双特异性CD33和CD3结合蛋白质的使用方法技术

本文描述了与人CD33特异性结合的结合蛋白质，特别是与人CD33和人CD3特异性结合的双特异性结合蛋白质。本文还描述了与CD33和CD33结合的双特异性串联双抗体及其用于CD33+癌症、疾病和病况如急性髓样白血病(AML)的免疫疗法的用途。

Application of dual specificity CD33 and CD3 binding proteins

This paper describes binding proteins specifically binding to human CD33, especially the specific binding proteins specifically binding to human CD33 and human CD3. This paper also describes the dual specific tandem double antibodies that are combined with CD33 and CD33 and their use for immunotherapy for CD33+ cancer, disease, and diseases such as acute myeloid leukemia (AML).

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性CD33和CD3结合蛋白质的使用方法交叉引用本申请要求于2015年5月29日提交的美国临时申请号62/168,641和于2015年12月11日提交的美国临时申请号62/266,438的权益，这两篇申请均通过引用以其全文并入本文。序列表本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用以其全文并入本文。所述ASCII拷贝创建于2016年5月25日，命名为45375_705_601_SeqList.txt，并且大小为250,173个字节。专利技术背景急性髓样白血病(AML)是成年人和儿童中的急性白血病。CD33在AML中的大多数原始粒细胞上表达。在一些报道中，CD33通常局限于早期多谱系骨髓祖细胞，并且在正常的多能造血干细胞中缺失。
技术实现思路
本文提供了与人CD33特异性结合的结合蛋白质，以及与人CD33和人CD3特异性结合的双特异性结合蛋白质。本文还提供了用于生成多种双特异性CD33/CD3结合蛋白质例如串联双抗体(diabody)的抗CD33可变结构域和抗CD3可变结构域。本文还进一步提供了与CD33和CD3结合的双特异性串联双抗体，及其用于急性髓样白血病(AML)和其他恶性血液疾病、病症或病况的免疫疗法的用途。特别地，提供了显示与人类和食蟹猴CD33两者都结合的结合蛋白质。在实施例中证明，这些CD33/CD3串联双抗体可重新指向来自健康供体的多克隆CD3+T细胞以及来自AML患者的自体T细胞，以便以低E：T细胞比有效裂解CD33+AML细胞。在依赖于CD33+靶细胞和T细胞两者的存在的该过程中，如由CD25和CD69的诱导所示的，重新指向的T细胞被激活并被刺激从而增殖。显示出这些串联双抗体的抗AML效果取决于所使用的抗体的浓度和E：T细胞比。所述串联双抗体是四价的，并具有两个针对CD33的结合位点和两个针对CD3的结合位点。本文所述的CD33/CD3串联双抗体的特定特征在于，由于二价结合赋予每种抗原即CD33和CD3亲合性，因此其有利于强力且有效的凋亡。总之，本文所述的提供的CD33/CD3结合蛋白质，特别是串联双抗体，在体外诱导强力的CD33+白血病细胞和原代AML细胞的细胞裂解。呈串联双抗体的抗体形式的双特异性CD33/CD3结合蛋白质的实例证明了在细胞系、原代AML细胞中和在具有AML细胞系和来源于患者的原代AML细胞的体内模型中的体内细胞裂解活性。这表明了在严格的AMLPDX模型中尤其值得注意的高体内活性。此外，呈串联双抗体的抗体形式的双特异性CD33/CD3结合蛋白质的实例证明了在来自处于AML所有阶段的患者的样品中的离体细胞裂解活性，所述患者包括新诊断的、复发性和难治性患者。此外，本文所述的这些CD33/CD3结合蛋白质能够在约4小时内实现CD33表达细胞的显著裂解。因此，CD33/CD3结合蛋白质在细胞表面上的低CD33密度下表现出高细胞毒性，并且在低效应物：靶标(E：T)比下表现出高细胞毒性。另外，本文所述的CD33/CD3结合蛋白质不但表现出强力的与人类蛋白质的CD33和CD3结合亲和力，而且显示出与相应食蟹猴蛋白质的极好的交叉反应性，例如其人类：食蟹猴KD比在5与0.2之间。此外，本文所述的CD33/CD3结合蛋白质在不存在CD33+靶细胞的情况下不显示细胞因子释放的显著诱导，这是这些分子的安全性概况的必要组分。另外，本文所述的CD33/CD3串联双抗体属于半衰期在约8-24h范围内的分子类别，该范围应允许方便的给药。在一个方面，本文提供了与人CD33的表位特异性结合的CD33结合蛋白质。在一些实施方案中，所述结合蛋白质包含重链可变结构域和来源于人类的轻链可变结构域。在一些实施方案中，CD33结合蛋白质具有至少一个包含轻链可变结构域和重链可变结构域的结合位点，其中该轻链可变结构域包含由选自SEQIDNO:21-27的序列组成的CDR1、由选自SEQIDNO:28-34的序列组成的CDR2以及由选自SEQIDNO:35-41的序列组成的CDR3。在一些实施方案中，CD33结合蛋白质具有至少一个包含轻链可变结构域和重链可变结构域的结合位点，其中该重链可变结构域包含由选自SEQIDNO:42-48的序列组成的CDR1、由选自SEQIDNO:49-55的序列组成的CDR2以及由选自SEQIDNO:56-63的序列组成的CDR3。在某些情况下，所述轻链可变结构域的CDR1、CDR2和CDR3选自：SEQIDNO:21、28和35；SEQIDNO:22、29和36；SEQIDNO:23、30和37；SEQIDNO:24、31和38；SEQIDNO:25、32和39；SEQIDNO:26、33和40；以及SEQIDNO:27、34和41。在某些情况下，所述重链可变结构域的CDR1、CDR2和CDR3选自：SEQIDNO:42、49和56；SEQIDNO:43、50和57；SEQIDNO:43、50和58；SEQIDNO:43、50和59；SEQIDNO:43、50和60；SEQIDNO:44、51和61；SEQIDNO:45、52和62；SEQIDNO:46、53和63；SEQIDNO:47、54和63；以及SEQIDNO:48、55和63。在某些情况下，可变重链结构域和可变轻链结构域的人CD33结合位点选自：SEQIDNO:1和SEQIDNO:11；SEQIDNO:2和SEQIDNO:12；SEQIDNO:3和SEQIDNO:13；SEQIDNO:4和SEQIDNO:14；SEQIDNO:5和SEQIDNO:15；SEQIDNO:6和SEQIDNO:16；SEQIDNO:7和SEQIDNO:17；SEQIDNO:8和SEQIDNO:18；SEQIDNO:9和SEQIDNO:19；以及SEQIDNO:10和SEQIDNO:20。在一些实施方案中，所述CD33表位在人CD33的62DQEVQEETQ70(SEQIDNO:94)(SEQIDNO:93的氨基酸残基62-70)内。在上述实施方案的任一实施方案中，所述CD33结合蛋白质包含至少一个其他的功能性结构域。在一些情况下，该功能性结构域为与效应细胞结合的效应物结构域。在某些情况下，该效应物结构域为CD3结合位点，其包含形成针对人CD3的抗原结合位点的至少一个抗体可变重链结构域和至少一个可变轻链结构域。在某些情况下，所述CD3结合位点包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含STYAMN(SEQIDNO:72)的CDR1序列、RIRSKYNNYATYYADSVKD(SEQIDNO:73)的CDR2序列以及HGNFGNSYVSWFAY(SEQIDNO:74)的CDR3序列。在其他情况下，所述CD3结合位点包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含RSSTGAVTTSNYAN(SEQIDNO:90)的CDR1序列、GTNKRAP(SEQIDNO:91)的CDR2序列以及ALWYSNL(SEQIDNO:92)的CDR3序列。在某些情况下，所述CD3结合位点包含SEQIDNO:64的重链可变结构域和SEQIDNO:68的可变轻链结构域；SEQIDNO:65的重链可变结构域和SEQIDNO:69的可变轻链结构域；SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗已接受造血干细胞移植的患者的急性髓性白血病(AML)的方法，其包括施用治疗有效量的结合人CD33和人CD3的蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.29 US 62/168,641;2015.12.11 US 62/266,4381.一种治疗已接受造血干细胞移植的患者的急性髓性白血病(AML)的方法，其包括施用治疗有效量的结合人CD33和人CD3的蛋白质。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述移植是同种异体的。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述移植是自体的。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述患者没有接受预处理方案。5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其还包括向所述患者施用预处理方案。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述预处理方案是清髓性的。7.根据权利要求5所述的方法，其中所述预处理方案是非清髓性的。8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在所述预处理方案之后施用。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述患者处于完全缓解中。10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述患者具有最小残留疾病。11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述患者曾经化疗或放疗失败。12.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述患者曾经诱导性化疗失败。13.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述患者曾经巩固或维持(缓解后)化疗失败。14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述AML是复发性的。15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述AML是难治性的。16.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述AML是高危的且处于缓解中。17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在造血干细胞移植后立即施用。18.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在造血干细胞移植后三天施用。19.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在造血干细胞移植后七天施用。20.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在造血干细胞移植后两周施用。21.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在造血干细胞移植后四周施用。22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述蛋白质施用选自下组的一段时间：四周、八周、三个月、四个月、六个月、八个月、十个月、十二个月、十八个月和二十四个月。23.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在同种异体情况下在进展时与供体淋巴细胞一起施用。24.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在同种异体情况下在进展时施用，而无需供体淋巴细胞。25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述蛋白质包含人CD33和人CD3特异性的重链和轻链结构域。26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是抗体或抗体衍生物。27.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述蛋白质包含Fab、Fab'或F(ab')2片段。28.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是单链Fv、串联单链Fv、双特异性T细胞接合物、双亲和性重靶向抗体、双抗体或双特异性串联双抗体。29.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是双特异性串联双抗体。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述串联双抗体包含第一多肽和第二多肽，每个多肽均具有至少四个相继连接的可变链结构域，其中每个多肽均包含(i)人CD33特异性的可变重链(VH)结构域；(ii)人CD33特异性的可变轻链(VL)结构域；(iii)人CD3特异性的VH结构域，以及(iv)人CD3特异性的VL结构域。31.根据权利要求30所述的方法，其中在每个多肽中，所述四个可变链结构域通过肽连接体L1、L2和L3按以下顺序相继连接：VL(CD3)-L1-VH(CD33)-L2-VL(CD33)-L3-VH(CD3)；VH(CD3)-L1-VL(CD33)-L2-VH(CD33)-L3-VL(CD3)；VL(CD33)-L1-VH(CD3)-L2-VL(CD3)-L3-VH(CD33)；或VH(CD33)-L1-VL(CD3)-L2-VH(CD3)-L3-VL(CD33)。32.根据权利要求29-31中任一项所述的方法，其中所述人CD33特异性VL结构域包含由选自SEQIDNO:21-27的序列组成的CDR1、由选自SEQIDNO:28-34的序列组成的CDR2以及由选自SEQIDNO:35-41的序列组成的CDR3。33.根据权利要求29-32中任一项所述的方法，其中所述人CD33特异性VH结构域包含由选自SEQIDNO:42-48的序列组成的CDR1、由选自SEQIDNO:49-55的序列组成的CDR2以及由选自SEQIDNO:56-63的序列组成的CDR3。34.根据权利要求31-33中任一项所述的方法，其中所述人CD33特异性VL结构域的CDR1、CDR2和CDR3为选自下组的序列：(i)SEQIDNO:21、28和35；(ii)SEQIDNO:22、29和36；(iii)SEQIDNO:23、30和37；(iv)SEQIDNO:24、31和38；(v)SEQIDNO:25、32和39；(vi)SEQIDNO:26、33和40；以及(vii)SEQIDNO:27、34和41。35.根据权利要求29-34中任一项所述的方法，其中所述CD33特异性VH结构域的CDR1、CDR2和CDR3为选自下组的序列：(i)SEQIDNO:42、49和56；(ii)SEQIDNO:43、50和57；(iii)SEQIDNO:43、50和58；(iv)SEQIDNO:43、50和59；(v)SEQIDNO:43、50和60；(vi)SEQIDNO:44、51和61；(vii)SEQIDNO:45、52和62；(viii)SEQIDNO:46、53和63；(ix)SEQIDNO:47、54和63；以及(x)SEQIDNO:48、55和63。36.根据权利要求29-35中任一项所述的方法，其中所述CD33特异性VL和VH结构域为选自下组的序列：(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:11；(ii)SEQIDNO:2和SEQIDNO:12；(iii)SEQIDNO:3和SEQIDNO:13；(iv)SEQIDNO:4和SEQIDNO:14；(v)SEQIDNO:5和SEQIDNO:15；(vi)SEQIDNO:6和SEQIDNO:16；(vii)SEQIDNO:7和SEQIDNO:17；(viii)SEQIDNO:8和SEQIDNO:18；(ix)SEQIDNO:9和SEQIDNO:19；以及(x)SEQIDNO:10和SEQIDNO:20。37.根据权利要求29-36中任一项所述的方法，其中所述人CD3特异性VH结构域包含STYAMN(SEQIDNO:72)的CDR1序列、RIRSKYNNYATYYADSVKD(SEQIDNO:73)的CDR2序列以及HGNFGNSYVSWFAY(SEQIDNO:74)或HGNFGNSYVSYFAY(SEQIDNO:75)的CDR3序列。38.根据权利要求29-37中任一项所述的方法，其中所述人CD3特异性VL结构域包含RSSTGAVTTSNYAN(SEQIDNO:90)的CDR1序列、GTNKRAP(SEQIDNO:91)的CDR2序列以及ALWYSNL(SEQIDNO:92)的CDR3序列。39.根据权利要求27-36中任一项所述的方法，其中所述CD3特异性VL和VH结构域为选自下组的序列：(i)SEQIDNO:64和SEQIDNO:68；(ii)SEQIDNO:65和SEQIDNO:69；(iii)SEQIDNO:66和SEQIDNO:70；以及(iv)SEQIDNO:67和SEQIDNO:71。40.根据权利要求29-39中任一项所述的方法，其中每个多肽均包含选自下组的四个可变链结构域：(i)SEQIDNO:2、12、65和69；(ii)SEQIDNO:3、13、65和69；(iii)SEQIDNO:4、14、65和69；(iv)SEQIDNO:5、15、65和69；(v)SEQIDNO:1、11、64和68；(vi)SEQIDNO:2、12、64和68；(vii)SEQIDNO:2、12、66和70；(viii)SEQIDNO:4、14、66和70；(ix)SEQIDNO:5、15、66和70；(x)SEQIDNO:3、13、64和68；(xi)SEQIDNO:3、13、67和71；(xii)SEQIDNO:4、14、64和68；(xiii)SEQIDNO:5、15、64和68；(xiv)SEQIDNO:7、17、64和68；(xv)SEQIDNO:6、16、64和68；(xvi)SEQIDNO:6、16、67和71；(xvii)SEQIDNO:8、18、64和68；(xviii)SEQIDNO:9、19、64和68；(xix)SEQIDNO:9、19、67和71；以及(xx)SEQIDNO:10、20、64和68。41.根据权利要求29-40中任一项所述的方法，其中连接体L1、L2和L3由约12个或更少的氨基酸残基组成。42.根据权利要求29-41中任一项所述的方法，其中连接体L...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢克·伊弗宁，吉恩玛丽·盖诺，洛里·孔克尔，
申请(专利权)人：安普希韦纳治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US