/或形成本专利技术的化合物或多肽的C端末端时)：‑C端延伸(X)n，其中n是1至10，优选1至5，如1、2、3、4或5(并且优选1或2，如1)；并且每个X是独立选择、并且优选独立选自由丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)组成的组的(优选天然存在的)氨基酸残基；并且任选具有(尤其是，当所述ISVD存在于和/或形成本专利技术的化合物或多肽的N端末端时)在位置1的D和/或E1D突变；其中：‑在位置11的氨基酸残基优选地选自L或V；并且‑在位置89的氨基酸残基优选适宜地选自T、V或L；并且‑在位置110的氨基酸残基优选适宜地选自T、K或Q；并且‑在位置112的氨基酸残基优选适宜地选自S、K或Q；以使得(i)位置89是T；或(ii)位置89是L并且位置11是V；或(iii)位置89是L并且位置110是K或Q；或(iv)位置89是L并且位置112是K或Q；或(v)位置89是L并且位置11是V并且位置110是K或Q；或(vi)位置89是L并且位置11是V并且位置112是K或Q；或(vii)位置11是V并且位置110是K或Q；或(vii)位置11是V并且位置112是K或Q。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.13 US 62/254,8131.免疫球蛋白单可变结构域，所述免疫球蛋白单可变结构域具有：-CDR1(根据Abm)，所述CDR1选自以下序列：GFTFSTGEMA(SEQIDNO:8)和GFTFDTSSML(SEQIDNO:13)，并且所述CDR1优选为GFTFDTSSML(SEQIDNO:13)；和-CDR2(根据Abm)，所述CDR2选自以下序列：SISSSGATTY(SEQIDNO:9)和VIHQSGTPTY(SEQIDNO:14)，并且所述CDR2优选为VIHQSGTPTY(SEQIDNO:14)；和-CDR3(根据Abm)，所述CDR3选自以下序列：PRHPQGGVTFDY(SEQIDNO:7)、FPSTHGKFDY(SEQIDNO:12)和FPSSRMKFDY(SEQIDNO:15)，并且所述CDR3优选为FPSTHGKFDY(SEQIDNO:12)或FPSSRMKFDY(SEQIDNO:15)，并且所述CDR3最优选为FPSSRMKFDY(SEQIDNO:15)；并且具有：-至少85％、优选至少90％、更优选至少95％的与SEQIDNO:1的氨基酸序列的序列同一性程度(其中对于确定序列同一性程度来说不考虑可能存在的任何C端延伸以及所述CDR)；和/或-不多于7、如不多于5、优选不多于3、如仅3、2或1个与SEQIDNO:1的氨基酸序列的“氨基酸差异”(如在本文中定义的，并且不考虑可能存在的在位置11、89、110或112的任何以上列出的突变并且不考虑可能存在的任何C端延伸)(其中如果存在的话，所述氨基酸差异可以存在于框架和/或CDR中，但是优选仅存在于框架中而不存在于CDR中)；并且任选具有(尤其是，当所述ISVD存在于和/或形成本发明的化合物或多肽的C端末端时)：-C端延伸(X)n，其中n是1至10，优选1至5，如1、2、3、4或5(并且优选1或2，如1)；并且每个X是独立选择、并且优选独立选自由丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)组成的组的(优选天然存在的)氨基酸残基；并且任选具有(尤其是，当所述ISVD存在于和/或形成本发明的化合物或多肽的N端末端时)在位置1的D和/或E1D突变；其中：-在位置11的氨基酸残基优选地选自L或V；并且-在位置89的氨基酸残基优选适宜地选自T、V或L；并且-在位置110的氨基酸残基优选适宜地选自T、K或Q；并且-在位置112的氨基酸残基优选适宜地选自S、K或Q；以使得(i)位置89是T；或(ii)位置89是L并且位置11是V；或(iii)位置89是L并且位置110是K或Q；或(iv)位置89是L并且位置112是K或Q；或(v)位置89是L并且位置11是V并且位置110是K或Q；或(vi)位置89是L并且位置11是V并且位置112是K或Q；或(vii)位置11是V并且位置110是K或Q；或(vii)位置11是V并且位置112是K或Q。2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白单可变结构域，所述免疫球蛋白单可变结构域具有：-CDR1(根据Abm)，所述CDR1是GFTFDTSSML(SEQIDNO:13)；和-CDR2(根据Abm)，所述CDR2是VIHQSGTPTY(SEQIDNO:14)；和-CDR3(根据Abm)，所述CDR3选自以下序列：FPSTHGKFDY(SEQIDNO:12)或FPSSRMKFDY(SEQIDNO:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛丽安格·比斯，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE