对PD-L1具有亲和力的新的多肽制造技术

本公开内容涉及一类对程序性死亡‑配体1(PD‑L1)具有结合亲和力的工程化多肽，并且提供包含序列ERNX4AAX7EIL X11LPNLX16X17X18QX20WAFIWX26LX28D的PD‑L1结合多肽。本公开内容还涉及此类PD‑L1结合多肽作为治疗剂、预后剂和/或诊断剂的用途。

New peptides with affinity to PD-L1

The present disclosure relates to a class of engineered peptides that have binding affinity to programmed death ligand 1 (PD L1) and provide a PD binding L1 binding polypeptide containing a sequence of ERNX4AAX7EIL X11LPNLX16X17X18QX20WAFIWX26LX28D. The disclosure also relates to the use of such PD L1 combined with peptides as therapeutic agents, prognostic agents and / or diagnostic agents.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对PD-L1具有亲和力的新的多肽专利
本公开内容涉及一类对程序性死亡-配体1(以下被称为PD-L1)具有结合亲和力的工程化多肽。本公开内容还涉及此类PD-L1结合多肽作为治疗剂、预后剂和/或诊断剂的用途。背景在正常的生理条件下，免疫检查点对维持自身耐受性(即预防自身免疫)和调节免疫应答以在免疫系统应答于致病性感染时保护组织免受损伤至关重要。有时，肿瘤细胞可以吸纳(co-opt)某些免疫检查点途径以逃脱免疫监视机制。因此抑制免疫检查点已经成为癌症免疫疗法中有前景的方法。在这方面已经被研究的最积极的两种免疫检查点受体为细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA--4；也被称为CD152)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1；也被称为CD279)，它们在不同水平调节免疫应答。CTLA--4主要调节T细胞活化早期的免疫应答，而PD--1主要限制组织和肿瘤内效应期中的T细胞活性(Pardoll,2012,Nat.Rev.Cancer,12:252-64)。PD-1具有两种已知的配体：程序性死亡配体1(PD-L1；也被称为人类B7同系物1，B7-H1或分化簇274，CD274)和程序性死亡配体2(PD-L2；也被称为B7-DC和CD273)。两种配体均属于B7免疫球蛋白超家族，并且为包括IgC-和IgV-型细胞外结构域的I型跨膜糖蛋白。然而，最近报道了PD-L1和PD-L2以及PD-1除了膜结合之外也以可溶形式存在。PD-L1和PD-L2共有约40％的氨基酸残基同一性。然而，PD-L2的表达主要限于抗原呈递细胞，PD-L1在造血细胞和非造血细胞两者中均表达。PD-L1的高肿瘤表达与侵袭性增加和预后较差相关(Dai等,2014,CellularImmunology,290:72-79)。靶向免疫检查点途径的临床意义已经通过几种抑制CTLA-4、PD-1和PD-L1的单克隆抗体证明，这些单克隆抗体通过恢复对肿瘤细胞的保护性免疫应答而起作用。抗CTLA-4抗体易普利姆玛(ipilimumab)(BristolMyersSquibb)于2011年被FDA批准用于治疗患有转移性黑素瘤的患者，其中在10％-15％的患者中观察到持久的应答。然而，易普利姆玛与免疫相关毒性相关，这可能是由于其在免疫应答的引发阶段中的作用，从而也影响正常组织。一种更安全的方法可以是靶向PD-1/PD-L1途径以在肿瘤微环境内选择性地恢复抗肿瘤免疫。对PD-1/PD-L1途径的抑制在30％-35％的患有晚期黑素瘤的患者表现出持久的应答，结果于2014年FDA批准抗PD-1抗体派姆单抗(pembrolizumab)(先前被称为lambrolizumab；Merck)和纳武单抗(nivolumab)(BristolMyersSquibbandOnoPharmaceutical)(Shin和Ribas,2015,Curr.Opin.Immunol.,33:23-35；PhilipsandAtkins,2015,InternationalImmunology,27:39-46)。在临床试验中研究的第一种PD-L1靶向抗体为MDX-1105，其在患有晚期实体肿瘤的患者的I期研究中进行评价，所述实体肿瘤包括黑素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、结肠直肠癌、肾细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌和乳腺癌(Momtaz和Postow,2014,PharmgenomicsPersMed.7:357-65)。结果证明了PD-L1阻断的潜在益处。当前处于III期临床试验中的针对PD-L1的其他抗体包括阿特珠单抗(atezolizumab)(MDPL3280A,Genentech)、durvalumab(MEDI4736,MedImmune/AstraZeneca,Celgene)和avelumab(MSB0010718C,EMDSerono,Pfizer)。为了改进功效并且增加应答于免疫疗法的患者数目，以多重水平靶向抗肿瘤免疫应答可以是有益的。这可以通过协同组合来实现。例如，组合CTLA-4和PD-1阻断抗体(易普利姆玛和纳武单抗)的临床前研究已经表现出优异的抗肿瘤活性，但具有与抗CTLA-4单一疗法相似的毒性(Shin和Ribas，2015，同上)。此外，由于PD-L1在肿瘤微环境中的丰度以及由于PD-L1的肿瘤表达与对抗PD-1/PD-L1疗法的相应具有很强的相关性，推测PD-L1为潜在的生物标志物。癌症和感染性疾病的高发病率以及高度未被满足的医学需求使得有必要开发新的治疗模式。由于组织渗透率与分子的尺寸负相关，相对大的抗体分子固有地具有差的组织分布和渗透能力。因此，单克隆抗体的使用对于治疗并不总是最佳的，并且对于提供对PD-L1具有高亲和力的剂存在持续的需求。还很感兴趣的为提供此类分子在PD-L1相关紊乱的治疗、诊断和预后中的用途。专利技术概述本公开内容的目的为提供新的PD-L1结合剂，所述新的PD-L1结合剂可以例如被用于治疗应用、预后应用和诊断应用。本公开内容的目的为提供对PD-L1和至少一种另外的抗原具有亲和力的新的多特异性剂，诸如双特异性剂。本公开内容的目的为提供一种允许用于例如多种形式的癌症和炎性疾病的有效疗法同时减轻当前疗法的以上提及的和其他缺点的分子。本公开内容的目的为提供一种适于预后应用和诊断应用，例如涉及多种形式的癌症和感染性疾病的预后应用和诊断应用的分子。对于本领域技术人员由本公开内容是明显的这些目的和其他目的由如在所附权利要求书中要求保护的和如本文一般性公开的本专利技术的不同方面来满足。因此，在本公开内容的第一方面，提供了PD-L1结合多肽，所述PD-L1结合多肽包含PD-L1结合基序BM，所述基序由选自以下的氨基酸序列组成：i)ERNX4AAX7EILX11LPNLX16X17X18QX20WAFIWX26LX28D其中，彼此独立地，X4选自A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V和Y；X7选自A、E、F、H、N、Q、S、T、V、W和Y；X11选自A、D、E、F、H、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y；X16选自N和T；X17选自A、H、K、N、Q、R和S；X18选自A、D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S、T、V和Y；X20选自H、I、K、L、N、Q、R、T、V和Y；X26选自K和S；且X28选自A、D和E；和ii)与在i)中定义的序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。一类序列相关的PD-L1结合多肽的以上定义是基于亲本支架的许多随机多肽变体的统计学分析，所述多肽变体在选择实验中针对其与PD-L1的相互作用来选择。所鉴定的PD-L1结合基序，或“BM”对应于亲本支架的靶结合区域，所述区域构成在三螺旋束蛋白结构域内的2个α螺旋。在亲本支架中，两个BM螺旋的改变的氨基酸残基构成用于与抗体的恒定Fc部分相互作用的结合表面。在本公开内容中，结合表面的残基的随机变化和随后的变体选择已经将Fc相互作用能力替换为与PD-L1相互作用的能力。如技术人员将认识到的，任何多肽的功能诸如本公开内容的多肽的PD-L1结合能力取决于多肽的三级结构。因此，对多肽中的氨基酸序列做出微小改变而不影响其功能是可能的。因此，本公开内容包括PD-L1结合多肽的修饰的变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.PD‑L1结合多肽，所述PD‑L1结合多肽包含PD‑L1结合基序BM，所述基序由选自以下的氨基酸序列组成：i)ERNX4AAX7EIL X11LPNLX16X17X18QX20WAFIWX26LX28D其中，彼此独立地，X4选自A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V和Y；X7选自A、E、F、H、N、Q、S、T、V、W和Y；X11选自A、D、E、F、H、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y；X16选自N和T；X17选自A、H、K、N、Q、R和S；X18选自A、D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S、T、V和Y；X20选自H、I、K、L、N、Q、R、T、V和Y；X26选自K和S；且X28选自A、D和E；和ii)与在i)中定义的序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.30 EP 15192364.6;2016.02.24 EP 16157154.21.PD-L1结合多肽，所述PD-L1结合多肽包含PD-L1结合基序BM，所述基序由选自以下的氨基酸序列组成：i)ERNX4AAX7EILX11LPNLX16X17X18QX20WAFIWX26LX28D其中，彼此独立地，X4选自A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V和Y；X7选自A、E、F、H、N、Q、S、T、V、W和Y；X11选自A、D、E、F、H、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y；X16选自N和T；X17选自A、H、K、N、Q、R和S；X18选自A、D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S、T、V和Y；X20选自H、I、K、L、N、Q、R、T、V和Y；X26选自K和S；且X28选自A、D和E；和ii)与在i)中定义的序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的PD-L1结合多肽，其中序列i)对应于选自由SEQIDNO:1-808组成的组，诸如由SEQIDNO:1-93组成的组，诸如由SEQIDNO:1-24组成的组，诸如由SEQIDNO:1、2、4、5和21组成的组，诸如由SEQIDNO:1和2组成的组的序列中从位置8至位置36的序列。3.根据任一项前述权利要求所述的PD-L1结合多肽，其中所述PD-L1结合基序形成三螺旋束蛋白结构域的一部分。4.根据任一项前述权利要求所述的PD-L1结合多肽，所述PD-L1结合多肽包含结合模块BMod，所述结合模块BMod的氨基酸序列选自：iii)K-[BM]-DPSQSXaXbLLXcEAKKLXdXeXfQ；其中，[BM]为如在权利要求1-2中任一项中定义的PD-L1结合基序；Xa选自A和S；Xb选自N和E；Xc选自A、S和C；Xd选自E、N和S；Xe选自D、E和S；且Xf选自A和S；和iv)与iii)中定义的序列具有至少93％同一性的氨基酸序列。5.根据任一项前述权利要求所述的PD-L1结合多肽，所述PD-L1结合多肽包含选自以下的氨基酸序列：xvii)VDAKYAK-[BM]-DPSQSSELLSEAKKLNDSQAPK；其中[BM]为如权利要求1-2中任一项中定义的PD-L1结合基序；和xviii)与xvii)中定义的序列具有至少89％同一性的氨基酸序列。6.根据权利要求1-4中任一项所述的PD-L1结合多肽，所述PD-L1结合多肽包含选自以下的氨基酸序列：xxi)AEAKYAK-[BM]-DPSQSSELLSEAKKLNDSQAPK；其中[BM]为如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊丽莎白·瓦尔贝里，埃琳·贡内里乌松，
申请(专利权)人：阿菲博迪公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE