抗-因子D抗体和缀合物制造技术

本发明专利技术提供了抗‑因子D抗体和缀合物以及使用它们的方法。

Anti - factor D antibody and conjugate

The present invention provides anti D antibodies and conjugates, as well as a method of using them.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-因子D抗体和缀合物对相关申请的交叉引用本申请要求2015年10月30日提交的美国临时申请号62/249,166和2015年11月4日提交的美国临时申请号62/250,995的优先权的利益，所述各申请通过引用整体结合于此用于任何目的。
本专利技术涉及抗-因子D抗体和缀合物以及使用它们的方法。
技术介绍
补体系统在免疫复合物的清除和对传染剂、外部抗原、病毒感染的细胞和肿瘤细胞的免疫反应方面发挥中心作用。然而，补体也参与病理炎症和自体免疫病。因此，抑制过度的或不受控的补体级联激活可以为患有此种疾病和病症的患者提供临床益处。补体系统包括三种不同的激活途径，其被指定为经典途径、结合甘露糖的凝集素途径和旁路途径。V.M.HolersInClinicalImmunology:PrinciplesandPractice,ed.R.R.Rich,MosbyPress；1996,363-391。经典途径是钙/镁依赖性级联，其通常通过形成抗原-抗体复合物而激活。结合甘露糖的凝集素(MBL)途径通过MBL结合病原体上的糖类结构而引发，导致切割C2和C4以形成活性C2a、C2b、C4a和C4b的MBL蛋白酶(MASP)的活化。旁路途径是镁依赖性级联，其通过C3在某些易感表面(例如酵母和细菌的细胞壁多糖，和某些生物聚合材料)上的沉积和活化而激活。补体途径的激活产生补体蛋白质的生物活性片段，例如C3a、C4a和C5a过敏毒素和C5b-9膜攻击复合物(MAC)，其介导涉及白细胞趋化性、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板、肥大细胞和内皮细胞的激活、血管通透性、细胞溶解和组织损伤的炎性活动。因子D是对于补体旁路途径的激活必要的高度特异性的丝氨酸蛋白酶。其切割与C3b结合的因子B，产生作为旁路途径C3/C5转化酶的活性组分的C3b/Bb酶。因子D可以作为抑制的合适靶标，因为其在人中的血浆浓度非常低(1.8μg/ml)，并且已经证明其是补体旁路途径的激活的限速酶。P.H.Lesavre和H.J.Müller-Eberhard.(1978)J.Exp.Med.148:1498-1510；J.E.Volanakis等人(1985)NewEng.J.Med.312:395-401。已经证明，在动物模型中以及在离体研究中，补体激活的下调在治疗若干疾病适应证方面是有效的，所述疾病适应证例如是系统性红斑狼疮和肾小球肾炎、类风湿性关节炎、心肺转流术(cardiopulmonarybypass)和血液透析、器官移植中的超急性排斥、心肌梗塞、再灌注损伤和成人呼吸窘迫综合征。另外，其它炎性病症和自体免疫/免疫复合物疾病也与补体激活密切相关，所述疾病包括热损伤、严重哮喘、过敏性休克、肠炎、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、多发性硬化、重症肌无力、膜性增生性肾小球肾炎和舍格伦综合征。年龄相关性黄斑变性(AMD)是中央视网膜的进行性的慢性疾病，其对视觉敏锐性有显著后果。Lim等人(2012)Lancet379:1728。在工业化国家中，该疾病的晚期形式是视力丧失的主要原因。对于≥40岁的高加索人群，早期AMD的患病率估计在6.8％而晚期AMD在1.5％。deJong(2006)N.Engl.J.Med.355:1474。在80岁后，晚期AMD的患病率随年龄增长显著增加至11.8％。存在两种类型的AMD，非渗出性(干性)AMD和渗出性(湿性)AMD。更常见的干性形式AMD包括中央视网膜(黄斑)下的视网膜色素上皮(RPE)的萎缩和肥大性改变以及RPE上的沉积物(玻璃疣)。晚期干性AMD可以导致显著的视网膜损伤，包括地图状萎缩(GA)，以及不可逆的视力丧失。此外，患有干性AMD的患者可以进展至湿性形式，其中在视网膜下发展出被称为脉络膜新生血管膜(CNVM)的异常血管，渗液和渗血，并且最终导致视网膜中和视网膜下的致盲性盘状瘢痕。靶向新血管形成(新血管生成)的药物已经是治疗湿性AMD的主要依靠。雷珠单抗(Ranibizumab)，一种抗-VEGFA抗体片段，已被证明可以高效地改善患有湿性AMD的患者的视力。最近的研究暗示了AMD与补体级联中的关键蛋白质之间的关联性，并且正在开发多种靶向特定补体组分的疗法用以治疗干性AMD。通过结合因子D上的外部位点而有效抑制因子D及补体旁路途径的人源化抗-因子DFab片段(aFD.WT；lampalizumab；FCFD4514S)目前处于临床开发中以用于治疗与干性AMD相关的GA。Katschke等人(2012)J.Biol.Chem.287:12886。最近的II期临床试验显示每月玻璃体内注射lampalizumab有效地减慢患有晚期干性AMD的患者中的GA病变的进展。眼睛具有许多独特的生物物理和解剖学特征，其使得眼部药物递送更具有挑战性。例如，血-眼屏障是保护眼睛免于感染的防御机制，但是同时使得药物难于渗入，尤其是对于眼睛后段中的疾病。因此，通常需要高剂量施用来实现和保持药物的原位生物利用度(例如，眼部停留时间)以便改善效力。同时，眼睛后部中的有限空间限制了递送的药物体积，其又要求药物在高浓度制剂中递送。患有眼病的患者也可以受益于治疗剂的长效/缓释递送。较低频率的给药将为患者提供改善的便利性，具有降低感染率和增加临床效力的潜在益处。高剂量药物的受控释放还可以使药物副作用最小化。两种有希望的用于长效递送的系统是基于PLGA的固体植入物和可植入端口递送系统(PDS)。两种系统都有可能提供接近零级的释放动力学用于延长的时间。对于PLGA植入物，蛋白质药物被包封在疏水聚合物基质中并且药物释放经由聚合物的缓慢水解实现。释放速率可以通过改变药物载量、聚合物疏水性或聚合物分子量来控制。PDS是一种可再填充的装置，其中向玻璃体内的释放通过包含钛玻璃料的多孔金属膜来控制。因为储库具有小的体积，所以利用PDS进行有效递送需要高的蛋白浓度。除了高浓度和长效递送以外或作为高浓度和长效递送的替代，药物的增加的生物利用度(例如，眼部停留时间)可以通过翻译后修饰实现或受其促进，其中蛋白质药物与天然的或合成的聚合物共价缀合，如聚唾液酸化、HES化(与羟乙基淀粉缀合)和PEG化。Chen等人(2011)Expert.Opin.DrugDeliv.8:1221-36；Kontermann(2009)BioDrugs23:93-109。PEG化，即将聚合物聚乙二醇(PEG)共价连接至蛋白质，是一种尤其可用于延长抗体片段治疗剂的半衰期的确立已久的技术。Jevsevar等人(2010)Biotech.J.5:113-128。药物所暴露的条件根据使用的递送系统而变化。对于在固体PLGA植入物中的结合，使用冻干的或喷雾干燥的药物。使用热熔挤出法来制备植入物，使得药物短暂地暴露于接近90℃的温度。虽然药物在释放过程中保持固态，但是PLGA的降解可以将药物暴露于低pH环境。相反，利用PDS递送的药物被保持在液态下的高浓度并被暴露于玻璃体，玻璃体被表征为一种在生理离子强度和pH下还原的环境。因此，对于具有改善的稳定性，优选地适合于高浓度制剂和/或长效递送的抗-因子D抗体存在强烈的需求。
技术实现思路
