包含精油和溶菌酶的用于水生动物的饲料添加剂制造技术

本发明专利技术涉及选自α‑蒎烯、α‑萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的天然活性物质与具有溶菌酶活性的多肽的组合在制造用于水生动物，尤其是用于冷水性鱼(如鲑鱼、鳊鱼、鲈鱼)和温水性鱼(如鲤鱼、罗非鱼、鲶鱼)的饲料组合物中的用途。更具体地，本发明专利技术涉及如上所限定的物质用于改善鱼的饲料转化率和/或日增重、用于调节肠道的微生物菌群和用于保护动物免遭由致病微生物(特别是革兰氏阳性微生物)引起的感染的用途。

Feed additives for essential oils and lysozyme for aquatic animals

The invention relates to the combination of natural active substances selected from alpha pinene, alpha terpene alcohol, cinnamaldehyde, two hydro eugenol, eugenol, mresol and terpene, and the combination of a polypeptide with lysozyme activity in the manufacture of aquatic animals, especially for cold water fish (such as salmon, bream, bass) and warm water fish (such as carp and Luo). Use of fodder compositions for non fish and catfish. More specifically, the present invention relates to the use of substances defined above to improve feed conversion and / or daily weight gain of fish, microbial flora for regulating intestinal tract and to protect animals from infection caused by pathogenic microorganisms (especially Gram-positive microorganisms).

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含精油和溶菌酶的用于水生动物的饲料添加剂本专利技术涉及天然精油活性物与至少一种具有溶菌酶活性的多肽的组合在制造用于水生动物(包括鱼和虾)，尤其是用于冷水性鱼(例如鲑鱼、鳊鱼、鲈鱼)和温水性鱼(例如鲤鱼、罗非鱼、鲶鱼)的饲料中的用途。序列表说明本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过引用并入本文。SEQIDNO:1是如WO2013/076253中所述的来自Acremoniumalcalophilum的野生型GH25溶菌酶的成熟氨基酸序列。SEQIDNO:2是从Tri-chophaeasaccata分离的GH24溶菌酶的基因序列。SEQIDNO:3是从SEQIDNO:2推导的氨基酸序列。SEQIDNO:4是来自Trichophaeasaccata的野生型GH24溶菌酶的成熟氨基酸序列。SEQIDNO:5是来自Gallusgallus的野生型GH22溶菌酶(鸡卵清溶菌酶)的成熟氨基酸序列。SEQIDNO:6是引物F-80470。SEQIDNO:7是引物R-80470。SEQIDNO:8是引物8643。SEQIDNO:9是引物8654。引言本专利技术涉及选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的天然精油活性物在制造用于水生动物(包括鱼和虾)，尤其是用于冷水性鱼(例如鲑鱼、鳊鱼、鲈鱼)和温水性鱼(例如鲤鱼、罗非鱼、鲶鱼)的饲料中的用途。更具体地，本专利技术涉及至少一种、优选地至少两种如上所限定的精油活性物与具有溶菌酶活性的多肽的组合用于改善鱼的饲料转化率和/或日增重、用于通过调节肠道的微生物菌群和/或通过保护动物免遭由致病微生物引起的感染而降低死亡率的用途。溶菌酶是一种由许多生物作为对抗细菌的防御性机制而产生的O-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖的糖苷键而引起细菌细胞壁的水解；所述肽聚糖是细菌中一种重要的结构分子。细菌的细胞壁因溶菌酶作用而变弱后，细菌细胞由于渗透压而裂解。溶菌酶存在于许多生物中，如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行动物和哺乳动物。在哺乳动物中，已经从鼻分泌物、唾液、眼泪、肠道、尿和乳中分离出了溶菌酶。该酶切割N-乙酰基胞壁酸的1号碳与N-乙酰基-D-葡糖胺的4号碳之间的糖苷键。在体内，这两种糖聚合形成细胞壁多糖。溶菌酶已被归类为五种不同的糖苷水解酶(GH)家族(CAZy，www.cazy.org)：鸡卵清溶菌酶(GH22)、鹅卵清溶菌酶(GH23)、噬菌体T4溶菌酶(GH24)、Sphingomonas鞭毛卵清(GH73)和Chalaropsis溶菌酶(GH25)。来自GH23和GH24家族的溶菌酶最初从噬菌体知晓，最近才在真菌中鉴定出。已发现溶菌酶家族GH25与其他溶菌酶家族在结构上无关。鸡卵清溶菌酶是商业市场上可获得的主要产品，但其不切割例如Staphylococcusaureus细胞壁中的N,6-O-二乙酰基胞壁酸，因此尤其不能裂解这一重要的人类病原体(MasschalckB,DeckersD,MichielsCW(2002),“Lyticandnonlyticmechanismofinactivationofgram-positivebacteriabylysozymeunderatmosphericandhighhydrostaticpressure”,JFoodProt.65(12):1916-23)。此外，本专利技术涉及一种新颖的鱼饲料组合物，其包含至少一种、优选至少两种或三种选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的活性化合物与至少一种具有溶菌酶活性的微生物多肽的组合作为活性成分。水产养殖中的一个重要因素是周转率。周转率由鱼多快能生长到可捕获的大小来决定。例如，将大西洋鲑鱼(Atlanticsalmon)从幼鲑(当大西洋鲑鱼第一次可被从淡水转移到海水时的生理阶段)饲养到可捕获的大小需要12-18个月。快的周转具有若干积极效果。首先，它有助于现金流。其次，它改善了风险管理。特别地，高死亡率对养鱼者而言是重大的风险。众所周知，失衡的微生物菌群和/或由致病微生物引起的感染会导致死亡率提高。鱼类疾病是常见的，并且在长的生长期内爆发的可能性较高。还存在鱼由于(例如换网时的)意外或由于恶劣天气造成鱼栏残破而逃跑的风险。对于其他农场动物而言，使用抗生素和疫苗来预防疾病发展是公知的。在水产养殖中，抗生素的使用不那么广泛-至少在冷水性水产养殖中如此-这是由于事实上疾病传播得非常快，患病的鱼吃得不多，并且还由于废弃的含药饲料对环境的负面影响。疫苗在可用时被广泛使用，但是它们不是针对所有疾病开发的。作为合成药物的替代品，文献中描述了植物提取物和精油在动物饲料中的用途。例如，专利WO2011/006993描述了精油在鱼饲料中的用途。然而，WO2011/006993没有记载避免由革兰氏阳性微生物引起的感染。此外，在上述公开的例子中，应用精油仅具有有限的功效。因此，水产养殖中仍然需要通过任何预防手段(包括针对革兰氏阳性微生物的抗微生物活性)来预防疾病发展，从而降低死亡率。本申请的专利技术人出乎意料地发现：如上文定义的物质的组合具有用于鱼饲料中的巨大潜力，例如，用于改善饲料转化率(FCR)和/或增重和/或用于调节肠道菌群。此外，专利技术人出乎意料地发现：新颖的鱼饲料组合物还具有针对革兰氏阳性微生物的抗微生物活性，从而导致死亡率降低。本专利技术的活性化合物的独特选择首次允许控制由许多不同病原体引起的许多鱼类疾病。因此，在第一具体实施方式中，本专利技术涉及在鱼饲料中使用至少一种、优选至少两种选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的活性化合物与微生物溶菌酶的组合来改善饲料转化率(FCR)和/或增重和/或(通过调节肠道微生物菌群和/或通过预防由致病微生物引起的、优选由革兰氏阳性微生物引起的疾病)降低死亡率的方法。例如，已经显示：本专利技术的所选化合物(例如：肉桂醛和α-蒎烯与细菌溶菌酶的组合)在抑制Lactococcusgarvieae(一种特别是在冷水性鱼中发现的疾病)的生长方面展示出优异的效果。根据本专利技术的组合还展示出对抗Streptococcusiniae(一种特别是在温水性鱼中发现的疾病)的优异效果。在替代性实施方式中，α-蒎烯和/或α-萜品醇和/或肉桂醛和/或二氢丁香酚和/或丁香酚和/或间甲酚和/或萜品油烯与至少一种具有溶菌酶活性的微生物多肽组合使用，以改善动物饲料消化率和/或通过支持免疫系统功能来维持动物健康。在另一个实施方式中，本专利技术涉及在鱼饲料中使用至少三种选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的活性化合物与至少一种具有溶菌酶活性的微生物多肽的组合来改善饲料转化率(FCR)和/或增重和/或(通过调节肠道微生物菌群和/或通过预防由致病微生物引起的疾病)降低死亡率的方法。在一个优选的实施方式中，α-蒎烯和肉桂醛与细菌溶菌酶组合使用以改善动物饲料消化率和/或通过支持免疫系统功能来维持动物健康。定义术语饲料或饲料组合物是指适合于或旨在被动物摄入的任何化合物、制品、混合物或组合物。FCR可以基于鱼类生长试验来测定，所述试验包括第一处理，其中将至少两种根据本专利技术的化合物的混合物以每kg饲料合适的浓度添加到动物饲料中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.选自α‑蒎烯、α‑萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的至少一种天然活性物质与具有溶菌酶活性的多肽的组合在饲料组合物中用于改善水生动物的饲料转化率和/或日增重的用途。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.13 EP 15189495.31.选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的至少一种天然活性物质与具有溶菌酶活性的多肽的组合在饲料组合物中用于改善水生动物的饲料转化率和/或日增重的用途。2.选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的至少两种天然活性物质与具有溶菌酶活性的多肽的组合在饲料组合物中用于调节水生动物的肠道微生物菌群的用途。3.选自α-蒎烯、α-萜品醇、肉桂醛、二氢丁香酚、丁香酚、间甲酚和萜品油烯的至少两种天然活性物质与具有溶菌酶活性的多肽的组合在饲料组合物中用于降低水生动物死亡率的用途。4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述水生动物是冷水性鱼，例如鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼或鲈鱼。5.根据权利要求1或3中任一项所述的用途，其中所述水生动物是温水性鱼，例如鲤鱼、罗非鱼或鲶鱼。6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述饲料组合物含有α-蒎烯和肉桂醛。7.根据权利要求6所述的用途，其中所述饲料组合物含有浓度均在每Kg饲料10mg-5g之间的α-蒎烯、肉桂醛、二氢丁香酚和间甲酚。8.根据权利要求6所述的用途，其中所述饲料组合物含有浓度均在每Kg饲料0.1g-1g之间的α-蒎烯、肉桂醛、二氢丁香酚和间甲酚。9.权利要求1-8中任一项所述的用途，其中所述微生物溶菌酶是真菌来源的。10.权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述微生物溶菌酶获自或可获自Ascomycota门。11.权利要求1-10中任一项所述的用途，其中所述微生物溶菌酶获自或可获自Pezizomycotina亚门。12.权利要求1-11中任一项所述的用途，其中所述微生物溶菌酶包含一个或更多个选自GH24和GH25的结构域。13.权利要求1-12中任一项所述的用途，其中所述微生物溶菌酶选自：(a)与SEQIDNO:1具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽；(b)SEQIDNO:1的变体，其中所述变体具有溶菌酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、1...

【专利技术属性】
技术研发人员：薇薇安·维尔哈克，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，诺维信专利公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL