本发明专利技术公开了一种高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法，其采用的流动相为pH=4.0～6.0的磷酸二氢钾缓冲液‑乙腈混合溶液；采用稀释剂配制溶液；所述稀释剂为经盐酸溶液调节后的pH=2.0～3.5的流动相；所述流动相中磷酸二氢钾缓冲液与乙腈的体积比为35∶65。本发明专利技术经过大量实验最终发现，采用一定pH的流动相作为稀释剂制备各种溶液能够有效避免2～5min溶剂峰的干扰，从而对于样品中本身不含2～5min杂质的左卡尼汀能够准确计算出左卡尼汀含量，而对于样品中本身含有2‑5min杂质的左卡尼汀则能够同时准确计算出左卡尼汀和2‑5min杂质的含量。
Determination of related substances in L-carnitine and its injection by HPLC
The present invention discloses a method for the determination of related substances in levocarnitine and its injection by high performance liquid chromatography. The flow phase is a mixed solution of pH=4.0 to 6 potassium dihydrogen phosphate buffer solution of acetonitrile; a diluent is used to prepare a solution; the diluent is a liquid phase of pH=2.0 to 3.5 after a hydrochloric acid solution; The volume ratio of potassium dihydrogen phosphate buffer to acetonitrile in mobile phase is 35: 65. After a large number of experiments, it is found that the use of a certain pH mobile phase as a diluent to prepare various solutions can effectively avoid the interference of 2 ~ 5min solvent peak, so that levocarnitine content without 2 to 5min impurities in the sample can be accurately calculated, and the sample itself contains 2 5min impurities. L-carnitine can simultaneously calculate the content of L-carnitine and 2 5min impurities.
【技术实现步骤摘要】
高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法。
技术介绍
左（旋）卡尼汀，又称左（旋）肉碱，其化学名称为（L-3-羧基-2-羟基丙基）三甲基铵内盐，是一种促使脂肪转化为能量的类氨基酸，对人体无毒副作用，为脂肪代谢所必需，可用于治疗慢性肾功能衰竭、心肌病、冠心病和有机酸血症等，还可作为慢性肝病的辅助治疗药物，目前广泛应用于营养保健品、医疗、食品添加剂、饲料添加剂等领域。目前，采用高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液有关物质时，存在着溶剂峰干扰问题，也即，不管是样品溶液还是空白溶液，在2-5min处均有色谱峰出现，而样品溶液的峰面积却明显大于空白溶液，这样就会存在以下两个问题：（1）若样品中不存在2-5min杂质，这样会导致计算左卡尼汀含量时将多出的峰面积计算为2-5min杂质，从而影响左卡尼汀含量的正确计算；（2）若样品本身即存在2-5min杂质，这样不仅会导致影响左卡尼汀含量的正确计算，还导致杂质含量的计算。目前，尚未发现针对上述2-5min溶剂峰干扰的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述问题，提供一种能够有效避免2-5min溶剂峰干扰左卡尼汀检测的高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法。实现本专利技术目的的技术方案是：一种高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法，其采用的流动相为pH=4.0～6.0的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈混合溶液；采用稀释剂配制溶液；所述稀释剂为经盐酸溶液调节后的pH=2.0～3.5的流动相。所述流动相中磷酸二氢钾缓冲液与乙腈的体积比为20∶80～50∶50，优选为35∶65。所述流动相的配制方法如下：将0.01mol/L～0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液先用酸碱调节剂调节pH=4.0～6.0，得到磷酸二氢钾缓冲液，再与乙腈按照上述体积比混合得到；或者先将0.01mol/L～0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与乙腈按照上述体积比混合后，再用酸碱调节剂调节pH=4.0～6.0。所述磷酸二氢钾溶液的浓度优选为0.05mol/L。所述高效液相色谱其它条件如下：色谱柱：氨基键合硅烷为填充剂的色谱柱；规格：250mm×4.6mm×5μm。柱温：10～30℃。紫外检测波长：205nm。进样量：10～100μL。流动相流速：0.8～1.2mL/min。本专利技术具有的积极效果：本专利技术经过大量实验最终发现，采用一定pH的流动相作为稀释剂制备各种溶液能够有效避免2～5min溶剂峰的干扰，从而对于样品中本身不含2～5min杂质的左卡尼汀能够准确计算出左卡尼汀含量，而对于样品中本身含有2-5min杂质的左卡尼汀则能够同时准确计算出左卡尼汀和2-5min杂质的含量。附图说明图1为实施例1记录并呈现在一起的色谱图。图2为对比例1记录并呈现在一起的色谱图。图3为实施例2记录并呈现在一起的色谱图。图4为实施例3记录并呈现在一起的色谱图。具体实施方式（实施例1）一、色谱条件。色谱柱：氨基键合硅烷为填充剂的色谱柱，具体采用的是APS-2Hypersil（250mm×4.6mm×5μm）。柱温：30℃。紫外检测波长：205nm。进样量：50μL。流动相流速：1.0mL/min。流动相：pH=5.5的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈混合溶液（体积比为35∶65）。配置方法如下：将6.8g的磷酸二氢钾溶解于1L的水中，得到0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液，然后用氢氧化钠溶液调节pH=5.5，得到磷酸二氢钾缓冲液，接着与乙腈按照35∶65的体积比混合得到。稀释剂：用盐酸调节流动相pH=2.0。二、溶液的配制。1、标准品溶液：精密称取0.05g的左卡尼汀标准品（质量分数为100%）并置于10mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为标准品溶液。2、空白溶液：取稀释剂作为空白溶液。三、方法与结果。分别将标准品溶液和空白溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，并将得到的两张色谱图呈现在一起，具体见图1。由图1可以看出：采用本专利技术一定pH的稀释剂配制的标准品溶液与空白溶液在2～5min出现的色谱峰基本能够重叠，该结果意味着2～5min均为溶剂峰，而不含2～5min杂质，该结果与不含杂质的左卡尼汀标准品完全吻合。（对比例1）一、色谱条件。除了没有配制稀释剂外，其它同实施例1。二、溶液的配制。1、对比标准品溶液：精密称取0.05g的左卡尼汀标准品（质量分数为100%）并置于10mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对比标准品溶液。2、对比空白溶液：取流动相作为对比空白溶液。三、方法与结果。分别将对比标准品溶液和对比空白溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，并将得到的两张色谱图呈现在一起，具体见图2。由图2可以看出：直接采用pH=5.5的流动相配制的对照标准品溶液与对照空白溶液在2～5min出现的色谱峰有较大差异，该结果容易认定对照标准品溶液存在2-5min杂质，该结果与不含杂质的左卡尼汀标准品相矛盾。（实施例2）一、色谱条件。同实施例1。二、溶液的配制。1、系统适用性溶液：取主杂质标准品（质量分数为100%）适量，加水溶解并稀释至浓度为1mg/mL，精密量取1mL并置于10mL容量瓶中，然后加入0.1g的左卡尼汀标准品（质量分数为100%），再用稀释剂稀释至刻度，作为系统适用性溶液。2、左卡尼汀原料药样品溶液：精密称取0.05g的左卡尼汀原料药样品并置于10mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为左卡尼汀原料药样品溶液。3、主杂质对照溶液：取主杂质标准品（质量分数为100%）适量，加水溶解并稀释至浓度为0.25mg/mL，精密量取1mL并置于10mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为主杂质对照溶液。4、空白溶液：取稀释剂作为空白溶液。其中，主杂质的化学名称为（E）-4-（三甲基氨基）-2-丁烯酸内盐【也称（Z）-4-（三甲基氨基）-2-丁烯酸内盐】；结构式如下：。三、方法与结果。分别将系统适用性溶液、左卡尼汀原料药样品溶液、主杂质对照溶液以及空白溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，并将得到的四张色谱图呈现在一起，具体见图3。由图3可以看出：采用本专利技术一定pH的稀释剂配制的各种溶液在2～5min出现的色谱峰基本能够重叠，该结果意味着各种溶液均不含2～5min杂质，该结果与只含主杂质标准品和左卡尼汀标准品的系统适用性溶液、只含主杂质标准品的主杂质对照溶液完全吻合，并表明左卡尼汀原料药样品溶液中不含2～5min杂质，且主杂质也不明显。（实施例3）一、色谱条件。同实施例1。二、溶液的配制。1、系统适用性溶液：同实施例2。2、左卡尼汀注射液样品溶液：精密量取0.25mL左卡尼汀注射液样品（规格为5mL，含1.0g左卡尼汀）并置于10mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为左卡尼汀注射液样品溶液。3、主杂质对照溶液：同实施例2。4、空白溶液：取稀释剂作为空白溶液。三、方法与结果。分别将系统适用性溶液、左卡尼汀注射液样品溶液、主杂质对照溶液以及空白溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，并将得到的四张色谱图呈现在一起，具体见图4。由图4可以看出：采用本专利技术一定pH的稀释剂配制的各种溶液在2～5min出现的色谱峰基本能够重叠，该结果意味着各种溶液均不含本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法，其采用的流动相为pH=4.0～6.0的磷酸二氢钾缓冲液‑乙腈混合溶液；其特征在于：采用稀释剂配制溶液；所述稀释剂为经盐酸溶液调节后的pH=2.0～3.5的流动相。
【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液中有关物质的方法，其采用的流动相为pH=4.0～6.0的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈混合溶液；其特征在于：采用稀释剂配制溶液；所述稀释剂为经盐酸溶液调节后的pH=2.0～3.5的流动相。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液的方法，其特征在于：所述流动相中磷酸二氢钾缓冲液与乙腈的体积比为20∶80～50∶50。3.根据权利要求2所述的高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液的方法，其特征在于：所述流动相中磷酸二氢钾缓冲液与乙腈的体积比为35∶65。4.根据权利要求1至3之一所述的高效液相色谱法测定左卡尼汀及其注射液的方法，其特征在于所述流动相的配制方法如下：将0.01mol/L～0.1mol/L的磷...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹文娟，张苏利，徐芳芳，
申请(专利权)人：常州兰陵制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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