Lampalizumab目前处于III期临床试验中用于治疗地图状萎缩(GA)(干性AMD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与因子D结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)包含氨基酸序列SYYMY(SEQ ID NO:15)的HVR‑H1；(b)包含氨基酸序列X4INPX5X6GX7TNFNEKFKS(SEQ ID NO:111)的HVR‑H2，其中X4选自E和W；X5选自T和Y；X6选自N、S和Q；并且X7选自G、D和E；(c)包含氨基酸序列EGGFAY(SEQ ID NO:25)的HVR‑H3；(d)包含氨基酸序列KASQNVDTDVA(SEQ ID NO:9)的HVR‑L1；(e)包含氨基酸序列SASSRX1S(SEQ ID NO:108)的HVR‑L2，其中X1选自Y、K和R；和(f)包含氨基酸序列QQYX3NYPLT(SEQ ID NO:110)的HVR‑L3，其中X3选自N和E。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.30 US 62/249,166;2015.11.04 US 62/250,9951.一种与因子D结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)包含氨基酸序列SYYMY(SEQIDNO:15)的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列X4INPX5X6GX7TNFNEKFKS(SEQIDNO:111)的HVR-H2，其中X4选自E和W；X5选自T和Y；X6选自N、S和Q；并且X7选自G、D和E；(c)包含氨基酸序列EGGFAY(SEQIDNO:25)的HVR-H3；(d)包含氨基酸序列KASQNVDTDVA(SEQIDNO:9)的HVR-L1；(e)包含氨基酸序列SASSRX1S(SEQIDNO:108)的HVR-L2，其中X1选自Y、K和R；和(f)包含氨基酸序列QQYX3NYPLT(SEQIDNO:110)的HVR-L3，其中X3选自N和E。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含序列X2SASSRX1S(SEQIDNO:109)，其中X1选自Y、K和R；X2选自Y、R、S、K和Q。3.根据权利要求2所述的抗体，其中X2是R。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中X1是Y。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含选自SEQIDNOs:16至24的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含选自SEQIDNOs:10至12的氨基酸序列的HVR-L2，和包含SEQIDNO:13或14的氨基酸序列的HVR-L3。6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；b)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；c)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；d)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:18的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；e)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:19的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；f)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；g)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；h)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；i)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；j)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3；k)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-L3；或l)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-H1，包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-H2，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的HVR-L2，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-L3。7.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中轻链的位置49处的氨基酸是精氨酸(R)。8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：包含选自SEQIDNOs:27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61和63的氨基酸序列的重链可变区。9.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：包含选自SEQIDNOs:26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60和62的氨基酸序列的轻链可变区。10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区；b)包含SEQIDNO:39的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:38的氨基酸序列的轻链可变区；c)包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的轻链可变区；d)包含SEQIDNO:45的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:44的氨基酸序列的轻链可变区；e)包含SEQIDNO:47的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的轻链可变区；f)包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的轻链可变区；g)包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的轻链可变区；h)包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的轻链可变区；i)包含SEQIDNO:37的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的轻链可变区；j)包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:40的氨基酸序列的轻链可变区；k)包含SEQIDNO:61的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:60的氨基酸序列的轻链可变区；l)包含SEQIDNO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:42的氨基酸序列的轻链可变区；m)包含SEQIDNO:57的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:56的氨基酸序列的轻链可变区；n)包含SEQIDNO:51的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:50的氨基酸序列的轻链可变区；o)包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的轻链可变区；p)包含SEQIDNO:55的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的轻链可变区；q)包含SEQIDNO:59的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:58的氨基酸序列的轻链可变区；或r)包含SEQIDNO:63的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:62的氨基酸序列的轻链可变区。11.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区，或者其中所述抗体包含：包含SEQIDNO:39的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:38的氨基酸序列的轻链可变区。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其是单克隆抗体。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其是人源化或嵌合抗体。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其是与因子D结合的抗体片段。15.根据权利要求14所述的抗体，其是Fab片段。16.根据权利要求15所述的抗体，其中所述轻链包含：包含SEQIDNO:112的序列的轻链恒定区。17.根据权利要求15或权利要求16所述的抗体，其中所述重链包含：包含选自SEQIDNOs:113、128至132、134至137和154-156的序列的重链恒定区。18.根据权利要求14至17中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)包含选自SEQIDNOs:71、118至122和140至146的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO:70的氨基酸序列的轻链；b)包含选自SEQIDNO:75、123至127和147至153的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:74的氨基酸序列的轻链；c)包含SEQIDNO:65的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:64的氨基酸序列的轻链；d)包含SEQIDNO:65的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:64的氨基酸序列的轻链；e)包含SEQIDNO:67的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:66的氨基酸序列的轻链；f)包含SEQIDNO:69的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:68的氨基酸序列的轻链；g)包含SEQIDNO:73的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的轻链；h)包含SEQIDNO:77的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:76的氨基酸序列的轻链；i)包含SEQIDNO:79的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:78的氨基酸序列的轻链；j)包含SEQIDNO:81的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:80的氨基酸序列的轻链；k)包含SEQIDNO:83的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:82的氨基酸序列的轻链；l)包含SEQIDNO:85的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:84的氨基酸序列的轻链；m)包含SEQIDNO:87的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:86的氨基酸序列的轻链；n)包含SEQIDNO:89的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:88的氨基酸序列的轻链；o)包含SEQIDNO:91的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:90的氨基酸序列的轻链；p)包含SEQIDNO:93的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:92的氨基酸序列的轻链；q)包含SEQIDNO:95的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:94的氨基酸序列的轻链；r)包含SEQIDNO:97的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:96的氨基酸序列的轻链；或s)包含SEQIDNO:99的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:98的氨基酸序列的轻链。19.根据权利要求14至17中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)包含选自SEQIDNOs:71、118至122和140至146的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO:70的氨基酸序列的轻链；或b)包含选自SEQIDNO:75、123至127和147至153的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:74的氨基酸序列的轻链。20.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含工程改造的半胱氨酸。21.根据权利要求20所述的抗体，其中所述工程改造的半胱氨酸选自重链中的T110C、A136C、L170C、L175C、T183C或T205C突变，以及轻链中的I106C、R108C、R142C、K149C和V205C突变，其中残基编号是根据Kabat编号。22.根据权利要求19所述的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQIDNO:119的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:70的氨基酸序列的轻链。23.一种与因子D结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQIDNO:119的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:70的氨基酸序列的轻链。24.一种与因子D结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：由SEQIDNO:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·F·凯利，惠特尼·沙茨，德温·特萨，贾斯廷·M·希尔，米歇尔·戴恩，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH