The present invention provides a novel double complementary LRP5/LRP6 cross reactivity binding polypeptide, especially a novel dual complementary LRP5/LRP6 cross rereactive immunoglobulin single variable domain, which inhibits the Wnt signal transduction pathway. The invention also relates to the specific sequence of the polypeptide, the manufacturing method and the use method thereof, including the treatment of diseases, such as cancer.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在肿瘤细胞中拮抗WNT信号传递的双互补位多肽
本专利技术涉及新颖低密度脂蛋白受体样蛋白5(LRP5)结合多肽及低密度脂蛋白受体样蛋白6(LRP6)结合多肽。本专利技术亦涉及编码此类多肽的核酸；制备此类多肽的方法；表达或能够表达此类多肽的宿主细胞；包含此类多肽的组合物；及此类多肽或此类组合物尤其针对癌症疾病领域中的治疗性目的之用途。
技术介绍
Wnt信号传递路径的活化需要胞外Wnt配体结合至Frizzled受体且结合至共受体LRP5(登录号：UniProtKB-O75197/LRP5_HUMAN)或其紧密相关的同系物LRP6(登录号：UniProtKB-O75581/LRP6_HUMAN)。哺乳动物细胞中存在19种Wnt蛋白及10种Frizzled受体。在不存在Wnt配体的情况下，细胞质β-联蛋白通过由骨架蛋白质轴蛋白与APC及激酶GSK3β与CK1a组成的蛋白复合物磷酸化。藉由泛素连接酶β-TrcP的后续识别会引起β-联蛋白的经泛素介导的降解。在存在Wnt配体的情况下，Wnt结合至Frizzled及LRP5或LRP6会引起细胞质效应子蛋白Dvl的募集及LRP5或LRP6细胞质尾区的磷酸化，其为轴蛋白提供对接位点。藉由LRP5或LRP6的轴蛋白螯合作用会引起轴蛋白-APC-GSK3β复合物的失活，且因此引起胞内β-联蛋白稳定化及积聚。因此，β-联蛋白的细胞质水平上升，且β-联蛋白迁移至具有转录因子的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子-结合因子(LEF)家族的成员的细胞核及复合物。随后募集基础转录机制及转录共活化剂，包括cAMP应答元件结合蛋白(CREB)-cA...
【技术保护点】
1.一种多肽，其特异性结合至LRP5或LRP6，其包含‑第一免疫球蛋白单一可变域，其选自由包含以下CDR序列而限定的免疫球蛋白单一可变域(i)至(iii)的组：(i)：CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO：1)CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO：2)CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO：3)(ii)：CDR1：SYAMG(＝SEQ 1D NO：4)CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO：5)CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO：6)(iii)：CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO：7)CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO：8)CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO：9)及‑第二免疫球蛋白单一可变域，其选自由包含以下CDR序列而限定的免疫球蛋白单一可变域(iv)及(v)的组：(iv)：CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO：10)CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID N...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.04 EP 15197999.41.一种多肽，其特异性结合至LRP5或LRP6，其包含-第一免疫球蛋白单一可变域，其选自由包含以下CDR序列而限定的免疫球蛋白单一可变域(i)至(iii)的组：(i)：CDR1：TYTVG(＝SEQIDNO：1)CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：2)CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQIDNO：3)(ii)：CDR1：SYAMG(＝SEQ1DNO：4)CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQIDNO：5)CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQIDNO：6)(iii)：CDR1：RYTMG(＝SEQIDNO：7)CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：8)CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQIDNO：9)及-第二免疫球蛋白单一可变域，其选自由包含以下CDR序列而限定的免疫球蛋白单一可变域(iv)及(v)的组：(iv)：CDR1：SYAMG(＝SEQIDNO：10)CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：11)CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQIDNO：12)(v)：CDR1：SYAMG(＝SEQIDNO：13)CDF2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ1DNO：14)CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQIDNO：15)。2.权利要求1的多肽，其中-所述第一免疫球蛋白单一可变域包含以下CDR序列：CDR1：TYTVG(＝SEQIDNO：1)CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：2)CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQIDNO：3)且其中-所述第二免疫球蛋白单一可变域包含以下CDR序列：CDR1：SYAMG(＝SEQIDNO：10)CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：11)CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQIDNO：12)。3.权利要求1的多肽，其中-所述第一免疫球蛋白单一可变域包含以下CDR序列：CDR1：SYAMG(＝SEQIDNO：4)CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQIDNO：5)CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQIDNO：6)且其中-所述第二免疫球蛋白单一可变域包含以下CDR序列：CDR1：SYAMG(＝SEQIDNO：13)CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：14)CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQIDNO：15)。4.权利要求1的多肽，其中-所述第一免疫球蛋白单一可变域包含以下CDR序列：CDR1：RYTMG(＝SEQIDNO：7)CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：8)CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQIDNO：9)且其中-所述第二免疫球蛋白单一可变域包含以下CDR序列：CDR1：SYAMG(＝SEQIDNO：13)CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQIDNO：14)CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQIDNO：15)。5.权利要求1至4中任一项的多肽，其中所述免疫球蛋白单一可变域为VHH域，且优选为人源化VHH域。6.权利要求1的多肽，其中-所述第一免疫球蛋白单一可变域选自具有以下序列的免疫球蛋白单一可变域(i)至(iii)的组：(i)：AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSTYTVGWFRQAPGKEREFVAAIRRRGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAADTRTVALLQYRYDYWGQGTLVTVSS(＝SEQIDNO：19)，(ii)：AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGGTFSSYAMGWFRQAPGKEREFVAAIRRSGRRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAAARRVRSSTRYNTGTWWWEYWGQGTLVTVSS(＝SEQIDNO：20)，(iii)：AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSRYTMGWFRQAPGKEREFVAAIVRSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAADRRGRGENYILL.YSSGRYEYWGQGTLVTVSS(＝SEQIDNO：21)，且其中-所述第二免疫球蛋白单一可变域选自由具有以下序列的免疫球蛋白单一可变域(iv)及(v)组成的组：(iv)：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYAMGWF...
【专利技术属性】
技术研发人员：V·齐恩阿拉，KP·权凯莱，MA·比斯，K·克罗米，S·泰伦斯，B·斯塔布，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰国际有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE
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