包含脂肪组织来源基质细胞的肝病治疗剂及其制造方法技术

本发明专利技术的课题在于提供保持脂肪组织来源基质细胞对于肝病的优异的治疗效果且制备治疗剂的便利性也优异的、肝病治疗剂的制造方法、利用这样的制造方法而得到的肝病治疗剂，所述肝病治疗剂包含脂肪组织来源基质细胞。本发明专利技术为一种肝病治疗剂，其包括至少进行了2次冷冻保存和融解的脂肪组织来源基质细胞。

Hepatopathy therapeutic agent containing adipose tissue derived stromal cells and its manufacturing method

The present invention is to provide an excellent therapeutic effect of adipose tissue derived stromal cells for liver disease, the convenience of the preparation of a therapeutic agent, a method for the manufacture of a liver disease agent, a therapeutic agent for the use of such a manufacturing method, and the liver disease therapeutic agent including the adipose tissue derived stromal cells. The invention relates to a liver disease therapeutic agent, which comprises adipose tissue derived stromal cells which have been cryopreserved and fused for at least 2 times.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含脂肪组织来源基质细胞的肝病治疗剂及其制造方法
本专利技术涉及包含脂肪组织来源基质细胞的肝病治疗剂及其制造方法。
技术介绍
间充质干细胞是被指出存在于骨髄的成体干细胞，由于作为干细胞具有分化为骨、软骨和脂肪的能力，因而作为在细胞治疗中有期望的细胞来源而受到注目。最近，已知具有同等功能的细胞存在于脂肪组织和胎盘、脐带、卵膜等的胎儿附属物的基质细胞中。因此，有时也将间充质干细胞称为基质细胞。间充质干细胞除了分化能以外具有各种各样的功能的情况也受到注目，使用骨髄来源间充质干细胞，针对造血干细胞移植中的急性移植物抗宿主疾病(Graft-versus-hostdisease：GVHD)、炎性肠病的克罗恩病(Crohn病)、急性心肌梗塞和缺血性心力衰竭进行了试验。与骨髄相比，脂肪组织可以一次性得到较多的基质细胞，从供体采集时的侵袭程度也低于骨髄，因而脂肪组织来源的基质细胞作为细胞移植用的治疗剂受到注目(专利文献1和2)。然而，骨髄来源的间充质干细胞和脂肪组织来源的基质细胞不一定显示出相同的性质，也报告了如增殖速度、分化倾向的不同等的差异(非专利文献1)。一直以来，启示了将脂肪组织来源基质细胞用于肝病治疗特别是用于肝硬化的治疗(非专利文献1至4)，但尚未公开治疗效果、用于提高治疗时的便利性的脂肪组织来源基质细胞的制备方法、保存方法。虽然在日本计划了对使用了脂肪组织来源基质细胞的肝硬化的治疗效果进行研究的试验，但它们全部是同族(同种同体)的细胞移植。然而，为了进行通用的细胞移植治疗，期望以后在非同族(同种异体)中进行，对于非同族移植用的脂肪组织来源基质细胞的制备方法、保存方法，尤其是考虑了对于肝病的治疗效果、治疗时的便利性提高的研究尚未充分进行。另外，由于有报告称：与未进行冷冻保存的细胞相比，进行了冷冻保存的细胞的细胞治疗效果减弱或副作用增大等(非专利文献5至7)，因而认为在将细胞用于治疗时优选不进行冷冻保存。现有技术文献专利文献专利文献1：美国专利第6,777,231号说明书专利文献2：日本特开2013-13411号公报非专利文献非专利文献1：YuF.,et.al.,JournaloftheFormosanMedicalAssociation，114，130-138，2015非专利文献2：BanasA.,et.al.,StemCells.26：2705-2712，2008非专利文献3：HarnH.,et.al.,CellTransplant.,21：2753-2764，2012非专利文献4：SalomoneF.,et.al.,StemCellRes.,11：1037-1044，2013非专利文献5：FrancoisM.,et.al.,Cytotherapy，14：147-152，2012非专利文献6：MollG.,et.al.,StemCells，32(9)：2430-2442，2014非专利文献7：QuimbyJ.M.,et.al.,StemCellRes.Ther.,4(2)：48-59，2013
技术实现思路
专利技术要解决的问题使用进行了冷冻保存的细胞的情况下，难以预测在融解后细胞是否具有与冷冻前同等的功能(非专利文献5至7)。特别是，将脂肪组织来源基质细胞用于肝病治疗的情况下，该细胞通过何种功能而对肝病治疗产生效果，其机理是不清楚的，因此推测冷冻融解后的细胞对肝病治疗的有效性是特别困难的。在此基础上，给予重复进行了冷冻融解的脂肪组织来源基质细胞的情况下，不能推定产生了对肝病的治疗效果。而且，在需要将脂肪组织来源基质细胞培养至即将给药前的情况下，医疗机关需要准备特殊的培养设备，因此有通用性降低的担心。因此，为了提高便利性，期望开发出对保存的移植用的脂肪组织来源基质细胞直接进行配制的方法。细胞的保存需要在低温下进行冷冻，但出于维持细胞的核型、增殖能力或分化能力等细胞功能、提高细胞存活率而开发了这样的冷冻时所使用的保存液，但没有想到与保存液一起将细胞给予至体内的情况进行开发。另外，进行冷冻保存液的评价时，由于在经过培养工序而使细胞活化后进行评价，因此融解后、未进行培养的细胞为何种状况是不清楚的而且也没有着眼于这种情况的例子。更何况，对融解后的细胞直接进行配制、给予的情况对于肝病治疗是否有效是不清楚的。本专利技术是鉴于上述问题点而完成的，其课题在于提供保持脂肪组织来源基质细胞对于肝病的优异的治疗效果且治疗剂制备的便利性也优异的、肝病治疗剂的制造方法、利用这样的制造方法而得到的肝病治疗剂，所述肝病治疗剂包含脂肪组织来源基质细胞。用于解决问题的方案即，本专利技术涉及下述方案：[1]一种肝病治疗剂，其包含至少进行2次冷冻保存和融解的脂肪组织来源基质细胞。[2]根据[1]所述的肝病治疗剂，其为肝炎治疗用。[3]根据[1]所述的肝病治疗剂，其为肝硬化治疗用。[4]根据[1]～[3]中任一项所述的肝病治疗剂，其为抑制肝脏纤维化用。[5]根据[1]～[4]中任一项所述的肝病治疗剂，其中，前述脂肪组织来源基质细胞相对于被检体为同种异体。[6]根据[1]～[5]中任一项所述的肝病治疗剂，其中，前述脂肪组织来源基质细胞为人脂肪组织来源基质细胞。[7]根据[1]～[6]中任一项所述的肝病治疗剂，其中，前述至少进行2次冷冻保存和融解包括以下的工序：(1)对脂肪组织来源基质细胞进行冷冻保存和融解的工序；(2)培养该融解的细胞的工序；及(3)对该培养的细胞进行冷冻保存和融解的工序。[8]根据[1]～[7]中任一项所述的肝病治疗剂，其中，前述脂肪组织来源基质细胞为4次传代以下的脂肪组织来源基质细胞。[9]根据[1]～[8]中任一项所述的肝病治疗剂，其中，前述冷冻保存在液氮上的气相中进行。[10]根据[1]～[9]中任一项所述的肝病治疗剂，其中，前述冷冻保存使用包含DMSO(二甲基亚砜)的溶液来进行。[11]一种包含脂肪组织来源基质细胞的肝病治疗剂的制造方法，其具有如下工序：(i)培养从采集的脂肪组织中分离的基质细胞的工序；(ii)对工序(i)中得到的脂肪组织来源基质细胞进行冷冻保存和融解的工序；(iii)对融解的脂肪组织来源基质细胞进行冷冻保存和融解的工序；及(iv)将工序(iii)中融解的脂肪组织来源基质细胞与输液制剂进行混合的工序。[12]根据[11]所述的制造方法，其中，前述冷冻保存使用冷冻保存液进行，工序(iv)是对包含融解的脂肪组织来源基质细胞的冷冻保存液和输液制剂进行混合的工序。[13]根据[11]或[12]所述的制造方法，其中，前述脂肪组织来源基质细胞为人脂肪组织来源基质细胞。[14]根据[11]～[13]中任一项所述的制造方法，其中，前述工序(i)的培养至少进行1次传代。[15]根据[11]～[14]中任一项所述的制造方法，其中，前述工序(ii)中，还包括培养融解的脂肪组织来源基质细胞的工序。[16]根据[11]～[15]中任一项所述的制造方法，其中，前述冷冻保存在液氮上的气相中进行。[17]根据[12]～[16]中任一项所述的制造方法，其中，前述冷冻保存液是包含DMSO的溶液。专利技术的效果根据本专利技术，能够使用经冷冻保存和融解的脂肪组织来源基质细胞来治疗肝病。因此，本专利技术提供包含经冷冻保存和融解的脂肪组织来源基质细胞的肝病治疗剂。而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝病治疗剂，其包含至少进行2次冷冻保存和融解的脂肪组织来源基质细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.24 JP 2015-2287311.一种肝病治疗剂，其包含至少进行2次冷冻保存和融解的脂肪组织来源基质细胞。2.根据权利要求1所述的肝病治疗剂，其为肝炎治疗用。3.根据权利要求1所述的肝病治疗剂，其为肝硬化治疗用。4.根据权利要求1～3中任一项所述的肝病治疗剂，其为抑制肝脏纤维化用。5.根据权利要求1～4中任一项所述的肝病治疗剂，其中，所述脂肪组织来源基质细胞相对于被检体为同种异体。6.根据权利要求1～5中任一项所述的肝病治疗剂，其中，所述脂肪组织来源基质细胞为人脂肪组织来源基质细胞。7.根据权利要求1～6中任一项所述的肝病治疗剂，其中，所述至少进行2次冷冻保存和融解包括以下的工序：(1)对脂肪组织来源基质细胞进行冷冻保存和融解的工序；(2)培养该融解的细胞的工序；及(3)对该培养的细胞进行冷冻保存和融解的工序。8.根据权利要求1～7中任一项所述的肝病治疗剂，其中，所述脂肪组织来源基质细胞为4次传代以下的脂肪组织来源基质细胞。9.根据权利要求1～8中任一项所述的肝病治疗剂，其中，所述冷冻保存在液氮上的气相中进行。10.根据权利要求1～9中任一项所述的肝病治疗剂，其中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：仓田隼人，野中秀纪，
申请(专利权)人：日本乐敦制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP