一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法，其特征在于：用液氮研磨和甲醇超声提取对毛发样品进行前处理，用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法进行巴比妥类药物检测。本发明专利技术以毛发作为检材，检出时限长，并且抗腐败、易于采取、保存和重复取样，从毛发中提取巴比妥类药物操作简便、回收率高，检测方法检出限低、精确度高，并可对毛发发段中微量的巴比妥类药物含量进行用药时间的追溯。

A method for quantitative detection of barbiturates in hair and its application

The present invention relates to a method for quantitative detection of barbiturates in hair, which is characterized by the use of liquid nitrogen lapping and methanol ultrasonic extraction for preprocessing of hair samples and detection of barbiturates by high resolution liquid chromatography / mass spectrometry. The invention uses hair as a test material, has long detection time limit, and is resistant to corruption, easy to take, preserved and repeated sampling. The extraction of barbiturates from hair is simple, high recovery, low detection limit and high accuracy, and can be used for the trace of barbiturate in hair hair. Back.

【技术实现步骤摘要】
一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法及应用
本专利技术关于生物检测
，尤其涉及一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法。
技术介绍
巴比妥类镇静催眠药属于巴比妥酸的衍生物，其应用范围可以从轻度镇静到完全麻醉，还可以用作抗焦虑药、安眠药、抗痉挛药，但长期使用则会导致成瘾性。虽然巴比妥类药物目前在临床上已很大程度上被苯二氮类药物所替代，但在全身麻醉或癫痫的治疗中仍有使用。现有技术中对巴比妥的检验对象多为血液、尿液和唾液，检测结果受药物半衰期影响较大，肝药酶诱导剂或抑制剂、肾功能等均会对检测结果造成影响，并且所得检测结果仅能反应采样时的巴比妥浓度，当用药发生数周或数月之前时，无法根据血液、尿液和唾液的检测结果追溯用药时间。毛发中虽然也会存在代谢，但巴比妥是酸性药物，不易进入头发，不易检出，对毛发样品的前处理涉及酸水解、碱消化、酶消化法、液液萃取、固相萃取等步骤，过程繁琐，回收率低、检出限高。
技术实现思路
针对现有技术中对毛发中巴比妥类药物检测结果不能追溯用药时间、毛发提取操作繁琐、回收率低、检出限高等技术问题，本专利技术提供了一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法。以及，本专利技术还提供了一种追溯巴比妥类药物用药时间的方法。以及，本专利技术还提供了上述方法用于法医判断迷奸案件作案时间的应用。为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法，用液氮研磨和甲醇超声提取对毛发样品进行前处理，用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法进行巴比妥类药物检测。相对于现有技术而言，本专利技术的检测对象为毛发，与现有技术对血液、尿液、唾液等生物检材相比，毛发检材的检出时限长，可反映几周至数月的用药情况，并且抗腐败、易于采取、保存和重复取样。采用液氮研磨的方法，使毛发样品在低于其脆化点的温度条件下被粉碎处理，同时能够有效避免研磨过程的过热问题，增加目标物在处理过程中的稳定性、提高回收率，而且显著缩短了样品前处理时间。再进行甲醇超声提取后，可进一步提高回收率。该前处理方法操作快速简单、回收率高，尤其适用于巴比妥类酸性药物的分离提取。高分辨液相色谱/质谱联用方法中的高分辨液相色谱能够同时检测多种物质，且检出限低，可以对多种巴比妥类药物进行精确定量检测，使结论更为可靠。以及，本专利技术实施例还提供了一种追溯巴比妥类药物用药时间的方法，包括以下步骤：将待测毛发样品进行分段，用上述方法对每段所述毛发样品进行检测，得到每段所述毛发样品中巴比妥类药物的含量，根据所述含量推测巴比妥类药物的用药时间。毛发是从毛囊中生长出的特化死细胞，不进行新陈代谢，因此巴比妥类药物通过毛囊的代谢进入毛发中后，在毛发中的残留时间会很长。以头发为例，成年健康人的头发生长速度约为1cm/月，因此可以通过每段头发中巴比妥类药物的浓度来进行推测，追溯巴比妥类药物的用药时间，而现有技术中对血液、尿液、唾液等进行检测只能反映出采样时间的用药情况，并不能进行用药时间的追溯。以及，本专利技术实施例还提供了上述方法用于法医判断迷奸案件作案时间的应用。通过上述方法，根据每段头发中的巴比妥含量以及头发的生长速度，即可追溯作案时间，判断单次或长期巴比妥类药物的用药频度和用药史。附图说明图1为巴比妥多反应监测色谱图；图2为苯巴比妥多反应监测色谱图；图3为异戊巴比妥多反应监测色谱图；图4为司可巴比妥多反应监测色谱图；图5为内标阿普巴比妥多反应监测色谱图；图6为巴比妥二级质谱图；图7为苯巴比妥二级质谱图；图8为异戊巴比妥二级质谱图；图9为司可巴比妥二级质谱图；图10为内标阿普巴比妥二级质谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法，用液氮研磨和甲醇超声提取对毛发样品进行前处理，用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法进行巴比妥类药物检测。相对于现有技术而言，本专利技术缩短了操作时间，显著提高了毛发中巴比妥类药物的回收率和稳定性。进一步地，该方法包括以下步骤：步骤a、将毛发样本进行清洁处理，得到待测样本；步骤b、将所述待测样本进行液氮研磨得到粉碎样本，采用甲醇对所述粉碎样本进行超声提取，得到待测溶液；步骤c、用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法对步骤b所述待测溶液进行检测，获取毛发中巴比妥类药物的高分辨液相色谱/质谱联用的检测数据，计算毛发中巴比妥类药物的含量。以上操作步骤简单，易于操作，检测不受检测时间的影响，既可以检测现取检材，也可以对保留数周至数月的检材进行检验。具体的，上述步骤a中，所述清洁处理的具体操作为：将毛发样本，依次经过1wt％洗洁精溶液、纯化水、丙酮、纯化水的洗涤后，置于室温晾干。非极性溶剂丙酮作为去除污染的溶剂，具有不膨胀毛发的优点，可避免极性溶剂因膨胀毛发而促进结合物过早溶出，影响检测结果。上述步骤b中，所述液氮研磨的具体操作为：将所述待测样本置于液氮温度中预冷2.5～3.5min，以9～12次/s的频率研磨1.5～2.5min后，静置50～80s，再次预冷，重复操作1～2次。经过该过程的研磨后，待测样本会碎成接近粉末的状态，有利于提高后续甲醇提取的提取效率，提高回收率。本专利技术优选采用冷冻研磨机进行液氮研磨的操作，将毛发置于冷冻研磨机的研磨管，通过撞子快速的撞击在液氮低温环境下进行研磨，得到接近粉末状态的粉碎样本。所述甲醇超声提取的具体操作为：向粉碎样本中加入相当于粉碎样本重量80～120倍的甲醇，超声25～35min后，在3～5℃条件下离心9～12min，取上清液，在氮气流下吹干，用流动相和内标溶液的混合溶液溶解后，得待测溶液；其中，所述离心的转速为11000～13000rpm；所述混合溶液中，所述流动相和所述内标溶液的体积比为9∶1，所述流动相为步骤c中所述高分辨液相色谱/质谱联用分析方法中所述高分辨液相色谱的色谱条件中的流动相，所述内标溶液为阿普巴比妥甲醇溶液。上述步骤c中所述高分辨液相色谱/质谱联用分析方法中，所述高分辨液相色谱的色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A为8～12mmol/L乙酸铵缓冲液，流动相B为乙腈，进行线性梯度洗脱，所述线性洗脱梯度如下：优选的色谱柱、内标以及流动相，具有较高的灵敏度和准确性、重现性。优选的缓冲液浓度和洗脱梯度可以使不同的巴比妥类药物及内标有更佳的出峰时间、峰形和分离效果，便于比较观察，提高检测的准确度。进一步优选的，所述质谱的分析测定模式为多反应离子监测模式，该模式具有特异性强、灵敏度高、准确度高、重现性好、线性动态范围宽、自动化高通量的优点，可以获得更准确的检测结果。本专利技术实施例还提供一种追溯巴比妥类药物用药时间的方法，将待测毛发样品进行分段，用上述方法对每段所述毛发样品进行检测，得到每段毛发样品中巴比妥类药物的含量，根据所述含量推测巴比妥类药物的用药时间。从而能够追溯单次或长期巴比妥类药物的用药频度和用药史。上述追溯巴比妥类药物用药时间的方法通过追溯单次或长期巴比妥类药物的用药史，来用于法医判断迷奸案件作案时间，在迷奸类案件的法医毒物鉴定中有较高的应用价值为了更好的说明本专利技术实施方式，下面通过实施例做进一步的举例说明。实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法，其特征在于，用液氮研磨和甲醇超声提取对毛发样品进行前处理，用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法检测所述毛发样品中的巴比妥类药物。

【技术特征摘要】
1.一种毛发中巴比妥类药物定量检测方法，其特征在于，用液氮研磨和甲醇超声提取对毛发样品进行前处理，用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法检测所述毛发样品中的巴比妥类药物。2.根据权利要求1所述的毛发中巴比妥类药物定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a、将毛发样本进行清洁处理，得到待测样本；步骤b、将所述待测样本进行液氮研磨得到粉碎样本，采用甲醇对所述粉碎样本进行超声提取，得到待测溶液；步骤c、用高分辨液相色谱/质谱联用分析方法对步骤b所述待测溶液进行检测，获取毛发中巴比妥类药物的高分辨液相色谱/质谱联用的检测数据，计算毛发中巴比妥类药物的含量。3.根据权利要求2所述的毛发中巴比妥类药物定量检测方法，其特征在于，步骤c中所述高分辨液相色谱/质谱联用分析方法中，所述高分辨液相色谱的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A为8～12mmol/L乙酸铵缓冲液，流动相B为乙腈，进行线性梯度洗脱，所述线性洗脱梯度如下：4.根据权利要求2所述的毛发中巴比妥类药物定量检测方法，其特征在于，步骤b中所述液氮研磨的具体操作为：将所述待测样本置于液氮温度中预冷2.5～3.5min，以9～12次/s的频率研磨1.5～2.5min后，静置50～80s，再次预冷，重复操作1～2次；和/或步骤b中所述甲醇超声提取的具体操作为：向所述粉碎样本中加入相当于粉碎样本重量80～120倍的甲醇，超声25～35min后，在3～5℃条件下离...

【专利技术属性】
技术研发人员：文迪，马春玲，向平，于峰，
申请(专利权)人：河北医科大学，
类型：发明
国别省市：河北,13